国家高技术研究发展计划(2003AA2Z3364)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：邹全明张卫军吴超刘开云袁小澎更多>>
- 相关机构：第三军医大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌多亚单位融合蛋白疫苗的构建及免疫特性被引量：2
- 2007年
- 目的构建幽门螺杆菌HspA、HpaA、UreB多亚单位融合蛋白疫苗,并检测其免疫原性及免疫保护性。方法用PCR从Hp基因组中分别扩增HspA、HpaA、UreB3个基因片段,重叠延伸PCR将其构建成融合基因hhu,并克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,经酶切、测序验证后,转化E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,AKATA纯化仪纯化。纯化后蛋白口服免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体,末次免疫后进行攻毒试验,检测其免疫保护性。结果酶切及测序证实已成功构建HspA、HpaA、UreB融合基因的表达载体phhu,SDS-PAGE及Western blot证实融合蛋白的表达,表达率为26·8%,纯化的融合蛋白纯度大于90%,口服免疫小鼠可产生特异性抗体,保护率达89·6%。结论所获得的融合蛋白保持了亚组分蛋白各自的免疫原性和免疫保护性,为幽门螺杆菌多亚单位疫苗的深入研究奠定了基础。
- 袁小澎邹全明柏杨张卫军郭刚谢庆华刘开云吴超
- 关键词：幽门螺杆菌融合蛋白免疫保护性
- 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位功能片段构建及免疫原性研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建表达免疫活性的尿素酶功能片段原核表达体系。方法根据尿素酶B基因序列以及文献报道的尿素酶活性中心区域,primer5.0设计相应的引物,以Hp基因组为模版,PCR扩增拟表达的尿素酶活性片段,经测序证实后将片段亚克隆于原核表达载体pET28中,转入宿主菌BL21后IPTG诱导表达后,Tris-Tricine PAGE电泳及抗Hp特异性抗体western-tbollting鉴定目的蛋白表达。结果PCR从Hp基因组中扩增出414bp目的片段,经酶切及测序证实构建了功能片段表达阳性重组子,命名为pU414,IPTG诱导后电泳分析可以发现相应分子量附近出现可疑目的蛋白,能够被特异性血清识别。结论成功建立尿素酶活性功能片段蛋白表达载体,为下一步实验研究奠定基础。
- 袁小澎邹全明吴超张卫军郭鹰
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶免疫原性
- 沙鼠IgG兔抗血清的制备及其在IgG抗体检测中的应用被引量：4
- 2006年
- 目的用纯化的蒙古沙鼠血清IgG制备相应兔抗血清,并用于幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)疫苗免疫后沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。方法采用饱和硫酸铵沉淀法和Q sepharose high performance阴离子交换层析法纯化蒙古沙鼠血清IgG,免疫日本大白耳兔制备兔抗沙鼠IgG抗血清并进行rProtein A亲和纯化,建立间接ELISA方法用于检测Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠后血清抗原特异性IgG水平。结果以纯化的蒙古沙鼠血清IgG(纯度大于98%)免疫日本大白耳兔获得相应兔抗血清,经亲和层析后其纯度大于90%,回收率约为85%,双扩效价为1:16,ELISA效价为1:320 000;ELISA检测结果显示Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠于第2次免疫后产生高水平IgG,第4次免疫后第7天IgG水平达到高峰,随后几周仍然保持高水平。结论所制备的兔抗沙鼠IgG抗体可以用于蒙古沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。
- 吴超张卫军刘开云邹全明
- 关键词：抗血清蛋白纯化ELISA
