国家自然科学基金(30972392)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 相关作者：张杰伟魏建华陈亚娟管阳朱丹更多>>
- 相关机构：北京市农林科学院北京市农林科学院农业生物技术研究中心首都师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 双元细菌人工染色体基因组文库研究进展
- 2013年
- 酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)是伴随着人类基因组计划的实施而产生的,这些大片段基因克隆载体的应用推动了分子生物学、遗传学等学科的快速发展。以农杆菌介导的直接转化植物为代表的双元细菌人工染色体(BIBAC)载体的发展,加速植物基因组的研究,成为植物基因组分析、基因功能鉴定、染色体结构与功能关系研究的重要工具。介绍了人工染色体文库的发展史,根据建库经验,着重阐述了BIBAC文库的构建、鉴定与应用。
- 朱丹张杰伟陈亚娟张少斌魏建华
- 关键词：人工染色体基因组文库
- 毛白杨翻译起始因子基因PtoeIF5A2的克隆及其表达特性分析被引量：2
- 2014年
- 真核翻译起始因子5A(eIF5A)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。以2个月的毛白杨‘BJHR01’幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,克隆得到PtoeIF5A2(GenBank登录号:HQ529480)基因全长cDNA序列。该基因包含483 bp开放读码框,编码160个氨基酸,预测蛋白分子质量为18 kDa,等电点为5.76。Real-Time qRT-PCR分析表明:PtoeIF5A2在6个月毛白杨幼苗叶片中的表达量最高,约为其在幼根中表达量的5倍。PtoeIF5A2响应了干旱、ABA(200μmol·L-1)、低温(4℃),尤其是NaCl(300 mmol·L-1)胁迫。在NaCl胁迫24 h后,PtoeIF5A2的表达量上调25倍,结合其启动子中含有6个病原体与高盐响应(GT-1 box)元件,推测该基因在响应高盐胁迫时起着重要作用。
- 管阳王宏芝张杰伟陈亚娟朱丹丁莉萍魏建华
- 关键词：毛白杨盐胁迫
- 杨树PtoCIPK2基因的克隆和表达分析被引量：1
- 2013年
- 钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CIPKs)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。以2个月龄的杨树(Populus tomentosa Carr.cv‘BJHR01’)幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,克隆得到PtoCIPK2(GeneBank登录号:KF225478)基因全长cDNA序列。该基因包含1 395 bp开放读码框,编码464个氨基酸,预测蛋白分子量为52.8 ku,等电点为9.19。蛋白质结构分析表明,PtoCIPK2具有保守的蛋白激酶结构域和NAF结构域。Real-Time qRT-PCR分析表明,PtoCIPK2在杨树幼苗主根、茎和叶片中均有表达,在叶片中的表达量最高,约为其在茎中表达量的4倍。PtoCIPK2响应了NaCl(300 mmol/L)、干旱和ABA(200μmol/L)的胁迫。在NaCl和干旱胁迫12 h后,PtoCIPK2的表达量分别上调了28和8倍,推测该基因在响应高盐和干旱胁迫时起重要作用。
- 张杰伟管阳李瑞芬陈亚娟朱丹魏建华
- 关键词：蛋白激酶杨树盐胁迫干旱胁迫
- 毛白杨PtoeIF5A4的原核表达、纯化及鉴定
- 2014年
- 为获取大量高纯度的毛白杨PtoeIF5A4蛋白以便研究其特性和生物学功能,以pGEM-T Easy-PtoeIF5A4质粒为模板,PCR扩增毛白杨PtoeIF5A4基因的cDNA编码区,测序正确后,经酶切将其插入到原核表达载体pET28a上,然后将表达载体转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经不同浓度IPTG诱导培养后发现,0.1 mmol/L IPTG,28℃诱导4 h时目的蛋白最多,且该重组蛋白主要以可溶性的形式存在。采用亲和纯化从可溶性蛋白中纯化到大小为18 kD的蛋白条带。Western blotting分析发现亲和纯化所得蛋白可以与His单克隆抗体发生免疫交叉反应,表明纯化所得蛋白是PtoeIF5A4重组蛋白。
- 张杰伟管阳朱丹陈亚娟丁莉萍王宏芝魏建华
- 关键词：毛白杨原核表达蛋白纯化
