国家自然科学基金(81101408)
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
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- 激活大麻素2型受体在LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制被引量：2
- 2019年
- 目的探讨激活大麻素2型受体(Cannabinoid receptor 2,CB2R)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制。方法将巨噬细胞以1×105/mL的密度接种于6孔培养板(2 mL/孔),采用随机数字表法将其分为4组(n=6):对照组(C组)、LPS组(LPS组)、LPS+CB2R激动剂HU308组(LPS+HU308组)、LPS+CB2R激动剂HU308+3-甲基腺苷组(LPS+HU308+3-MA组)。LPS组、LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为1 μg/mL的LPS,孵育15 min时,LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 mmol/L的3-MA,继续孵育15 min,LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 μmol/L的HU308孵育24 h。采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-18的浓度;采用RT-PCR法检测ICAM-1和NLRP3 mRNA的表达水平,采用western blot法检测LC3和Beclin1的表达水平,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果与C组比较,LPS组TNF-α[(228.86±10.20) pg/mL vs (140.05±5.54) pg/mL、IL-1β[(363.62±8.14) pg/mL vs (244.82±9.11) pg/mL]和IL-18[(293.28±13.57) pg/mL vs.(202.84±9.54) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(5.88±0.32) vs.(1.00±0.03)]和NLRP3[(8.07±0.93) vs.(1.01±0.05)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.50±0.03) vs.(0.40±0.06)]和Beclin1[(0.51±0.04) vs.(0.16±0.03)]表达上调(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+HU308组TNF-α[(165.44±7.07) pg/mL]、IL-1β[(272.09±3.35) pg/mL]和IL-18[(220.41±6.01) pg/mL]的浓度降低(均P<0.05),ICAM-1[(3.21±0.35)]和NLRP3[(1.54±0.30)] mRNA表达降低(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.71±0.03)]和Beclin1[(0.71±0.02)]表达上调(均P<0.05);与LPS+HU308组比较,LPS+HU308+3-MA组TNF-α[(197.06±5.59) pg/mL]、IL-1β[(318.98±11.54) pg/mL]和IL-18[(243.33±8.71) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(4.04±0.21)]和NLRP3 [(5.87±0.77)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.44±0.08)]和Beclin1[(0.32±0.03)]表达下调(均P<0.05)。结论激活大麻素2型受体可抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌,�
- 袁清红刘安鹏刘强胜郑菲张宗泽王焱林詹佳
- 关键词：炎症因子分泌RAW264.7巨噬细胞
- 盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时肺组织β-arrestin-2表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时肺组织3-抑制蛋白-2（β-arrestin-2）表达的影响。方法健康雌性昆明小鼠30只，6周龄，体重18～20g，采用随机数字表法，将其随机分为3组（n=10）：假手术组（S组）、脓毒症组（CLP组）和盐酸戊乙奎醚预先给药组（PHC组）。CLP组和PHC组采用盲肠结扎并穿孔法制备脓毒症模型。PHC组于模型制备前1h时腹腔注射盐酸戊乙奎醚0．45mg／kg，S组和CLP组于模型制备前1h时腹腔注射等容量生理盐水。模型制备后12h时，采血和收集肺泡灌洗液测定肺通透性指数，采用化学比色法测定肺组织MPO活性，采用ELISA法测定肺组织IL-6含量，采用Westernblot法测定肺组织β—arrestin-2蛋白表达，采用RT-PCR法测定肺组织β-arrestin-2mRNA表达。结果与S组比较，CLP组肺通透性指数、肺组织MPO活性和IL-6含量均升高，肺组织β—arrestin-2蛋白表达下调，β—arrestin-2mRNA表达上调（P〈0．05），PHC组肺通透性指数、肺组织MPO活性和IL。6含量均升高，肺组织β—arrestin-2蛋白表达上调，β—arrestin-2mRNA表达下调（P〈0．05）。与CLP组比较，PHC组肺通透性指数、肺组织MPO活性和IL-6含量均降低，肺组织β—arrestin-2蛋白表达上调，p—arrestin-2mRNA表达下调（P〈0．05）。结论盐酸戊乙奎醚预先给药减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制可能与上调肺组织β—arrestin-2的蛋白表达有关。
- 李进杰肖飞詹佳张宗泽陈凯王焱林韩毅
- 关键词：胆碱能拮抗剂抑制蛋白脓毒症
- M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用被引量：1
- 2018年
- 目的 评价M3受体在盐酸戊乙奎醚(PHC)减轻内毒素(LPS)诱导人肺微血管内皮细胞损伤中的作用.方法 正常人肺微血管内皮细胞和M3 shRNA转染人肺微血管内皮细胞,以1×105个∕ml的密度接种于6孔板(2 ml∕孔)或培养瓶(4 ml∕瓶)中,采用随机数字表法分为5组(n=5):对照组(C组)、LPS组、PHC+LPS组(P+LPS组)、LPS+M3 shRNA转染组(LPS+shRNA组)和PHC+LPS+M3 shRNA转染组(P+LPS+shRNA组).C组不给予药物处理;余各组均加入终浓度为0.1μg∕ml LPS;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于加入LPS前1 h加入PHC 2μg∕ml;LPS+shRNA组和P+LPS+shRNA组以含2.5 nmol∕L M3受体shRNA的质粒转染细胞.加入LPS后1 h时,采用流式细胞仪测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的含量;免疫荧光法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达;Western blot法检测NF-κB p65和IκB的表达;ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量;实时定量PCR法分别检测加入LPS后10、30和60 min时M3受体mRNA表达水平.结果 与C组比较,LPS组和P+LPS组F-actin含量降低,VE-cadherin和IκB表达下调,TNF-α和IL-6含量升高,MLCK和NF-κB p65表达上调(P<0.05);与C组比较,LPS组M3受体mRNA表达上调(P<0.05),P+LPS组差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P+LPS组和LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组F-actin含量升高,VE-cadherin和IκB表达上调,TNF-α和IL-6浓度降低,MLCK、NF-κB p65和M3受体mRNA表达下调(P<0.05).结论 PHC可通过干扰M3受体,抑制NF-κB介导炎性反应,减轻LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤.
- 刘强胜颜学滔刘安鹏袁清红沈石文郑菲张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：胆碱能拮抗剂内毒素类内皮细胞
- 盐酸戊乙奎醚对脓毒症小鼠肺血管内皮细胞黏附分子-1和髓过氧化物酶影响被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对脓毒症小鼠肺组织血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平、髓过氧化物酶(MPO)活性和β抑制蛋白-1(β-arrestin-1)表达的影响。方法:建立脓毒症小鼠模型,实验动物随机分为假手术组、盲肠结扎穿孔模型组(CLP组)和盐酸戊乙奎醚组(PHC组),每组10只。各组小鼠于造模12h时间点采血检测血乳酸水平,收集肺组织检测VCAM-1水平、MPO活性和β-arrestin-1mRNA的表达。结果:与假手术组比较,CLP组血乳酸值、肺VCAM-1水平和MPO活性升高,β-arrestin-1mRNA表达降低;与CLP组比较,PHC组可降低血乳酸值、肺VCAM-1水平和MPO活性,而增加β-arrestin-1mRNA表达。结论:盐酸戊乙奎醚预处理,可以通过上调β-arrestin-1的表达,从而降低VCAM-1水平和MPO活性,减轻脓毒症小鼠肺损伤。
- 詹佳肖飞李进杰王焱林王轶芃张宗泽
- 关键词：盐酸戊乙奎醚髓过氧化物酶脓毒症
- 盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时β-抑制蛋白-1表达的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时β-抑制蛋白-1表达的影响。方法健康雌性昆明小鼠30只，体重18～20g，采用随机数字表法，将其分为3组（n=10）：假手术组（s组）、脓毒症组（CLP组）和盐酸戊乙奎醚组（PHCD组）。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。PHCD组于造模前1h腹腔注射盐酸戊乙奎醚0．45mg／kg，S组和CLP组给予等容量生理盐水。造模后12h，收集肺泡灌洗液（BALF），测定总蛋白浓度；取肺组织，行肺损伤评分，测定肺湿，干重（W／D）比和肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）、β-抑制蛋白-1的表达。结果与s组比较，CLP组和PHCD组肺损伤评分、肺W／D比和BALF总蛋白浓度、肺组织MLCK表达升高，VE—cadherin表达降低，CLP组β-抑制蛋白-1表达降低，PHCD组β-抑制蛋白-1表达升高（P〈0．05或0．01）；与CLP组比较，PHCD组肺损伤评分、肺W／D比和BALF总蛋白浓度、肺组织MLCK表达降低，VE-cadherin和β-抑制蛋白-1表达升高（P〈0．05或0．01）。结论盐酸戊乙奎醚预先给药可通过上调β-抑制蛋白-1的表达，降低肺微血管通透性，从而减轻脓毒症小鼠急性肺损伤。
- 詹佳李进杰肖飞王焱林张宗泽王轶芃
- 关键词：胆碱能拮抗剂抑制蛋白类脓毒症
- β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞MAPK信号通路激活中的作用被引量：3
- 2016年
- 目的探讨β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路激活中的作用。方法将人肺微血管内皮细胞以1×10^5个／ml的密度接种于6孔板（2ml／孔）或培养瓶（4ml／瓶）中，采用随机数字表法，将其分为5组（n=20）：空质粒转染组（C组）、LPS＋空质粒转染组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋LPS＋空质粒转染组（P＋LPS组）、LPS＋β-抑制蛋白-1短发夹RNA（shRNA）转染组（LPS＋shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋LPS＋β-抑制蛋白-1shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）。以空质粒1．5μg或含15nmol／L β-抑制蛋白-1shRNA的质粒转染细胞后，孵育24h时，LPS组和LPS＋shRNA组加入终浓度为0．1μg／ml的LPS孵育1h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于加入终浓度为2μg／ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1h时加入终浓度为0．1μg／ml的LPS孵育1h。采用流式细胞仪检测纤维状肌动蛋白（F-actin）表达水平，采用免疫荧光化学法检测肌球蛋白轻链激酶（MLCK）和血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）的表达水平，采用Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK1／2）和磷酸化c—Jun氨基末端激酶（p-JNK）的表达水平。采用RT—PCR法检测β-抑制蛋白-1mRNA表达水平。结果与c组比较，LPS组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调，MLCK、p-ERK1／2和p-JNK的表达上调，P＋LPS组细胞p-ERK1／2和p-JNK表达上调（P〈0．05），其余指标表达差异无统计学意义（P〉0．05）；与LPS组比较，P＋LPS组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达上调，MLCK、p-ERKI／2和p-JNK的表达下调，LPS＋shRNA组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调，MLCK和p-JNK的表达上调（P〈0．05）；与P＋LPS组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞F—actin、VE—cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调，MLCK、p-ERK1／2和p-
- 郑菲王轶芃张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：抑制蛋白类胆碱能拮抗剂内毒素类内皮细胞细胞JNK丝裂原活化蛋白激酶类
- p38MAPK信号通路在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞，以1×104／ml密度接种于96孔培养板（100μ／孔）或24孔培养板（3ml／孔），以1×106／ml密度接种于培养瓶（5ml／瓶），采用随机数字表法，将其随机分为4组（n=23）：正常对照组（C组）、脂多糖（LPS）组（L组）、盐酸戊乙奎醚组（P组）和盐酸戊乙奎醚＋LPS组（PL组），P组和PL组加入终浓度为2μg／ml的盐酸戊乙奎醚，L组和PL组加人终浓度为1μg／ml的LPS，PL组于加入盐酸戊乙奎醚后1h加入LPS。加入LPS后24h时，收集细胞，测定磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）和p38MAPK的表达水平，以二者比值反映p38MAPK激活程度，并测定细胞活力、NO含量和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达。结果与C组比较，L组细胞活力降低，NO、p-p38MAPK和p38MAPK激活程度升高，iNOS表达上调（P〈0．01），P组上述指标差异无统计学意义（P〉O．05）；与L组比较，PL组细胞活力升高，NO、p-p38MAPK和p38MAPK激活程度降低，iNOS表达下调（P〈0．05或0．01）。结论p38MAPK信号通路参与了盐酸戊乙奎醚减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤的作用。
- 詹佳王利祥张宗泽陈畅陈凯王焱林
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶类胆碱能拮抗剂
- M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用：与MAPK信号通路的关系
- 2017年
- 目的评价M3受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4 ml/瓶）中，采用随机数字表法分为6组（n＝5）：空白对照组（C组）、M3受体shRNA转染组（shRNA组）、脂多糖组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋脂多糖组（P＋LPS组）、脂多糖＋M3受体shRNA转染组（LPS＋shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋脂多糖＋M3受体shRNA转染组（P＋LPS＋shRNA组）。shRNA组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组以含2.5 nmol/L M3受体shRNA的质粒转染细胞。LPS组和LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为2 μg/ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1 h后加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS再孵育1 h。采用Transwell法测定肺微血管内皮细胞通透性，采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）的表达水平，采用免疫荧光染色法测定热休克蛋白27（HSP27）的表达水平，采用实时定量PCR法测定M3受体mRNA的表达。结果与C组比较，shRNA组M3受体mRNA表达下调，LPS组细胞通透性增高，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27、和M3受体mRNA表达上调（P〈0.05）；与LPS组比较，P＋LPS组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）；与LPS＋shRNA组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M3受体mRNA表达下调（P〈0.05）。结论盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高的机制与其下调M3受体表达后抑制MAPK信号通路激活有关。
- 沈石文刘强胜郑菲袁清红王轶芃张宗泽陈凯王焱林詹佳
- 关键词：内皮细胞P38丝裂原活化蛋白激酶类细胞外信号调节MAP激酶类
- β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制内毒素诱导人肺微血管内皮细胞NF-κB激活中的作用被引量：2
- 2015年
- 目的 评价β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制内毒素诱导人肺微血管内皮细胞NF-κB激活中的作用.方法 将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板（2 ml/孔）或培养瓶（4 ml/瓶）中,采用随机数字表法,将其分为5组（n=20）：空质粒转染组（C组）、脂多糖（LPS）＋空质粒转染组（LPS组）、盐酸戊乙奎醚＋LPS＋空质粒转染组（P＋LPS组）、LPS＋含β-抑制蛋白-1短发卡RNA（shRNA）的质粒转染组（LPS＋shRNA组）和盐酸戊乙奎醚＋LPS＋含β-抑制蛋白-1shRNA的质粒转染组（P＋LPS＋shRNA组）.以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L B-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1h时加入终浓度为0.1μg/ml的LPS,孵育1h,进行下述指标的测定.取上清液,测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,收集细胞悬液,测定血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）表达、NF-κB活性、NF-κB抑制蛋白（I-κB）及β-抑制蛋白-1的表达水平.结果 与C组比较,LPS组和LPS＋shRNA组上清液LDH活性升高,VCAM-1表达上调,NF-κB活性升高,I-κB和β-抑制蛋白-1的表达下调（P＜0.01）;与LPS组比较,P＋LPS组上清液LDH活性降低,VCAM-1表达下调,NF-κB活性降低,I-κB和β-抑制蛋白-1的表达上调（P＜0.05或0.01）,P＋LPS＋shRNA组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与P＋LPS组比较,P＋LPS＋shRNA组上清液LDH活性升高,VCAM-1表达上调,NF-κB活性升高,I-κB和β-抑制蛋白-1的表达下调（P＜0.05或0.01）.结论 盐酸戊乙奎醚完全通过上调β-抑制蛋白-1表达抑制内毒素诱导人肺微血管内皮细胞NF-κB激活.
- 王轶芃詹佳张怀奇张宗泽陈凯王焱林
- 关键词：抑制蛋白类内皮细胞
- 盐酸戊乙奎醚上调β抑制蛋白-1与M3受体的关系研究
- 2017年
- 目的探讨在脂多糖(LPS)致肺微血管内皮损伤中盐酸戊乙奎醚(PHC)上调β抑制蛋白-1(β-arrestin-1)的作用与M3受体的关系。方法 M3shRNA转染肺微血管内皮细胞和正常肺微血管内皮细胞,分为LPS组(A)、盐酸戊乙奎醚+LPS组(B)、LPS+M3shRNA转染组(C)和盐酸戊乙奎醚+LPS+M3shRNA转染组(D),激光共聚焦观察细胞骨架变化,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平,免疫荧光化学法检测血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白表达,Western blot法和实时定量PCR法检测β-arrestin-1表达。结果与A组、C组比较,B组、D组肌动蛋白骨架排列整齐,LDH水平和VCAM-1蛋白表达降低,β-arrestin-1表达升高;与A组、B组相比较,C组、D组肌动蛋白骨架排列整齐,LDH水平和VCAM-1蛋白表达降低,β-arrestin-1表达无明显改变。结论沉默M3受体有助于降低脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞损伤。但盐酸戊乙奎醚上调β-arrestin-1的作用与M3受体是否存在无必然联系。
- 程斌王轶芃詹佳
- 关键词：M3受体盐酸戊乙奎醚RNA干扰
