国家自然科学基金(30672233)
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
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- 相关机构：山东大学滨州医学院附属医院烟台毓璜顶医院更多>>
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- 卵巢癌细胞B7-H4基因高表达抑制CTL细胞杀伤作用的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨卵巢癌细胞B7-H4基因高表达对靶向诱导的CTL细胞体外杀伤的影响。方法:RT-PCR法扩增编码基因,构建真核表达载体PEGFP-N1/B7-H4,脂质体介导将重组质粒PEGFP-N1/B7-H4导入SKOV3细胞中,筛选建立高表达细胞株。细胞免疫组织化检学检测B7-H4蛋白的表达。利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法从卵巢癌细胞SKOV3中提取可溶性冻融抗原并负载DC诱导生成CTL。MTT法检测经抗原负载后激活的CTL细胞对SKOV3/B7-H4、SKOV3/neo和SKOV3细胞的杀伤作用。结果:成功构建了人B7-H4真核表达载体,SK-OV3/B7-H4细胞稳定表达B7-H4蛋白。CTL细胞对SKOV3/B7-H4细胞杀伤作用明显低于阴性对照组(20.12%±3.14%vs36.34%±4.53%,P<0.05)。结论:卵巢癌细胞B7-H4基因表达可抑制靶向诱导的CTL细胞毒性,可能与肿瘤细胞免疫逃逸有着密切的关系。
- 成磊姜洁李少儒魏双燕南芳芳
- 关键词：B7-H4质粒构建CTL
- B7-H4基因对SKOV3细胞生长功能的影响
- 2009年
- 目的:初步探讨B7-H4基因对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长和致瘤性的影响。方法:RT-PCR法扩增编码基因,构建真核表达载体PEGFP-N1/B7-H4,以脂质体为载体将重组质粒PEGFP-N1和PEG-FP-N1/B7-H4分别导入SKOV3细胞中,筛选建立高表达的细胞株。MTT法绘制体外培养细胞生长曲线,将转染前后的肿瘤细胞分别接种于SCID小鼠的腹部皮下观察其致瘤性。结果:成功构建了人B7-H4真核表达载体,SK-OV3/B7-H4细胞高表达B7-H4,转染后肿瘤细胞体外生长速度明显增快。SKOV3/B7-H4细胞在小鼠体内的致瘤性较SKOV3/neo细胞和野生型SKOV3细胞明显升高。结论:B7-H4基因导入细胞后在体外和体内具有明显加快肿瘤生长的作用,可作为肿瘤基因治疗的靶向基因。
- 成磊姜洁魏双燕南芳芳李少儒
- 关键词：基因B7-H4转染卵巢肿瘤
- 卵巢浆液性癌B7-H4的表达及临床病理意义被引量：9
- 2008年
- 目的：探讨B7-H4在卵巢上皮性肿瘤浆液性癌中的表达及其临床病理意义。方法：用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术及免疫组织化学染色的方法检测6例良性卵巢上皮性肿瘤、10例交界性卵巢上皮性肿瘤、41例卵巢浆液性癌、5例内膜样癌、2例透明细胞癌和10例粘液性癌标本中B7-H4mRNA及蛋白表达，并结合临床病理资料对其中41例卵巢浆液性癌中B7-H4蛋白的表达进行分析。结果：B7-H4mRNA在74例卵巢上皮性肿瘤中均有表达，B7-H4蛋白在良性卵巢上皮性肿瘤、交界性卵巢上皮性肿瘤、恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达阳性比例分别为2／6、6／10、52／58，恶性标本阳性率明显高于非恶性标本，差异有统计学意义（P〈0．05）；58例恶性卵巢上皮性癌标本中浆液性癌、内膜样癌、透明细胞癌、黏液性癌的B7-H4蛋白阳性比例分别为41／41、5／5、2／2、4／10，前三种病理类型B7-H4蛋白阳性率明显高于最后一种，且差异有统计学意义（P〈0．05）；41例卵巢浆液性癌标本中B7-H4蛋白阳性细胞比例在〈10％，〉10％～50％，〉50～80％，〉80～100％4组中的分布差异无显著性（P〉0．05），且其蛋白表达与临床分期及病理分级有关（P〈0．05），而与患者年龄、腹水细胞学、淋巴结转移无关（P〉0．05）。结论：B7-H4在卵巢浆液性癌的高表达及其与临床分级分期的关系，提示其可能与肿瘤发生发展有关，可为卵巢恶性肿瘤诊断及治疗提供靶位点。
- 魏双燕姜洁南芳芳成磊
- 关键词：卵巢肿瘤蛋白表达
- BRMS1基因抑制卵巢上皮性癌细胞体内外转移的实验研究被引量：11
- 2007年
- 目的研究 BRMS1基因转染卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞后对其体内外转移的抑制作用。方法应用脂质体介导法将 BRMS1基因转染入卵巢癌细胞株 A2780细胞内(转染组),设未进行任何转染的 A2780细胞为空白对照组,转染空载体 pcDNA3质粒者为阴性对照组。体外观察转染前后3组细胞增殖、凋亡、细胞间缝隙通讯连接、黏附转移情况及超微结构的变化。建立裸鼠人卵巢癌移植瘤模型,观察3组裸鼠 BRMS1基因抑制肿瘤体内转移的作用。结果 BRMS1基因成功转染入 A2780细胞中。BRMS1基因转染后,空白对照组细胞生长速度与阴性对照组和转染组比较,差异无统计学意义(P>0.05);空白对照组、阴性对照组及转染组细胞的每孔克隆数分别为(42±7)、(39±4)及(40±4)个,3组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组细胞 S 期和 G_2/M 期、G_0/G_1期比例比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。转染组细胞间缝隙通讯连接功能增强。细胞侵袭实验显示,转染组转入底层膜的细胞数[(112±23)个]明显低于空白对照组和阴性对照组[分别为(306±49)、(322±91)个;P<0.01]。BRMS1基因转染后,裸鼠体内转移灶,转染组为(23±7)个,分别与空白对照组和阴性对照组[分别为(96±12)、(112±20)个]比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论作为转移抑制基因,BRMS1基因可抑制卵巢癌细胞的转移。
- 姜洁夏敏冯进波孔北华
- 关键词：肿瘤蛋白质类转染
- 癌灶CD4^+CD25^+和CD8^+ T细胞亚群与卵巢浆液性癌患者生存期相关被引量：3
- 2008年
- 检测卵巢浆液性癌患者癌组织中CD4+CD25+及CD8+T细胞的数目,探讨其两种T细胞介导的免疫功能对疾病发展及预后的影响。免疫组织化学双标及单标的染色方法检测41例卵巢浆液性癌患者手术切除癌组织标本中CD4+CD25+和CD8+T细胞的数目。结果显示,癌灶中CD4+CD25+T淋巴细胞为(19.95±11.50)个/10HPF,CD8+T淋巴细胞为(43.46±16.69)个/10HPF。生存分析发现高CD4+CD25+T细胞组患者总生存期较低CD4+CD25+T细胞组缩短,差异有显著性(P<0.05);而高CD8+T细胞组患者总生存期与低CD8+T细胞组相比延长,且差异有显著性(P<0.05),此外两种T细胞数目与患者年龄、病理分级、临床分期、腹水细胞学及淋巴结转移等临床病理因素均无关(P>0.05)。结果表明,卵巢浆液性癌中高CD4+CD25+T细胞提示患者预后不良,可能与CD4+CD25+T细胞介导的免疫抑制导致肿瘤免疫逃逸有关;癌组织中高CD8+T细胞提示患者预后较好,两种T细胞对卵巢浆液性癌预后的评估有重要的价值,同时可以通过阻断CD4+CD25+T细胞的免疫抑制作用改善卵巢浆液性癌患者的预后,为卵巢癌治疗提供靶目标。
- 魏双燕姜洁南芳芳成磊
- 关键词：卵巢浆液性癌CD4+CD25+T细胞
