国家自然科学基金(30672266)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 先天性心脏病发生机制的体内实验研究方法
- 2009年
- 对于先天性心脏病的研究需依赖于体内实验，而体内实验的成功必须借助于准确、有效的实验方法。近年来，随着新理论的发现，不断有新的实验方法应用于体内实验。该文就近年常用的及新出现的应用于研究先天性心脏病发生机制的体内实验方法作一综述。
- 钟立霖田杰
- 关键词：先天性心脏病基因敲除RNA干扰
- p300特异性siRNA载体的构建及其对心肌细胞GATA4表达的影响
- 2010年
- 目的构建并筛选小鼠p300特异性siRNA载体,并观察p300表达降低对心脏特异性转录因子的调控作用,为进一步研究p300介导的组蛋白乙酰化失衡对心脏发育的影响奠定基础。方法针对小鼠p300基因的保守序列区域设计并构建3个重组质粒p300RNAi1,p300RNAi2和p300RNAi3。利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养的乳鼠心肌细胞,分别利用RT-PCR和免疫荧光从mRNA和蛋白水平检测p300表达,判断抑制效率,并检测心脏特异性转录因子GATA4的表达水平。结果 pSOS-HUS组和p300RNAi2组中p300mRNA水平表达较正常对照组无明显降低,而p300RNAi1组和p300RNAi3组中p300mRNA表达量较正常组有明显降低(分别为0.2208±0.0200,0.1708±0.0400,vs0.5095±0.0300),且差别有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为56.7%和66.5%。转染p300RNAi1组和转染p300RNAi3组的GATA4mRNA表达水平(分别为0.4231±0.1100,0.2627±0.0800)明显低于正常组(0.8564±0.0700)和阴性对照组(0.8415±0.0400),差别有统计学意义(P<0.05)。结论 p300特异性siRNA质粒载体构建成功,p300RNAi1和p300RNAi3具有确切阻断p300蛋白表达的作用,并下调GATA4的表达。
- 孙慧超田杰朱静吕铁伟陈国珍李娅莎
- 关键词：P300GATA4表观遗传学组蛋白乙酰化
- 小鼠胚胎心脏发育形态学研究与p300和CBP在胎心中的表达
- 目的:观察小鼠胚胎心脏发育过程及组蛋白乙酰化酶 p300和 CREB 结合蛋白 （CBP）在小鼠胚胎心脏上的时空表达规律,为进一步探明其与先天性心脏病的发生之间的关系奠定基础。方法:选取胎龄7.5-18d 和出生1d 小...
- 陈国珍朱静田杰吴晓云张晓萍吴刚孙慧超
- 关键词：组蛋白乙酰化酶胚胎心脏
- 文献传递
- p300的生物特性及其在心血管系统中作用的研究进展
- 2008年
- 近年来关于组蛋白乙酰化酶的研究越来越多，而在心血管系统中研究最多的就是p300。p300不仅是一种广泛的转录辅激活因子，还是一种多功能的组蛋白乙酰化酶。它的失衡不仅可以导致胚胎心脏发育障碍，引起先天性心脏病，还与许多后天性心脏病的发生、发展有关，如心脏肥厚、心肌梗死后的心室重建等。该文就p300的结构、生物特性以及近年来p300在心血管系统的研究进展作一综述。
- 孙慧超田杰朱静
- 关键词：组蛋白脱乙酰基酶类心血管疾病P300
- 乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞的毒性及H3K9表突变作用被引量：4
- 2010年
- 目的探讨乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞的毒性作用及H3K9表突变作用。方法以心肌祖细胞株为研究对象,分别用不同剂量乙醇(200、100、50mmol/L)、乙醛(16、12、8、4mmol/L)和乙酸(16、12、8、4mmol/L)处理。应用MTT实验筛选出乙醇及其代谢产物的干预浓度,Westernblot检测组蛋白H3K9乙酰化作用,实时定量PCR检测心脏发育相关基因GATA4、Mef2c、Tbx5mRNA表达量的变化。结果 MTT结果显示低浓度组50mmol/L乙醇、4mmol/L乙醛、4mmol/L乙酸的细胞活力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),不影响心肌祖细胞增殖;高浓度组200mmol/L乙醇、12mmol/L乙醛、16mmol/L乙酸对心肌祖细胞抑制率分别为31.5%、36.0%、32.1%,抑制细胞增殖(P<0.05)。低浓度组乙醇、乙酸分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.4、2.2倍(P<0.05)。心脏发育相关基因表达无明显变化(P>0.05);高浓度组乙醇、乙酸分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高5.3、5.6倍,同时心脏发育相关基因GATA4、Mef2c表达均增加,与对照组及相应低浓度组比较均有统计学差异(P<0.05);乙醛则无论低浓度还是高浓度对组蛋白H3K9乙酰化水平及基因表达均无明显影响(P>0.05)。结论高浓度的乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞均有毒性作用,而乙醇及乙酸具有组蛋白H3K9表突变作用,可能为酒精致先心病发病机制之一。
- 钟立霖朱静吴晓芸陈国珍孙慧超杨雪芳田杰
- 关键词：乙醇代谢产物乙酰化
- 小鼠心脏发育中组蛋白乙酰化酶GCN5和PCAF的时空表达特征被引量：5
- 2009年
- 目的研究组蛋白乙酰化酶氨合成通用控制蛋白5(general control nonderepressible-5 GCN5)和p300/CREB结合蛋白相关因子(p300/CREB binding protein-associated factor PCAF)在小鼠心脏发育过程中的时空表达规律。方法选取胎龄7.5-18d、出生1d和3月成年昆明小鼠正常心脏,利用免疫组织化学法和RT-PCR或Western blot技术半定量检测GCN5和PCAF在小鼠心脏发育过程中的时空表达变化。结果1.GCN5在E7.5-E9.5心脏原基中不表达;E10.5后心内膜垫及室间隔膜部和房室瓣相对强表达,心肌组织弱表达。GCN5 mRNA在E10.5-E11.5出现高峰表达,E12.5-E15.5表达水平下降,E16.5至成年鼠期表达极低。2.PCAF在E7.5-E9.5心脏原基中广泛弱表达;E10.5后心肌膜较强表达,心内膜、房室瓣和小梁网较弱表达,室间隔肌部弱表达,室间隔膜部极弱表达;PCAF蛋白在E10.5已有相对高表达,E11.5达到表达高峰,此后表达逐渐降低,在E13.5-E15.5和E16.5-生后1d仔鼠期出现两个表达平台期,成年鼠期心脏中表达最低。结论GCN5和PCAF在发育心脏中存在不同表达分布和变化规律,表明二者均参与了心脏的发生发育过程,且二者可能与心脏的特定结构发育密切相关。
- 陈国珍田杰朱静吴晓云吴刚孙慧超
- 关键词：组蛋白乙酰化酶PCAF小鼠心脏发育
