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TAT4、STAT6及CBP基因沉默在Jurkat细胞中的相互影响观察: 目的：观察STAT4、 STAT6及CBP基因沉默引起的效应变化,以期从基因沉默方向验证STAT4和STAT6是否具有竞争CBP位点的关系.方法：使用阳离子脂质体Lipofectamine(⑩)LTX,将带有针对基因ST...; 牛超田代印符州王莉佳张明香; 关键词：转染 STAT4 STAT6 CBP 基因沉默

小鼠STAT4,STAT6基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定被引量：2: 2009年; 目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒。方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒。同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列。通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列。结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符。结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体。为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础。; 杨琴符州田代印刘恩梅王莉佳黄英; 关键词：哮喘 RNA干扰 SHRNA 质粒

RNA干扰抑制STAT6基因表达的初步研究被引量：1: 2010年; 目的:构建针对信号转导子和转录激活子6(Singnal transducers and activators of transcription 6,STAT6)基因的干扰质粒,并观察其对STAT6蛋白表达的抑制效果。方法:将构建的短发夹干扰质粒(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体,与合成的pIRES2-EGFP-STAT6基因表达质粒共同转染COS7细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Western blot观察蛋白表达的变化。结果:将pIRES2-EGFP-STAT6重组载体转染COS7细胞后,结果显示STAT6蛋白可以在细胞中高水平表达;与阴性对照组相比,STAT6 shRNA-1干扰组和STAT6 shRNA-2干扰组STAT6蛋白表达水平分别是23.1%和9.6%。结论:成功构建并筛选到具有显著干扰效率的STAT6干扰质粒,为哮喘的基因治疗研究奠定了基础。; 刘丹丹符州田代印杨琴王莉佳; 关键词：SHRNA

白介素4受体α链Q576R基因多态性与支气管哮喘关系的研究进展被引量：1: 2008年; 白介素4受体（IL-4R）在支气管哮喘（简称哮喘）的发病机制中起重要作用，IL-4通过与IL-4R结合，刺激信号转导及转录激活因子6（STAT6）磷酸化构成二聚体由胞浆进入胞核，诱导Th2类细胞因子转录，导致哮喘症状。Q576R为1920位腺嘌呤A变成鸟嘌呤G，IL-4Rα链基因存在Q576R多态性，R576与儿童哮喘易感有关，可能是儿童哮喘易感的一个候选基因。IL-4Rα链576在IgE水平中发挥重要作用，R576与血浆总IgE水平相关性的讨论结果不一致。IL-4Rα链的其他基因多态性同样作用于哮喘，基因与基因的相互作用已经被关注。本文综述了IL-4Rα链Q576R基因多态性与哮喘关系的研究进展。; 杨琴符州; 关键词：哮喘白介素4受体

小鼠STAT4、STAT6基因克隆及其真核表达质粒的构建: 2008年; 目的:分别克隆小鼠信号传导及转录活化因子-4(Signal transducers and activators of transcription-4,STAT4)、信号传导及转录活化因子-6(Signal transducers and activators of transcription-6,STAT6)基因全长cDNA序列,构建并鉴定其真核表达质粒pIRES2-EGFP-STAT4/STAT6。方法:采用RT-PCR方法从BALB/c小鼠脾脏组织中扩增STAT4/STAT6基因全长cDNA,T/A克隆到pMD19-T载体中,双酶切后将cDNA亚克隆入pIRES2-EGFP载体,构建pIRES2-EGFP-STAT4/STAT6质粒,经限制性内切酶鉴定并测序。结果:小鼠STAT4/STAT6基因cDNA正确克隆入pIRES2-EGFP表达载体,与Genebank中STAT4/STAT6基因序列一致。结论:成功构建pIRES2-EGFP-STAT4/STAT6表达质粒,为进一步研究STAT4/STAT6蛋白表达和相互作用奠定了基础。; 徐雪梅符州田代印刘恩梅王莉佳黄英; 关键词：哮喘克隆真核表达质粒

Lipofectamine~ LTX转染Jurkat细胞条件的优化被引量：2: 2011年; 目的优化阳离子脂质体Lipofectamine誖LTX转染悬浮细胞Jurkat的条件。方法将带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的两种质粒pIRES2-EGFP和pIRES2-EGFP-STAT6作为基因载体,采用Lipofectamine誖LTX转染Jurkat细胞,绘制细胞生长曲线,检测培养基新鲜度对细胞生长的影响及细胞培养时间、脂质体与质粒DNA的比例、细胞接种密度、不同量培养基等对转染效果的影响,比较瞬时转染效果。结果 Jurkat细胞生长速度与细胞密度密切相关,转染前1 d换液,可保证细胞的良好生长状态,培养基新鲜度对细胞生长影响不大。脂质体体积与质粒质量之比为2.75μl∶500 ng时,其转染效果明显优于其他各组。适当加大转染时Jurkat细胞的铺板密度,可以明显提高转染试剂的利用率。转染48 h后,300μl培养基/孔组的绿色荧光阳性率为600μl培养基/孔组的(1.4±0.2)倍,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后24 h,Lipofectamine誖LTX体积与质粒质量各比例组转染效果差异无统计学意义(P>0.05);转染48 h后,各比例组转染效果差异有统计学意义(P<0.05),且质粒pIRES2-EGFP的转染效果明显优于pIRES2-EGFP-STAT(6P<0.05)。结论优化了Lipofectamine誖LTX转染悬浮细胞Jurkat的条件,为悬浮细胞的转染提供了参考。; 牛超田代印符州王莉佳张明香; 关键词：阳离子脂质体悬浮细胞 JURKAT细胞转染

小鼠STAT4和STAT6基因酵母双杂交表达载体的构建与鉴定被引量：4: 2010年; 目的:分别克隆小鼠信号传导和转录活化因子-4(STAT4)、信号传导和转录活化因子-6(STAT6)基因编码序列(CDS序列),构建并鉴定其酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6。方法:PCR扩增STAT4和STAT6基因CDS序列,T-A亚克隆到pMD19-T simple载体中,酶切获取目的基因STAT4和STAT6,克隆入已经过双酶切和CIAP脱磷酸处理的酵母表达载体pGADT7,酶切鉴定并测序;转化pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6到酵母AH109细胞中,Western blot分析STAT4和STAT6的蛋白表达情况,同时检测其毒性和自激活作用。结果:成功扩增了STAT4和STAT6基因CDS序列,并分别成功克隆到pMD19-T simple载体和pGADT7中,测序结果符合要求。酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot结果证实酵母细胞高表达融合蛋白STAT4和STAT6。结论:成功构建了酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6,为进一步研究STAT4和STAT6蛋白与其他蛋白质的相互作用奠定了基础。; 张明香符州田代印王莉佳刘恩梅罗征秀戴继宏; 关键词：哮喘克隆酵母表达载体

协同激活分子CBP诱饵表达质粒的构建和鉴定: 2009年; 构建协同激活分子CBP(CREB(cAMP response element binding)binding protein)的诱饵表达质粒pGBKT7-CBP并检测其蛋白表达、毒性和自激活作用.PCR扩增小鼠CBP的基因编码序列(CDS(coding sequence)序列)并克隆入诱饵表达载体pGBKT7中,通过酶切和测序鉴定后,把构建好的诱饵表达质粒pGBKT7-CBP转化到酵母AH109细胞中,Western blot检测诱饵蛋白表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果成功扩增了小鼠CBP基因的CDS序列,并成功克隆到酵母诱饵表达载体pGBKT7中,测序结果正确.诱饵表达质粒成功转化到酵母AH109细胞中,Western blot分析结果证实酵母细胞高表达诱饵蛋白CBP,但诱饵蛋白有自激活作用.提示pGBKT7-CBP不能用于酵母双杂交或三杂交系统检测CBP与其他蛋白质或小分子的相互作用,对其他研究CBP生物学功能试验的方法选取具有一定的借鉴意义.; 张明香符州田代印王莉佳刘恩梅戴继宏罗征秀; 关键词：诱饵蛋白

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国家自然科学基金(30672268)

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