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国家自然科学基金(81101493): 作品数：18 被引量：24H指数：3; 相关作者：王庆苓吴永平张鹏刘冬梅韩正杰更多>>; 相关机构：徐州医学院徐州医科大学徐州医学院附属医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省“青蓝工程”基金江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

EPCR对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响及机制: 2018年; 目的探讨内皮细胞蛋白C受体(EPCR)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响及机制。方法将MDA-MB-231细胞分为EPCR转染组、无关序列转染组和对照组,分别加入EPCR-siRNA、siRNA-NC、空脂质体转染,采用Cell-ELISA法检测EPCR对蛋白酶活化受体1(PAR-1)活性的影响、CCK-8法检测细胞增殖能力、Transwell法检测细胞迁移能力。添加抗体阻断PAR-1作用后,采用CCK-8和Transwell法分别检测细胞增殖及迁移能力。Western blotting法检测Erk1/2和AKT通路蛋白表达。结果与对照组及无关序列转染组相比,EPCR转染组未裂解活化的PAR-1抗体结合率升高(P<0.05),且EPCR转染组细胞增殖及迁移能力均降低(P均<0.05)。与对照组相比,PAR-1抗体处理后细胞增殖迁移能力均降低(P均<0.05)。EPCR转染组和抗体处理组细胞p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白表达均低于对照组(P均<0.05),而Erk1/2蛋白磷酸化与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EPCR可依赖于PAR-1的裂解活化,然后通过活化AKT通路而影响人乳腺癌细胞MDAMB-231的增殖和迁移。; 徐炎炎卓倩汤洋洋王庆苓; 关键词：乳腺癌内皮细胞蛋白C受体细胞增殖

Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究被引量：1: 2014年; 目的分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用。方法选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的m RNA表达情况。结果与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P<0.05);分别为(19.9332±1.98180)U/L、(64.3699±14.53874)U/L、(46.7455±6.27572)U/L、(99.0038±25.34329)U/L、(46.7590±8.85478)U/L和(50.3374±14.19886)U/L。感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的m RNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P<0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P<0.05)。结论 Nrf2和Trx1 m RNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用。; 韦艳霞于倩李阳刘宜升王庆苓汤仁仙郑葵阳; 关键词：华支睾吸虫硫氧还蛋白-1 天冬氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶

干扰人乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR表达对内皮细胞增殖、迁移及脉管形成的影响被引量：2: 2015年; 目的 :通过观察干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞内皮蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)表达对内皮细胞的增殖、迁移、脉管形成能力的变化,分析EPCR在肿瘤血管形成中的作用。方法:采用si RNA方法降低人乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR的表达,通过RT-PCR及Western blot技术检测EPCR干扰效果,实验分为EPCR干扰组、无关序列组及未处理组。制备肿瘤条件培养基模拟肿瘤微环境培养HUVECs细胞,通过CCK-8法检测各组内皮细胞增殖能力,Transwell小室检测内皮细胞迁移能力,Matrigel检测内皮细胞脉管形成能力。结果:与未处理组及无关列序组相比,EPCR干扰组细胞的增殖、迁移及脉管形成能力均明显降低(P<0.05)。结论:干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR的表达能够抑制内皮细胞增殖、迁移及脉管形成能力,提示EPCR可能在肿瘤血管形成中起重要作用。; 刘冬梅王庆苓吴永平; 关键词：EPCR 人脐静脉内皮细胞迁移

干扰人乳腺癌MDA-MB-231细胞MK表达对内皮细胞增殖、迁移及脉管形成的影响被引量：1: 2015年; 目的观察干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中期因子(midkine,MK)表达对内皮细胞的增殖、迁移、脉管形成能力的变化,分析MK在肿瘤血管形成中的作用。方法采用shRNA法降低人乳腺癌MDA-MB-231细胞MK的表达,通过RT-PCR及Western blot法检测MK干扰效果,实验分为MK干扰组、空载体组及对照组;采用制备肿瘤条件培养基模拟肿瘤微环境培养HUVECs细胞,通过CCK-8法检测各组内皮细胞增殖能力、Transwell小室检测内皮细胞迁移能力、Matrigel检测内皮细胞脉管形成能力。结果与对照组及空载体组相比,MK干扰组细胞的增殖、迁移及脉管形成能力均明显降低(P<0.05)。结论干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞MK的表达可抑制内皮细胞增殖、迁移、脉管形成能力,提示MK可能在肿瘤血管形成中起重要作用。; 刘冬梅吴永平王庆苓; 关键词：癌细胞人脐静脉内皮细胞迁移

人缺失型Midkine重组蛋白的原核表达及活性鉴定: 2012年; 目的构建人缺失型Midkine（tMK）的原核表达载体，以得到具有生物学活性的重组蛋白。方法从测序正确的pMD18-T-trekVector重组质粒上切下tmk序列，重组至pET30（a＋）载体中，转化BL21（DE3），IPTG诱导蛋白表达，HeparinSepharose4B纯化蛋白，CCK-8检测其促NIH3T3和BGC823细胞增殖的活性。结果成功构建了tMK的原核表达载体，纯化得到重组tMK蛋白。该蛋白在0．03125-0．5mg／L范围时能明显促进NIH3T3细胞增殖（P〈0．05或P〈0．01），在0．0625-2mg／L范围时能明显促进BGC823细胞增殖（P〈0．05）。结论获得了具有生物学活性的重组tMK蛋白。; 张鹏王庆苓; 关键词：蛋白纯化细胞增殖

转染Zbtb7a基因对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制被引量：2: 2013年; 目的观察转染Zbtb7a基因对人胃癌细胞系SGC7901增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法将pcDNA3.1-Zbtb7a和pSilencer 3.1-H1-mk用Lipofectamine2000转染SGC7901细胞,采用RT-PCR和Western Blot法检测MK mRNA及蛋白表达,CCK-8试剂盒和平板克隆法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V-PI染色检测细胞凋亡。结果转染Zbtb7a后,SGC7901细胞中MK表达水平明显升高,细胞增殖能力明显增强(P<0.05),并且0.5ng/mL TRAIL诱导的细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。Zbtb7a高表达后干扰MK的表达,细胞增殖及克隆能力则明显降低(P<0.05),TRAIL诱导的细胞凋亡数也明显增加(P<0.05)。结论 Zbtb7a可以通过上调MK的表达,促进SGC-7901细胞增殖以及抑制TRAI诱导的细胞凋亡。; 张鹏王庆苓; 关键词：胃癌细胞增殖细胞凋亡

人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定: 2014年; 目的构建人Midkine(MK)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108TU/ml。感染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR检测结果表明,GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87.2%(P<0.05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。; 王庆苓张鹏; 关键词：MIDKINE RNA干扰慢病毒载体

EPCR通过活化PAR-1促进人乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移: 2018年; 目的探讨内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)对乳腺癌增殖、迁移的影响及机制研究。方法采用siRNA技术降低人乳腺癌MCF-7细胞中EPCR的表达;添加抗PAR-1抗体阻断PAR-1作用,然后采用CCK-8检测细胞的增殖能力、Transwell检测迁移能力、Cell-ELISA检测EPCR对PAR-1活性的影响。结果 EPCR干扰后,与空白对照组及无关序列组相比,EPCR干扰组MCF-7细胞的增殖及迁移能力均明显降低(P<0.05)。抗PAR-1抗体处理后,与空白对照组相比,PAR-1抗体处理组细胞的增殖迁移能力均明显降低(P<0.05)。并且Cell-ELISA结果显示EPCR干扰组未裂解活化的PAR-1抗体结合率明显升高(P<0.05)。结论 EPCR可以通过活化PAR-1促进人乳腺癌MCF-7细胞增殖迁移。; 汤洋洋徐炎炎杨红丽卓倩王庆苓; 关键词：乳腺肿瘤 EPCR PAR-1 增殖迁移

高表达Midkine对胃癌MGC803细胞增殖及迁移能力的影响被引量：1: 2014年; 目的探讨高表达的中期因子(Midkine,MK)对胃癌MGC803细胞增殖及迁移能力的影响。方法采用Lipofectamine2000成功构建的pcDNA3.1(+)/SMK真核表达载体转染人胃癌MGC803细胞,G418筛选获得MK稳定高表达的细胞株,采用RT-PCR及Western blot法鉴定所筛选的细胞株。实验分成未处理组、空载体组及MK高表达组。用CCK-8法和平板克隆细胞技术检测各组细胞的增殖能力;Transwell小室检测各组细胞的迁移数量。结果与未处理组及空载体组相比,MK高表达组细胞有较高的增殖能力及迁移细胞数(P<0.01)。结论高表达的MK能增强胃癌MGC803细胞的增殖及迁移能力。; 刘庆茹王庆苓吴永平徐玉婷; 关键词：胃癌细胞增殖迁移

干扰人胃癌MGC803细胞EPCR表达对内皮细胞增殖、迁移及脉管形成的影响: 2016年; 目的：探讨内皮细胞蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肿瘤血管形成中的作用。方法采用RNA干扰方法降低人胃癌MGC803细胞中EPCR的表达，利用Western blot 技术检测干扰EPCR效果。EPCR小干扰RNA（ siRNA）片段、无关序列片段分别转染胃癌MGC803细胞，以未转染的MGC803细胞为对照；收集培养液上清，制备相应肿瘤条件培养基。人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）经不同肿瘤条件培养基作用后， CCK－8法检测HUVECs增殖能力，Transwell小室检测HUVECs迁移能力，Matrigel检测HUVECs脉管形成能力。结果与对照组及无关序列组相比，EPCR干扰组HUVECs的增殖、迁移及脉管形成能力均明显降低（ P＜0．05）。结论干扰胃癌MGC803细胞EPCR的表达能够抑制HUVECs增殖、迁移及脉管形成能力，提示EPCR可能在胃癌血管形成中起重要作用。; 王田嫄张鹏杨红丽徐炎炎王庆苓; 关键词：胃癌细胞人脐静脉内皮细胞迁移

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