中央高校基本科研业务费专项资金(2011ZM0101)
- 作品数：5 被引量：40H指数：5
- 相关作者：余以刚肖性龙吴晖田聪邱杨更多>>
- 相关机构：华南理工大学东莞出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 活的非可培养状态大肠杆菌O157:H7的复苏研究被引量：8
- 2013年
- 为研究活的非可培养状态(viable but nonculturable state,VBNC)的Escherichia coli O157:H7的复苏能力,将E.coli O157:H7分别置于LB液体培养基和生理盐水在-18℃低温条件下诱导生产活的非可培养状态E.coli。结合吖啶橙荧光显微镜计数法、活菌直接计数法和平板计数法对样本细菌检测验证,分别在第15天和第18天得到VBNC样本。采用将培养液直接升温到37℃、加入体积分数为25%酵母浸膏(25℃)和加入体积分数为8%吐温-80(37℃)3种方法进行复苏研究。同时利用荧光定量PCR技术监测从诱导到复苏整个过程中的菌数变化。结果显示:3种方法均能使VBNC状态E.coli O157:H7在2d内复苏,复苏后菌株与正常菌株形态类似;细菌进入VBNC状态15d后,采用相同的方法则无法复苏。
- 田聪余以刚肖性龙李建龙吴晖
- 关键词：H7
- 金黄色葡萄球菌VBNC状态的诱导条件和EMA-qPCR检测被引量：5
- 2013年
- 为建立金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)活的非可培养(VBNC)状态的诱导条件模型,考察了温度、盐度和酸度3个因素对金黄色葡萄球菌细菌可培养数的影响,通过正交试验优化得到了VBNC状态的诱导条件,同时观察细菌可培养数的变化,建立了DNA结合染料叠氮溴乙锭(EMA)与qPCR技术相结合检测VBNC金黄色葡萄球菌的方法.实验结果表明:细菌可培养数受酸度的影响最大,VBNC状态的最佳诱导条件为菌液在含15%NaCl和0.3%乙酸的营养肉汤培养基中于4℃下培养12 d;通过正交试验诱导后的不可培养菌可由EMA-qPCR方法有效检出,其与qPCR法的Ct值(荧光信号达到设定的阈值所经历的循环数)之差在1.29～8.56之间变化.
- 余以刚田聪肖性龙陶文扬黎金霞吴晖
- 关键词：金黄色葡萄球菌
- PMA-qPCR方法用于监测超声波灭菌效率的适用性及其应用被引量：10
- 2012年
- 为研究PMA-qPCR方法的适用性问题,本文以超声波制备膜损伤细菌,用PMA-qPCR方法进行检测,并与平板计数的结果进行比较,证明该方法适用于监测超声波法灭菌率的监测。将该方法用于检测不同因素对超声波灭菌效率的影响,表明在温度和超声频率一定的条件下,处理时间和功率对灭菌效率的影响比较明显,而占空比对其影响较小。
- 李聪聪余以刚邱杨肖性龙郭毅岱
- 关键词：超声波
- 金黄色葡萄球菌活的非可培养状态复苏及PMA-qPCR检测被引量：15
- 2013年
- 为研究金黄色葡萄球菌活的非可培养(VBNC)状态的复苏问题,采取温度、盐度和酸度3个因素复合诱导制备VBNC菌,尝试四种复苏方法,并以荧光定量PCR和PMA-qPCR技术结合的方法进行检测。结果证明:8%无菌Tween80可以使VBNC状态金黄色葡萄球菌48 h后复苏,同时PMA-qPCR能够有效检出VBNC状态金黄色葡萄球菌,克服传统平板计数法对于VBNC菌的漏检。
- 田聪余以刚肖性龙吴晖赖富饶杨锡洪
- 关键词：金黄色葡萄球菌PMA荧光定量PCR
- PMA-qPCR方法快速检测活性E.coli O157:H7被引量：8
- 2012年
- 建立将叠氮溴化丙锭(PMA)与定量PCR(qPCR)技术结合,用于检测热灭活菌背景条件下的大肠杆菌活菌的方法。结果表明:5min以上的强烈光照可以使PMA与DNA共价交联,同时完全钝化游离的PMA以避免"假阴性"结果;抑制死菌DNA扩增的最低PMA质量浓度为10μg/mL,不抑制活菌DNA扩增的最高PMA质量浓度为20μg/mL。当活菌/总菌大于1%时,经PMA预处理,可以消除热灭活菌DNA的干扰,实现对活菌的定量检测。
- 李聪聪余以刚邱杨李美玲肖性龙吴晖
- 关键词：定量PCR活菌
