国家自然科学基金(81101449)
- 作品数：10 被引量：41H指数：5
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- 胞壁酰二肽诱导烫伤大鼠脓毒症模型的建立被引量：5
- 2013年
- 目的建立胞壁酰二肽（MDP）诱发烫伤大鼠脓毒症模型。方法选择SPF级健康雄性SD大鼠50只，体重200～250g，2—3月龄，采用随机数字表法，将其分为3组：对照组（C组，n=10）、烫伤组（s组，n=10），制备20％总体表面积Ⅲ度烫伤模型；MDP组（n=30），于烫伤后24h时经股静脉注射MDP5mg／kg。MDP组于注射MDP后1、6、24h时，s组于烫伤后24h时，C组于20℃水中假烫伤后24h时取腹主动脉血样，分别行血气分析、计数WBC和Plt、检测肝肾功能、肌酸激酶同工酶（CK—MB）活性、血浆TNF-α、干扰素-γ（IFN-γ）、IL-6、IL-10、高迁移率族蛋白-1（HMGB-1）水平；取血样后处死大鼠，取心、肝、肺和肾组织行病理学检查，另取肺组织测定髓过氧化物酶（MPO）活性。另取雄性sD大鼠90只，按照上述方法分组处理后，记录72h生存情况。结果与C组比较，S组血浆IL-6、IL-10、IFN-γ和HMGB1水平、WBC计数、血清ALT、AST和BUN水平、肺组织MPO活性升高，生存率降低，MDP组血浆TNF-α、IL．6、IL-10、IFN-γ和HMGB-1水平、血清ALT、AST、总胆红素、BUN、Cr和CK-MB水平、肺组织MPO活性、PaCO2升高，BE负值增加，WBC和Plt计数、pH值、PaO2和生存率降低（P〈0．05）。与S组比较，MDP组血浆TNF-α、IL-6、IFN-γ和HMGB-1水平，血清ALT、AST、总胆红素、BUN、Cr、CK．MB水平、肺组织MPO活性和PaCO2升高，BE负值增加，WBC和Plt计数、pH值、PaO2和生存率降低（P〈0．05）。s组和MDP组心、肝、肺和肾组织病理学损伤明显，MDP组病理学损伤程度较重。结论Ⅲ度烫伤后经MDP诱导可致大鼠广泛炎性反应并伴多器官功能损伤，成功建立烫伤后脓毒症模型。
- 韩毅宋学敏李建国梁辉刘薇李进杰周惠
- 关键词：烧伤脓毒症
- 电针足三里对烫伤后胞壁酰二肽诱导的大鼠脓毒症的影响被引量：3
- 2015年
- 目的 观察电针足三里对烫伤后胞壁酰二肽诱导的大鼠脓毒症的影响.方法 健康雄性SD大鼠60只,体质量200 - 250 g,2-3个月龄,随机分为6组（n=10）：对照组（C）、足三里组（E）、胞壁酰二肽组（MDP）、非经非穴组（NE）、α-银环蛇毒素组（α-BGT）和烫伤组（S）.E、MDP、NE及α-BGT组予以烫伤后静脉注射MDP 5 mg/kg构建大鼠烫伤后脓毒症模型.C组尾静脉注射生理盐水1 ml.E组于双侧足三里穴电针刺激;NE组于双侧足三里穴旁5 mm处给予脉冲刺激;α-BGT组股静脉注射α-BGT 1.0 μg/kg后双侧足三里穴给予脉冲刺激,S组仅烫伤处理.各组大鼠于电针后48 h,取腹主动脉血、肺组织,光镜下观察肺组织病理结果;电镜下观察肺组织超微结构的改变;检测大鼠腹主动脉血血气分析、血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（IFN-γ）及高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的含量.结果 经烫伤后大鼠急性肺损伤明显,MDP组大鼠血清TNF-α[（52±8） ng/L]、IFN-γ[（42 ±6） ng/L]、HMGB1[（33 ±6）μg/L]和血乳酸（La）值[（6.1±1.5）mmol/L]较S组TNF-α[（39 ±6） ng/L]、IFN-γ[（34 ±6） ng/L]、HMGB1[（25 ±4）μg/L]和血La值[（3.1±1.3）mmol/L]升高（P＜0.05）,血pH值（6.9±0.8）、PaO2[（43 ±6） mmHg（1 mmHg =0.133 kPa）]较S组pH值[7.4±0.6]、PaO2[（59±8）mmHg]降低（P＜0.05）;与MDP组比较,E组大鼠血清TNF-α[（22±3）ng/L]、IFN-γ[（20 ±4） ng/L]、HMGB1[（11±3）μg/L]和血La值[（3.2±1.1）mmol/L]降低（P＜0.05）,动脉血pH值（7.3±0.9）、PaO2[（60 ±8）mmHg]升高（P＜0.05）,肺组织病理损伤明显减轻.结论 MDP可以加重烫伤后大鼠的急性肺损伤及酸中毒,电针足三里穴可减轻烫伤后MDP诱导的脓毒症致大鼠急性肺损伤,机制可能与激活含α7亚基N型胆碱能受体（α7 nAchRs）介导的胆碱能抗炎通路有关.
- 张赤王焱林宋学敏乐林莉张宗泽
- 关键词：足三里急性肺损伤脓毒症烫伤
- 电针足三里穴对烫伤后脓毒症大鼠急性肺损伤的影响被引量：7
- 2014年
- 目的 探讨电针足三里穴对烫伤后脓毒症大鼠急性肺损伤的影响.方法 SPF级健康雄性SD大鼠50只,体重200 ～ 250 g,2～3月龄,采用随机数字表法分为5组（n=10）：正常对照组（C组）、烫伤后脓毒症组（SS组）、电针组（E组）、非经非穴组（NE组）和含α7亚基的N型胆碱能受体特异性阻断剂银环蛇毒素组（α-BGT组）.采用背部20％总体表面积Ⅲ度烫伤后即刻静脉注射胞壁酰二肽5 mg/kg的方法构建大鼠烫伤后脓毒症模型.E组于静脉注射胞壁酰二肽即刻给予双侧足三里穴电针刺激（电压3V,波宽2 ms,频率3 Hz）持续刺激12 min,间隔8h刺激1次,持续2d；NE组于双侧足三里穴旁5 mm处给予电针刺激,方法同E组；α-BGT组股静脉注射α-BGT 1.0 mg/kg（用生理盐水稀释至1 ml）,再进行电针刺激,方法同E组.各组处理结束后48 h时,取动脉血样2 ml,采用ELISA法测定血清TNF-α和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）浓度；随后取肺组织,观察病理学结果,并采用RT-PCR检测肺组织Nod样受体2（NLR2） mRNA的表达,采用Western blot法检测肺组织受体相互作用蛋白-2（rIP2）表达.结果 与C组比较,SS组、NE组和α-BGT组肺组织NLR2 mRNA和RIP2表达上调,血清TNF-α和HMGB1浓度升高（P＜0.05）,E组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）；与SS组比较,E组肺组织NLR2 mRNA和RIP2表达下调,血清TNF-α和HMGB1浓度降低（P＜0.05）,NE组和α-BGT组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）；与E组比较,NE组和α-BGT组肺组织NLR2 mRNA和RIP2表达上调,血清TNF-α和HMGB1浓度升高（P＜0.05）.E组肺组织病理学损伤较SS组减轻.结论 电针足三里穴可减轻烫伤后脓毒症大鼠急性肺损伤,机制可能与抑制肺组织NLR2/RIP2信号通路和激活胆碱能抗炎通路有关.
- 乐林莉宋学敏张宗泽王焱林
- 关键词：电针脓毒症
- 电针足三里对严重烫伤大鼠凝血功能和血浆促炎性细胞因子的影响被引量：7
- 2012年
- 目的:探讨电针"足三里"穴对严重烫伤大鼠凝血功能指标血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fbg)含量和血浆促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平的影响。方法:健康雄性Sprague-Dawlay大鼠40只,随机分为5组(每组n=8):假烫伤(NC)组、烫伤(Tem)组、足三里+烫伤(ST36)组、非经非穴+烫伤(NA)组和足三里+烫伤+α-银环蛇毒素(α-BGT)组。建立大鼠30%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤模型;"足三里"穴取双侧膝关节外下方腓骨小头下5mm处;烫伤后立即行(3V,2ms,3Hz)脉冲电流持续刺激12min,每8h刺激1次。烫伤后48h,经右颈总动脉取血,全自动血凝仪检测血浆PT、APTT、TT和Fbg含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆TNF-α、IL-1β、IL-6和HMGB1的水平。结果:严重烫伤后48h,烫伤组大鼠血浆PT、APTT缩短,TT延长,Fbg升高;与烫伤组相比,电针足三里组大鼠PT、APTT延长(P<0.05),TT缩短(P<0.05),Fbg含量下降(P<0.05);同时,烫伤使大鼠血浆IL-1β、IL-6和HMGB1水平明显增高;而TNF-α并未发现明显变化;针刺足三里后血浆IL-1β、IL-6和HMGB1水平均显著下降(P<0.01);而α-BGT的处理显著逆转针刺足三里这一效应;非经非穴组、α-BGT组PT、APTT、TT和Fbg,血浆促炎性细胞因子IL-1β、IL-6和HMGB1水平与"足三里"组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论:电针足三里穴能明显改善严重烫伤后大鼠的凝血功能状态,降低血浆促炎性细胞因子水平,该效应可能是通过激活含α7亚基N型胆碱能受体介导的胆碱能抗炎通路实现的。
- 胥阳宋学敏李建国王焱林王成夭
- 关键词：足三里凝血功能胆碱能抗炎通路
- 脓毒症小鼠肝损伤时胆碱能抗炎通路与自噬的关系被引量：7
- 2019年
- 目的评价脓毒症小鼠肝损伤时胆碱能抗炎通路与自噬的关系。方法SPF级健康级雄性C57BL/6小鼠32只,6~8周龄,体重18~22g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、α7nAChR激动剂GTS-21+脓毒症组(GTS-21+Sep组)和α7nAChR拮抗剂α-BGT+脓毒症+GTS-21组(α-BGT+Sep+GTS-21组)。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。GTS-21+Sep组于术毕即刻腹腔注射GTS-21 4mg/kg。α-BGT+Sep+GTS-21组于术前15min腹腔注射α-BGT 1mg/kg,术毕即刻腹腔注射GTS-21 4mg/kg。术后6 h时,采用ELISA法测定血清ALT和AST浓度。取肝组织,采用Western blot法测定微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和sequestosome-1/p62的表达水平,透射电镜下观察肝细胞自噬小体数量。结果与Sham组比较,Sep组LC3Ⅱ和sequestosome-1/p62表达上调,自噬小体数量增多,血清ALT和AST浓度升高(P<0.05)。与Sep组比较,GTS-21+Sep组LC3Ⅱ表达上调,sequestosome-1/p62表达下调,自噬小体数量增多,血清ALT和AST浓度降低(P<0.05)。与GTS-21+Sep组比较,α-BGT+Sep+GTS-21组LC3Ⅱ表达下调,sequestosome-1/p62表达上调,自噬小体数量减少,血清ALT和AST浓度升高(P<0.05)。结论胆碱能抗炎通路激活可增强肝细胞自噬水平,参与脓毒症小鼠肝损伤的内源性保护机制。
- 王洪雨宋学敏张宗泽王焱林张颖罗欢杨旭明李卉李心怡陈凯
- 关键词：脓毒症胆碱自噬
- 盐酸戊乙奎醚对双重打击致大鼠急性肺损伤时细胞凋亡的影响被引量：4
- 2015年
- 目的 评价盐酸戊乙奎醚对双重打击致大鼠急性肺损伤时细胞凋亡的影响.方法 SPF级健康雄性SD大鼠30只,体重240 ～ 270 g,8周龄,采用随机数字表法分为3组（n=10）：假手术组（Sham组）、胸部创伤-失血性休克致急性肺损伤组（ALI组）和盐酸戊乙奎醚组（PHC组）.ALI组和PHC组制备胸部创伤-失血性休克急性肺损伤模型,Sham组只分离股动、静脉,不制备胸部创伤-失血性休克急性肺损伤模型;PHC组于胸部创伤前1h腹腔注射盐酸戊乙奎醚2 mg/kg.于模型制备成功后8h时处死大鼠取肺组织.光镜和电镜下观察肺组织病理学结果,采用Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的表达,采用ELISA法测定TNF-α含量,采用TUNEL法计数凋亡细胞,计算细胞凋亡指数.结果 与Sham组比较,ALI组和PHC组肺组织Bax、caspase-3、TNF-α水平和细胞凋亡指数升高,Bcl-2表达下调（P＜0.05）;与ALI组比较,PHC组肺组织Bax、caspase-3、TNF-α水平和细胞凋亡指数降低,Bcl-2表达上调（P＜0.05）.PHC组肺组织病理学损伤较ALI组明显减轻.结论 盐酸戊乙奎醚通过抑制细胞凋亡减轻双重打击致大鼠急性肺损伤.
- 吴晓静杨旭明梁辉宋学敏
- 关键词：胆碱能拮抗剂胸部损伤细胞凋亡
- 烫伤后脓毒症大鼠肺组织炎症反应和自噬与NOD2信号通路的关系
- 2017年
- 目的评价烫伤后脓毒症大鼠肺组织炎症反应和自噬与Nod样受体2（NOD2）信号通路的关系。方法SPF级健康雄性SD大鼠20只，体重200～250 g，采用随机数字表法分为2组（n＝10）：对照组（C组）和烫伤后脓毒症组（SS组）。于20%总体表面积Ⅲ度烫伤（背部皮肤浸入99～100 ℃热水中，持续12 s）后24 h静脉注射胞壁酰二肽5 mg/kg的方法制备烫伤后脓毒症模型。C组于20 ℃水中假烫伤后24 h静脉注射生理盐水1 ml。SS组于静脉注射胞壁酰二肽后6 h、C组于注射生理盐水后6 h时，取动脉血标本，采用ELISA法检测血清TNF-α和IL-6浓度，随后取肺组织，测定髓过氧化物酶（MPO）活性，采用RT-PCR法检测肺组织NOD 2 mRNA的表达，采用Western blot法检测受体相互作用蛋白-2（RICK）、NF-κBp65和微管相关蛋白1轻链3Ⅰ和Ⅱ（LC3Ⅰ、LC3Ⅱ）的表达。计算LC3Ⅰ与LC3Ⅱ的比值（LC3Ⅰ/Ⅱ）。结果与C组比较，SS组肺组织NOD2 mRNA、RICK、NF-κBp65表达上调，LC3Ⅰ/Ⅱ、血清TNF-α和IL-6浓度升高（P〈0.05）。结论大鼠烫伤后脓毒症时肺组织炎症反应和自噬水平增强的机制可能与NOD2信号通路激活有关。
- 张颖颜学滔梁辉宋学敏张宗泽王焱林王洪雨杨旭明李卉李心怡陈凯
- 关键词：烧伤脓毒症自噬炎症
- Erbin蛋白在GTS-21激活胆碱能抗炎通路中的调控作用
- 2014年
- 目的:探讨Erbin蛋白在GTS-21激活胆碱能抗炎通路抑制胞壁酰二肽(MDP)诱导的炎症反应中的调控作用。方法:将正常培养的RAW264.7细胞分为4组:空白对照组(NS组),MDP组(M组):MDP(10μg/ml),GTS-21组(G组):MDP(10μg/ml)+α7nAChRs特异激动剂/GTS-21(50μg/ml),Erbin shRNA干扰组(R组):MDP(10μg/ml)+GTS-21(50μg/ml)+Erbin shRNA。在MDP刺激后1,6,24h时间点提取标本,每个时间点10个样本。Western检测Erbin的表达,免疫荧光检测Erbin的免疫定位,凝胶迁移率实验(EMSA印迹)检测NF-κB活化,ELISA检测TNF-α、IFN-γ等促炎性细胞因子水平。结果:MDP刺激后,Erbin表达升高,NF-κB活性增强,TNF-α、IFN-γ水平显著增加;与M组相比,G组Erbin表达明显升高(P<0.05),NF-κB活性降低(P<0.05),TNF-α、IFN-γ水平均下降(P<0.05),与G组相比,R组Erbin表达明显下降(P<0.05),NF-κB活性增强(P<0.05),TNF-α、IFN-γ水平均升高(P<0.05)。结论:Erbin蛋白是激活胆碱能抗炎通路抑制MDP诱导的炎症反应中关键调控蛋白,起负调控作用。
- 宋学敏胥阳王成夭李建国王焱林乐林丽梁辉
- 关键词：胆碱能抗炎通路ERBINSHRNA负调控
- 电针足三里穴对烫伤后脓毒症大鼠肝损伤的影响被引量：10
- 2014年
- 目的 评价电针足三里穴对烫伤后脓毒症大鼠肝损伤的影响.方法 SPF级健康雄性SD大鼠50只,体重200 ～ 250 g,2～3月龄,采用随机数字表法,将其分为5组（n=10）：对照组（C组）、烫伤后脓毒症组（SS组）、电针组（E组）、非经非穴组（NE组）和含α7烟碱型乙酰胆碱受体特异性拮抗剂α-银环蛇毒素组（α-BGT组）.采用背部20％总体表面积Ⅲ度烫伤后即刻静脉注射胞壁酰二肽5mg/kg的方法构建大鼠烫伤后脓毒症模型.E组于静脉注射胞壁酰二肽即刻给予双侧足三里穴电针刺激（电压3V,波宽2 ms,频率3 Hz）持续刺激12 min,间隔8h刺激1次,持续2 d;NE组于静脉注射胞壁酰二肽即刻在双侧足三里穴旁5 mm处给予电针刺激,方法同E组;α-BGT组股静脉注射α-BGT1.0 mg/kg（用生理盐水稀释至1 ml）,再行电针刺激,方法同E组.持续刺激48 h后,取肝组织行病理学观察.抽取腹主动脉血样检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的水平;ELISA法检测肿瘤坏死因子（TNF-α）和高迁移率族蛋白1（HMGB1）的水平;RT-PCR法检测肝组织NOD样受体2（NLR2）mRNA的表达,Western blot法检测受体相互作用蛋白-2（RIP2）的表达.结果 与C组比较,SS组血清ALT、AST、TNF-α和HMGB1水平升高,肝组织NLR2 mRNA和RIP2蛋白表达上调（P＜0.05）;与SS组比较,E组血清ALT、AST、TNF-α和HMGB1水平降低,肝组织NLR2 mRNA和RIP2蛋白表达下调（P＜0.05）,NE组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）.与E组比较,α-BGT组血清ALT、AST、TNF-α和HMGB1浓度升高,肝组织NLR2 mRNA和RIP2蛋白表达上调（P＜0.05）.SS组、NE组和α-BGT组肝组织病理损伤明显,EA组病理损伤程度减轻.结论 电针足三里穴可减轻烫伤后脓毒症大鼠肝损伤,其机制可能与抑制肝组织NLR2/RIP2信号转导通路,激活α7烟碱型乙酰胆碱受体介导的胆碱能抗炎通路有关.
- 宋学敏乐林莉韩毅李建国张宗泽王焱林
- 关键词：电刺激疗法烧伤脓毒症
- Erbin在胞壁酰二肽诱导小鼠巨噬细胞炎性反应中的作用
- 2020年
- 目的评价ErbB2相互作用蛋白(Erbin)在胞壁酰二肽(MDP)诱导小鼠巨噬细胞炎性反应中的作用。方法利用CRISPR/CAS9编辑技术构建Erbin基因敲除型RAW264.7巨噬细胞系(Erbin-/-RAW264.7),体外培养野生型RAW264.7巨噬细胞,采用随机数字表法将两类细胞分为2组(n=16),分别为RAW264.7组和RAW264.7+MDP组、Erbin-/-RAW264.7组和Erbin-/-RAW264.7+MDP组。各MDP组采用10μg/ml MDP孵育6 h,随后采用免疫荧光法测定NF-κB p65表达,采用ELISA法测定培养液TNF-α和IL-6浓度。结果与RAW264.7组比较,RAW264.7+MDP组培养液TNF-α和IL-6浓度升高(P<0.05),NF-κB p65向核内移动,红色荧光面积增加;与RAW264.7+MDP组和Erbin-/-RAW264.7组比较,Erbin-/-RAW264.7+MDP组培养液TNF-α和IL-6浓度升高(P<0.05),NF-κB p65向核内移动更加明显,红色荧光面积增加。结论Erbin可通过抑制NF-κB p65活性,在MDP诱导小鼠巨噬细胞炎性反应中发挥抗炎作用。
- 罗欢张颖王洪雨方清金奇彦李心怡李卉张宗泽王炎林宋学敏
- 关键词：载体蛋白质类巨噬细胞
