宁夏回族自治区自然科学基金(NZ0897)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：宁夏医科大学上海交通大学更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- S100A6 siRNA的构建及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的利用小片段干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制S100A6蛋白的表达,为研究CacyBP/SIP核转位机制提供有利的工具。方法设计S100A6的siRNA序列,用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA转染至人结肠癌SW480细胞中,在荧光显微镜下观察转染效率,用Real-time PCR及Western blot方法检测S100A6在人结肠癌SW480细胞内的mRNA和蛋白表达。结果构建了3对S100A6-siRNA,荧光显微镜下检测转染人结肠癌SW480细胞成功;RT-PCR证明了在SW480细胞内S100A6的mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot证明了SW480细胞内S100A6蛋白表达显著降低(P<0.05);与S100A6si-1、S100A6si-3组相比,S100A6si-2组对S100A6的mRNA和蛋白抑制效果最明显(P<0.05)。结论成功构建了S100A6-siRNA,为CacyBP/SIP核转位机制研究提供了有利的工具。
- 冯珊珊杨博刘爱琴武婧翟惠虹
- 关键词：结肠癌S100A6SIRNA钙周期素结合蛋白
- 结肠癌SW480细胞中钙离子浓度对钙周期素结合蛋白的核转位及功能学影响
- 2017年
- 目的 观察在结肠癌SW480细胞中Ca2＋浓度对钙周期素结合蛋白（CacyBP/SIP）的核转位及增殖、凋亡的影响。方法 采用免疫荧光染色观察不同浓度的钙离子载体（ionomycin）刺激结肠癌SW480细胞CacyBP/SIP的细胞内定位，噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。结果 在结肠癌细胞SW480中，CacyBP/SIP在细胞质表达；1 μmol/L ionomycin刺激组CacyBP/SIP表达于细胞质；2 μmol/L刺激组CacyBP/SIP表达于胞质和胞核；5 μmol/L刺激组CacyBP/SIP表达于胞核；10 μmol/L刺激组CacyBP/SIP重新分布于胞质和胞核。不同浓度ionomycin组与未处理组比较，结肠癌SW480细胞的存活率无明显影响（（P＝172.918）。不同ionomycin浓度刺激组与对照组比较，对结肠癌SW480细胞的早期凋亡率[（0.747±0.049）%]和总凋亡率[（2.383±0.068）%]均无影响（P＝79.618）。结论 在结肠癌SW480细胞中，Ca2＋浓度可以影响CacyBP/SIP核转位，但不影响细胞的增殖和凋亡。
- 杨博刘爱琴武婧翟惠虹冯珊珊
- 关键词：结肠癌钙离子核转位
- 人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的构建和鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建编码人钙周期素结合蛋白(hCacyBP)基因的亚细胞定位载体并进行序列测定。方法 hCacyBP的模板来自人结肠癌细胞株HCT-116的cDNA序列,根据hCacyBP基因序列设计合成引物,采用PCR方法扩增编码hCacyBP的基因片段;将hCacyBP基因定向克隆到亚细胞定位载体pCMV/myc系列:pCMV/myc/nuc(胞核定位载体)、pCMV/myc/cyto(胞质定位载体)。转化E.coli DH5α感受态细胞,在氨苄青霉素阳性LB培养基平板上筛选出阳性克隆。重组质粒经PCR及双酶切鉴定并进行序列测定。结果从HCT-116的cDNA模板扩增684 bp的hCacyBP基因片段,分别构建重组质粒pCMV/myc/nuc-hCacyBP、pCMV/myc/cyto-hCacyBP,PCR及双酶切鉴定产物大小与预期值相符合,测序分析进一步表明所克隆的基因为编码hCacyBP的基因片段。结论成功构建hCacyBP基因亚细胞定位载体,这将为研究结肠癌胞核、胞质内的hCacyBP功能和研究该基因异常高表达与结肠癌发生发展的关系奠定实验基础。
- 仇长青赵盈盈冯珊珊王聪杨博余月华刘朋伟翟惠虹
- 关键词：基因克隆
