上海市科学技术委员会资助项目(05DZ22320)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 相关作者：胡忠义杨华王洁秦莲花陆俊梅更多>>
- 相关机构：上海市肺科医院同济大学附属肺科医院复旦大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 焦磷酸测序技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性研究被引量：9
- 2007年
- 目的利用焦磷酸测序技术,建立一种高通量结核分枝杆菌利福平耐药性快速基因检测方法。方法应用生物素标记的引物扩增 rpoB 基因片段,经链亲和素标记的磁珠分离制备单链模板,设计2个测序引物在焦磷酸测序仪上检测 rpoB 基因耐药突变区的81 bp 序列突变情况,与 H_(37)Rv序列比对后判断耐药结果。结果通过建立的基于焦磷酸测序技术的结核分枝杆菌 rpoB 基因突变检测平台,32株利福平耐药株均在 rpoB 基因片段上检测到突变,22株利福平敏感株未检测到突变,检测结果与直接测序符合率达100%。结论本方法可快速、准确、高通量检测结核分枝杆菌耐利福平 rpoB 基因突变。
- 郑瑞娟秦莲花冯永红杨华王洁陆俊梅胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核利福平RPOB基因焦磷酸测序
- 三种方法检测结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性的比较被引量：3
- 2007年
- 目的探讨绝对浓度法、液体培养基最低抑菌浓度(MIC)法和噬菌体生物扩增(PhaB)法检测结核分枝杆菌(MTB)吡嗪酰胺(PZA)耐药性的临床应用价值。方法应用3种方法同时检测90株MTB临床分离株PZA耐药性,并比较检测结果的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度。结果90株MTB临床分离株用绝对浓度法、液体培养基MIC法和PhaB法3种方法分别测得21株、33株、22株敏感株和69株、57株、68株耐药株。若以绝对浓度法测定结果为判断标准,则PhaB法检测PZA耐药性的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度分别为94.2%、85.7%、95.6%、81.8%、92.2%;若以液体培养基MIC法测定结果为判断标准,则PhaB法检测的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度分别为98.2%、63.6%、82.4%、95.5%、85.6%;若以绝对浓度法和液体培养基MIC法测定结果为判断标准,则PhaB法检测的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值及准确度分别为96.4%、90.0%、96.4%、90.0%、94.7%。结论绝对浓度法尽管是目前国内常用的方法,但影响因素较多;液体培养基MIC法测定虽能提早报告药物敏感结果,但检测条件尚需优化;PhaB法检测快速、简便、安全,有一定的应用价值。
- 史可云王洁杨华张文宏翁心华胡忠义
- 关键词：抗药性吡嗪酰胺分枝杆菌噬菌体
- 噬菌体生物扩增法和最低抑菌浓度法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性被引量：1
- 2007年
- 目的探讨噬菌体生物扩增法(PhaB)和液体培养基最低抑菌浓度法(MIC)检测结核分枝杆菌(MTB)氧氟沙星(OFX)耐药性的临床应用价值。方法应用两种方法同时检测90株MTB临床分离株OFX耐药性,并与绝对浓度法比较检测结果的敏感性、特异性及准确性。结果90株MTB临床分离株用绝对浓度法、MIC、PhaB三种方法分别测得70株、60株、67株敏感株和20株、30株、23株耐药株。若以绝对浓度法测定结果为判断标准,则PhaB检测OFX耐药性的敏感性、特异性和准确性分别为85.0%、91.4%和90.0%;MIC检测的敏感性、特异性和准确性分别为100.0%、85.7%和88.9%;若以绝对浓度法和MIC测定结果为判断标准,则PhaB检测的敏感性为85.0%,特异性为98.3%,准确性为95.0%。结论PhaB检测OFX耐药性有较高的敏感性和特异性,只需要3 d,且操作简单、不用特殊仪器设备,可作为OFX耐药性的快速筛选方法;液体培养基MIC测定OFX耐药性平均需要20 d,不能满足快速药敏试验需要。
- 杨华王洁周新刚崔振玲陆俊梅胡忠义
- 关键词：耐药性氧氟沙星分枝杆菌噬菌体
- 结核分枝杆菌分泌蛋白MPT53基因的克隆、表达和纯化被引量：3
- 2007年
- 目的构建结核杆菌分泌蛋白MPT53原核表达载体并进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板扩增MPT53基因,产物经纯化回收后与载体pMD-T连接转化,酶切鉴定,克隆到pET32a原核表达载体,测序鉴定插入序列完全正确者转化大肠埃希菌BL21,诱导表达MPT53融合蛋白,亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE电泳鉴定。结果成功构建PET32a-MPT53重组质粒,转化BL21后经IPGT诱导成功表达分子质量单位为36ku的MPT53蛋白,与理论值相符。结论成功表达结核分枝杆菌MPT53蛋白,为其应用打下了基础。
- 唐宇龙杨华刘湘新秦莲花柳彬胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌克隆
