国家自然科学基金(81001028)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 相关作者：李嵚赵晨阳何琳惠林萍于涛更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第四医院中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 葫芦素E对非小细胞肺癌细胞的生长抑制作用被引量：5
- 2015年
- 目的:体外观察葫芦素E(cucurbitacin E,Cu E)对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的影响及分子作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Cu E(0、1、10、100以及1000nmol/L)处理A549细胞24、48和72小时后的细胞增殖情况。流式细胞仪检测Cu E对A549细胞凋亡的影响。Western blot法检测被处理细胞中pSTAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Fas蛋白表达水平的变化。结果:Cu E可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05),且呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪检测显示随着Cu E作用浓度的逐渐升高(0、100、200、400nmol/L),A549细胞凋亡率由(4.63±0.70)%分别提高到(6.80±0.10)%、(20.53±0.49)%、(24.57±0.55)%,差异有统计学意义(P均<0.05)。Western blot结果显示Cu E处理A549细胞,可降低pSTAT3、p-Raf-1、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达水平,增强Fas蛋白表达水平,且上述作用随Cu E浓度升高而增强。结论:Cu E可显著抑制A549细胞的增殖并诱导凋亡,其作用机制与阻断STAT3和Raf/MEK/ERK信号通路,同时激活Fas信号通路有关。
- 杨艳温艳惠郭海梅于治华刘千朔唐寅思李嵚
- 关键词：非小细胞肺癌细胞增殖细胞凋亡
- 特异性杀伤肝癌细胞的噬菌体药物载体的构建被引量：1
- 2013年
- 目的以T4噬菌体为载体,构建特异性杀伤肝癌细胞的噬菌体药物载体,并对其选择性细胞毒活性进行初步评价。方法通过噬菌体文库筛选肝癌细胞特异性结合肽（tumor specific peptide,TSP）,利用分子克隆技术和噬菌体体外展示技术,将其与噬菌体小衣壳蛋白Soc重组,并展示在T4噬菌体表面。同时通过1-乙基（-3-二甲基氨基丙级基）碳酰二亚胺[1-ethyl-3-（3-dimethylaminopropyl）carbodiimide hydrochloride,EDC]化学法,将表阿霉素（epido-xorubicin,Epi）偶联在噬菌体衣壳表面,采用MTT法在细胞水平上检测噬菌体药物载体对人肝癌细胞Bel-7402和正常肝细胞HL-7702的选择性杀伤作用。结果 Soc-TSP融合蛋白以846拷贝/噬菌体颗粒的密度展示在T4噬菌体表面,Epi载药率达每个噬菌体颗粒表面近2 000个药物分子。与游离的Epi相比,构建的T4噬菌体药物载体对肝癌Bel-7402细胞的杀伤作用提高了4~6倍,而对正常肝细胞HL-7702的影响不大。结论肿瘤特异噬菌体药物载体可提高药物对肿瘤细胞的靶向性以及肿瘤细胞对药物分子的摄入,从而实现对肿瘤细胞的特异性杀伤。
- 李嵚赵晨阳惠林萍何琳于涛
- 关键词：噬菌体药物载体表阿霉素靶向
- T4噬菌体诱导肿瘤相关巨噬细胞向M1型再极化被引量：1
- 2014年
- 目的:观察T4噬菌体对M2型巨噬细胞向M1型再极化的诱导作用,并检测再极化的M1型巨噬细胞诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡和抑制其侵袭的作用效果。方法:小鼠巨噬细胞RAW264.7经白细胞介素-4(IL-4)诱导为替代性活化巨噬细胞(M2型),以T4噬菌体对M2型巨噬细胞再极化诱导;Real-time PCR检测IL-4诱导极化及T4噬菌体再极化后巨噬细胞中IL-12、TNF-α、Arg-1、TGF-β、IL-10和iNOS基因mRNA的变化,Western blotting检测巨噬细胞内iNOS和Arg-1蛋白表达变化,ELISA法检测巨噬细胞培养上清中IL-10和IL-12的含量;流式细胞术和Transwell法分别检测T4噬菌体再极化巨噬细胞诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡和抑制其侵袭的作用效果。结果:RAW264.7细胞经IL-4处理后被诱导成为M2型巨噬细胞,其iNOS和IL-12 mRNA表达分别下降为对照组的1/2.5和1/6.2,而Arg-1和IL-10 mRNA表达分别增加了161.2和120.3倍。M2型巨噬细胞经野生型和突变型T4噬菌体处理后,IL-12、TNF-α、iNOS在mRNA和蛋白水平均明显逆转上调,IL-10、TGF-β、Arg-1则明显逆转下调,呈现M1型特征;其中突变型T4噬菌体的诱导作用显著强于野生型。野生型和突变型T4噬菌体诱导M1再极化的巨噬细胞致小鼠Lewis肺癌细胞的凋亡率较M2型巨噬细胞显著增高[(35.3±2.44)%、(39.1±2.08)%vs(4.68±0.56)%;均P<0.01)],同时,显著抑制了肺癌细胞的侵袭能力[侵袭细胞数:(43.8±7.51)、(23.2±4.33)个vs(177.5±12.33)个;均P<0.01]。结论:T4噬菌体能够诱导M2型巨噬细胞向M1型再极化,并增强巨噬细胞诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞侵袭的能力。
- 李嵚于涛何琳惠林萍赵晨阳
- 关键词：T4噬菌体巨噬细胞极化肺癌凋亡
- 葫芦素E联合顺铂或紫杉醇治疗非小细胞肺癌的体外研究被引量：2
- 2017年
- 目的:体外观察葫芦素E(CuE)联合顺铂(DDP)或紫杉醇(PTX)对非小细胞肺癌A549和H460细胞增殖的抑制作用。方法:采用MTT法检测CuE、DDP、PTX单独应用及CuE联合DDP或PTX对A549和H460细胞增殖的抑制作用。并采用CHOU-TALALAY联合指数法对药物联合应用的效果进行判定。结果:药物单用及CuE分别与DDP、PTX应用对A549和H460细胞的增殖均有抑制作用,药物合用时的中效浓度与单用时比较有不同程度的降低。CuE与DDP合用,对于A549细胞,表现为协同作用(CI<Ⅰ);对于H460细胞,大部分效应范围(0Ⅰ);对于H460细胞,同样在较低效应范围(0Ⅰ)。结论:药物联合应用的效果在不同非小细胞肺癌细胞株之间存在差异,合理的联合用药可大大减少两种药物各自的用量,从而降低药物的毒副作用。
- 杨艳李嵚温艳惠郭海梅
- 关键词：顺铂
- 展示KDR胞外区VEGF结合域的T4噬菌体对肺癌细胞增殖侵袭的抑制作用
- 2013年
- 目的:构建展示KDR的T4噬菌体并在细胞水平上检测其抑制肿瘤细胞增殖侵袭的作用及机制。方法:利用SOE-PCR的方法将KDR膜外区D2和D3与T4噬菌体小衣壳蛋白SOC基因融合并克隆到pET28b表达载体中,经IPTG诱导表达并纯化后,利用体外展示技术将重组KDR-SOC蛋白展示在T4噬菌体表面,得到T4-KDR噬菌体。MTT法检测T4-KDR噬菌体对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,并采用Transwell法检测其对VEGF促侵袭作用的影响。RT-PCR法检测T4-KDR对MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影响,并通过Western blot方法检测其对VEGF诱导ERK1/2磷酸化及其下游CyclinD1,p27,Bcl-2和Bax表达水平的影响。结果:KDR-SOC在大肠杆菌中稳定表达,展示KDR的T4-KDR噬菌体具有结合VEGF-165的能力,并显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭活性,降低MMP-2和MMP-9基因mRNA水平。Western blot结果表明T4-KDR噬菌体抑制VEGF诱导ERK1/2的磷酸化,降低CyclinD1及Bcl-2表达的同时,提高p27和Bax的表达。结论:展示KDR的T4噬菌体具有抑制肺癌细胞增殖和侵袭作用,其对MEK/ERK信号通路及其下游调控因子的影响是其作用的重要分子机制。
- 李嵚何琳惠林萍赵晨阳于涛
- 关键词：T4噬菌体增殖血管内皮生长因子受体-2
