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MeJA处理和蚧虫危害对枣树挥发物的影响被引量：3: 2012年; 枣树(Ziziphus jujube Mill)是中国北方的一种重要经济林木。日本龟蜡蚧(Ceroplastes japonicus Green)是枣园的一种破坏性天敌。研究了外源茉莉酸甲酯(MeJA)处理和日本龟蜡蚧雌成虫危害后与对照健康枣树相比挥发物的变化。枣树挥发物的收集采用顶空收集法,并使用气相色谱/质谱联用仪(GC/MS)来分析收集到的挥发物的化学成分。结果显示:MeJA处理的和蚧虫危害的枣树挥发物的化学组分在种类和含量上与对照相比都有所改变。其中MeJA处理的枣树样本中检测到22种挥发物,总挥发量为37347 ng/h;蚧虫危害的枣树样本中检测到24种挥发物,总挥发量为54292 ng/h;而健康的对照枣树挥发物中只检测到14种化合物,总挥发量也仅为18611 ng/h。经SPSS软件分析,MeJA处理部分和对照部分,日本龟蜡蚧危害部分和对照部分这两组之间都达到差异显著水平。在上述挥发物成分中,萜烯类、醇类、酯类的增加量在植物诱导化学防御方面具有重要意义,这些化合物通常被认为是与吸引天敌昆虫相关的组分。; 巩莎张艳峰薛皎亮杜仙当谢映平; 关键词：枣树日本龟蜡蚧茉莉酸甲酯挥发物

三倍体毛白杨PtDRG02基因启动子的瞬时表达分析被引量：2: 2009年; 本研究利用PCR技术从三倍体毛白杨((Populus tomentosa×P.bolleana)×P.tomentosa)基因组DNA中扩增获得抗病相关PtDRG02基因的一个启动子区(包括其下游5'端非编码区序列),命名为Ptp01。以β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因为报告基因,构建了PtDRG02基因启动子植物表达载体Ptp01/gus。以根癌农杆菌EHA105及LBA4404感受态细胞为受体,转化植物表达载体Ptp01/gus进行瞬时表达,并对启动子进行了功能活性分析,结果表明该启动子能够驱动gus报告基因在毛白杨叶片组织中表达,但表达强度弱于花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子。; 郑会全雷杨林善枝张志毅; 关键词：三倍体毛白杨 GUS

3个毛白杨病程相关蛋白基因的克隆及表达被引量：5: 2012年; 运用电子克隆及RT-PCR技术,以水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)诱导下的毛白杨(Populus to-mentosa Carr.)叶片总RNA为模板,分离获得3个病程相关蛋白基因,分别命名为PtPR-1、PtPR-5与PtPR-10。生物信息学分析后发现,这3个基因所编码的蛋白PtPR-1、PtPR-5和PtPR-10分别具有SCP、THN和Bet_v_1保守结构域,其中PtPR-1和PtPR-5均包含一段25 bp的信号肽,成熟蛋白序列与其他物种相比同源性较高;而PtPR-10无信号肽,蛋白序列与其他物种相比差异性较大,其基因组序列还存在一段91 bp的内含子。另外,实时荧光定量PCR技术分析结果表明,SA和MeJA处理后,PtPR-1与PtPR-10表达模式和转录水平均有较大差异,而Pt-PR-5的表达则未见显著变化,由此可推测,PtPR-1可能受SA和JA双重诱导,而PtPR-10可能只受SA诱导表达,在SA和JA两种信号通路的互作下,表现出不同的诱导表达模式。; 雷杨张志毅刘文凤王兴安新民林善枝郑会全; 关键词：毛白杨水杨酸茉莉酸甲酯生物信息学

实时定量PCR分析PtDr101基因hpRNA干扰下的表达被引量：1: 2011年; PtDr101基因从三倍体毛白杨(Popu1us tomentosa× P. bolleana)×P.tomentosa]中克隆获得,能够编码NBS-LRR型蛋白,受到水杨酸和甲基茉莉酸诱导表达,是一种广谱的抗病基因。本研究利用实时定量PCR技术分析转PtDr101基因hpRNA干扰载体的表达模式,分析发现4个表达模式显著差异的转基因株系,为进一步功能鉴定提供材料。本研究表明实时定量PCR能够高灵敏度、精确地检测hpRNA干扰情况下的基因表达量。; 杜娟郑会全张志毅张德强; 关键词：实时定量PCR

甜杨低温响应microRNAs的克隆与分析被引量：10: 2011年; MicroRNAs(miRNAs)作为一类21碱基左右的非编码小RNAs,参与植物生长发育的调控,并在植物对生物与非生物胁迫的应答过程中发挥重要作用。本研究依据miRNA高度保守特点,利用已公布的毛果杨(Populus trichocarpa)基因组序列设计引物,从甜杨(Populus suaveolens)基因组中克隆获得了12个miRNA基因座序列。序列比对结果表明,这些miRNA基因均为毛果杨低温响应miRNA基因的同源序列。同时,以低温(0℃)处理0～48h的甜杨幼苗为试材,通过半定量RT-PCR法对miRNA基因的成熟体序列在不同处理时间下的表达谱进行分析,结果显示,大多数miRNA成熟体序列在甜杨低温胁迫下的表达模式与其在毛果杨中的表达极为相似,由此可推测这些保守性miRNAs可能在甜杨和毛果杨两物种对低温胁迫的应答反应中发挥相似的功能,而miR168a、miR168b和miR475a在两物种间表达现象的差异,表明它们可能通过调控多种靶基因而发挥不同作用。本文结果将为进一步研究甜杨基因功能提供基础。; 孙润泽侯琦章文乐钮俊张志毅林善枝; 关键词：甜杨 MICRORNA 低温胁迫表达谱

PtWRKY14基因转化烟草及对TMV的抗性影响研究被引量：1: 2014年; PtWRKY14是从毛白杨中获得的WRKY基因,为研究PtWRKY14基因对植物抗病性的影响,构建了毛白杨PtWRKY14基因的植物表达载体pBI121-W14,通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草,PCR与Southern杂交进行转基因烟草鉴定。对获得的转基因烟草植株进行烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的接种试验,结果表明PtWRKY14基因的转化使烟草对TMV的抗性增强。荧光定量PCR检测结果表明,TMV接种后,转基因烟草中PtWRKY14的表达量显著上调,同时转基因烟草中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化物酶(Peroxidase,POD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)的表达量均高于对照组。因此,PtWRKY14可能通过上调SOD、POD、CAT的表达从而增强植物抗病性。; 王兴林善枝; 关键词：转基因烟草烟草花叶病毒抗病性

毛白杨TIR-NBS-LRR基因转化烟草的研究被引量：10: 2009年; 该文采用农杆菌介导法将从毛白杨中克隆得到的TIR-NBS-LRR抗病基因(PtDRG01)导入烟草中,经抗生素筛选和PCR分子检测,获得了一批阳性转化植株。进而对这些阳性转化植株进行烟草花叶病毒接种实验,从表型观察结果发现,在接种病毒1周和6周后,转基因烟草株系TG-11的发病程度明显低于非转基因烟草。荧光定量分析结果显示,转基因烟草株系TG-11叶片中的烟草花叶病毒(TMV)数量显著低于非转基因植株,且该转基因株系中的PtDRG01基因转录水平显著高于非转基因植株。这些结果表明,毛白杨PtDRG01基因具有明显的抗病功能,其高效表达能够显著提高烟草的抗TMV能力。该文通过对烟草的遗传转化与病毒接种实验,鉴定了PtDRG01基因的功能,可为其他TIR-NBS-LRR基因的功能鉴定提供参考。; 李海霞张志毅张谦安新民李琰刘婷婷; 关键词：毛白杨转基因烟草烟草花叶病毒抗病性

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国家自然科学基金(30872043)