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大鼠半胱氨酸蛋白水解酶-3基因真核表达质粒和RNA干扰质粒的构建及鉴定: 2011年; 目的构建SD大鼠半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3的真核表达质粒和干扰质粒，探究干扰质粒对Caspase-3表达的干预效应。方法从SD大鼠软骨终板细胞中获得模板cDNA并扩增，约834bp。克隆至载体pEGFP—N1，获得重组质粒pEGFP-N1-Caspase-3。针对Caspase-3设计4对RNAi靶点序列，克隆至载体pcDNA6．2。成功构建pcDNA6．2-caspase．3．1、pcDNA6．2-caspase-3-2、pcDNA6．2-Caspase-33、pcDNA6．2-caspase-3-4，构建对照质粒pcDNA6．2-HIiRNA。将5个干扰质粒分别与pEGFP．N1．Caspase_3（用量比为7：1）共转染至293T细胞，qPCR检测转染48h后对caspase．3表达的干预效应。结果通过菌落聚合酶链反应（PCR）、酶切及测序表明pEGFP-N1-Capase-3和干扰质粒构建成功；共转293T细胞后，qeCR示pcDNA6．2-Caspase-32、pcDNA6．2-Caspase-3-3干预组的caspase-3的表达高于对照组，分别为33％和8％，而pcDNA6．2-Caspase-3-1、pcDNA6．2-Caspase-34干预组的caspase-3的表达与对照组比较明显减少，抑制效率分别为24％和67％（P〈0．05）。结论成功构建了Caspase．3的表达质粒和干扰质粒，并证实pcDNA6．2-Caspase-34对Caspase-3的表达具有明显的抑制效应。; 吴靖平朱斌丁磊李德芳; 关键词：RNA干扰质粒

Caspase-9抑制剂对SD大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响被引量：6: 2014年; 目的探讨caspase-9抑制剂对低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡影响的研究。方法取3月龄SD大鼠椎间盘软骨终板,序贯消化法获取细胞原代培养,以1%FBS培养48 h为诱导凋亡条件。实验分为1%FBS凋亡组、caspase-9抑制剂组(Z-LEHD-FMK)及DMSO对照组,分别处理细胞48 h,后经流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测procaspase-9,active caspase-9及active caspase-3的表达。结果流式细胞仪检测显示,caspases-9抑制剂组细胞凋亡率(26.3±2.56)%与1%FBS组(40.8±0.84)%及DMSO组(40.2±1.56)%相比凋亡率较低,有显著统计学差异(P<0.05);Western blot检测caspases-9抑制剂组active caspase-9及active caspase-3较1%FBS凋亡组及DMSO对照组表达均明显减少,有显著统计学意义(P<0.05)。结论 Caspase-9抑制剂能明显抑制低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡,有望成为治疗椎间盘退变的新型药物。; 卢伟李德芳朱斌吴靖平; 关键词：胎牛血清软骨终板凋亡

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上海市卫生局科研基金(2009-35)