国家自然科学基金(81070968)
- 作品数：6 被引量：35H指数：5
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- 12／15-脂氧酶反义寡核苷酸对氧糖剥夺损伤皮质神经元中PPARγ核移位的影响被引量：3
- 2014年
- 目的观察12／15－脂氧酶反义寡核苷酸（asON-12／15-LOX）在体外培养皮质神经元中对氧糖剥夺损伤（OGD）诱导的过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）表达和核移位的影响。方法体外原代培养SD大鼠皮质神经元，随机分为正常对照组、氧糖剥夺损伤组、干预组，其中正常对照组5皿神经元、氧糖剥夺损伤组9皿神经元、干预组5皿神经元。制作体外培养皮质神经元氧糖剥夺3h再灌注24h损伤模型（OGD），干预组12／15－LOX反义寡核苷酸预处理48h后，给予OGD处理。分别采用Western印迹法和免疫荧光染色法检测12／15．LOX和PPARγ的改变。结果（1）Western印迹和免疫荧光检测显示，与正常对照组（0．25±0．14）相比，OGD组（1．73±0．78）12／15-LOX蛋白表达增加（t=-3．72，P=0．03）。Western印迹检测显示，与OGD组（1．32±0．20）相比，12／15-LOX反义寡核苷酸干预组（0．81±0．02）12／15-LOX蛋白表达降低（t=5．03，P=0．02）。差异均有统计学意义。（2）Western印迹和免疫荧光检测显示，与正常对照组（0．43±0．14）相比，OGD组（2．63±0．63）PPARγ总蛋白表达增加（t=-6．79，P=0．04）；与正常对照组（0．41±0．17）相比，OGD组（2．60±0．93）PPARγ核蛋白表达增加（t=-4．67，P=0．02）；与正常对照组（1．88±0．79）相比，OGD组（0．50±0．21）PPARγ浆蛋白表达降低（t=3．40，P=0．04）（即核移位增加）。差异均有统计学意义。（3）Western印迹和免疫荧光检测显示，与OGD组（0．23±0．08）相比，12／15-LOX反义寡聚核苷酸组（0．11±0．03）PPAR7总蛋白水平降低（t=2．83，P=0．04）。与OGD组（2．58±0．60）相比，12／15-LOX反义寡聚核苷酸组（0．44±0．10）PPARγ核蛋白表达水平降低（t=7．05，P=0．01）；与OGD组（0．18±0．11）相比，12／15-LOX反义寡聚核苷酸组（2．78±0．94）PPARγ浆蛋白表达水�
- 韩晶孙莉梁浩程焱
- 关键词：脂氧合酶PPARΓ寡核苷酸类
- 羟基红花黄色素A对谷氨酸诱导损伤神经元过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)拮抗谷氨酸诱导神经元损伤的保护机制。方法采集经体外原代培养第7天的Sprague Dawley胎鼠皮质神经元,通过形态学观察、噻唑蓝法、Westernblotting法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和磷酸化PPARγ(pPPARγ,即PPARγ的失活形式)表达水平,以探讨HSYA抗谷氨酸诱导神经元损伤的保护机制。结果经谷氨酸处理后神经元发生肿胀、部分崩解、死亡。与正常对照组相比,谷氨酸不同剂量组(1.00、5.00和10.00mmol/L组)的神经元存活率(66.60%、33.40%和21.60%)和PPARγ蛋白表达水平显著降低,对照组灰度值:1.06±0.18,谷氨酸5.00和10.00mmol/L组灰度值分别为:0.32±0.09、0.28±0.07(均P=0.000),pPPARγ蛋白表达水平明显升高,灰度值分别为:0.37±0.05、1.83±0.17和1.75±0.21(均P=0.000)。HSYA与谷氨酸共同处理后神经元形态明显改善、细胞相对存活率提高,谷氨酸5.00mmol/L,HSYA0.01、0.10和1.00mmol/L组分别为33.40%、35.30%、51.00%和72.50%(P=0.742、0.033、0.002),PPARγ蛋白表达水平呈现逐渐升高趋势,对照组,谷氨酸5.00mmol/L,HSYA0.01、0.10和1.00mmol/L组灰度值分别为:1.20±0.16、0.25±0.06、0.39±0.10、0.41±0.12、0.37±0.08,但差异未达到统计学意义(均P>0.05),pPPARγ蛋白表达水平降低,对照组,谷氨酸5.00mmol/L,HSYA0.01、0.10和1.00mmol/L组灰度值分别为:0.51±0.14、1.91±0.25、1.70±0.26、1.25±0.23、0.85±0.19,(P=0.022、0.004、0.000)。结论 HSYA对由谷氨酸诱导的神经元损伤具有保护作用,其机制与抑制PPARγ蛋白磷酸化即抑制PPARγ活性有关。
- 刘星苗孙莉梁浩孙国敏程焱
- 关键词：色素类谷氨酸神经元过氧化物酶体增殖物激活受体
- 过氧化氢损伤原代皮质神经元中PPARγ的改变被引量：6
- 2015年
- 目的 在原代培养皮质神经元中,观察过氧化氢（H2 O2）损伤是否诱导了过氧化物酶体增殖物激活受体γ （PPARγ）的磷酸化修饰及活性改变,从调节PPARγ的角度探讨H2 O2的损伤机制.方法 体外原代培养SD大鼠皮质神经元,完全随机分为正常对照组、H2O2损伤组（分别给予250、500、750 μmol/L H2O2作用2h）、U0126（ERK1/2激活抑制剂）组（10 μmol/L U0126预处理30min后给予500 μmol/L H2O2作用2h）,采用细胞形态学观察、MTT法测定细胞存活率、锥虫蓝染色测定细胞死亡率、Western印迹法检测PPARγ、p-PPARγ（磷酸化的PPARγ）蛋白表达水平及PPARγ的核移位（即PPARγ活性）的改变.结果 （1）与正常对照组相比,经不同浓度（250、500、750 μmol/L） H2O2损伤2h后,神经元相对存活率降低（74.8％±5.2％、53.6％±6.7％和26.5％±5.8％,均P＜0.05）,死亡率增加（正常对照组6.6％±1.0％,H2 O2损伤组23.1％±2.8％、48.2％±4.1％、75.9％±4.4％,均P＜0.05）.（2）与正常对照组相比,H2O2 500μmol/L损伤组神经元PPARγ蛋白表达无明显变化（正常对照组1.25±0.07,H2 O2损伤组1.16±0.08,t=1.44,P＞0.05）,而p-PPARγ蛋白表达增加（正常对照组0.90 ±0.04,H2O2损伤组1.26±0.09,t=-6.48,P＜0.05）.同时PPARγ胞质蛋白表达增加（正常对照组0.49±0.04,H2O2损伤组0.77±0.03,t=-10.35,P＜0.05）,胞核蛋白表达下降（正常对照组0.76±0.03,H2 O2损伤组0.20±0.06,t=14.82,P＜0.05）（即核移位下降）.（3）与H2 O2损伤组相比,抑制ERK1/2激活降低p-PPARγ蛋白表达水平（H2O2损伤组0.85±0.05,U0126组0.42±0.14,t =4.91,P＜0.05）、增加PPARγ核移位（胞质损伤组1.03±0.16,U0126组0.60±0.04,t=4.58,P＜0.05;胞核损伤组0.16±0.04,U0126组0.87±0.11,t=-10.41,P＜0.05）,同时增加神经元存活率（70.8％±1.3％,P＜0.05）,降低神经元死亡率（29.8％±3.4％,P＜0.05）.结论 原代皮质神经元中,PPARγ的磷酸化参与了H2 O2的细胞�
- 王宁韩晶徐艳炜梁浩程焱孙莉
- 关键词：H2O2PPARΓ磷酸化皮质神经元
- 羟基红花黄色素A抑制脑组织蛋白质硝基化的体外研究被引量：5
- 2013年
- 目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对体外亚铁血红素/亚硝酸钠/过氧化氢(heme/NaNO2/H2O2)途径引起脑组织蛋白质硝基化的抑制作用。方法模拟体内heme/NaNO2/H2O2硝基化途径,分别以牛血清白蛋白和脑组织蛋白为硝基化底物,分为对照组及药物干预组,HSYA的终浓度依次为0.01mmol/L、0.1mmol/L、1mmol/L。以Western blotting法检测蛋白质酪氨酸硝基化水平。结果 Heme/NaNO2/H2O2途径可引起牛血清白蛋白和脑组织蛋白显著的硝基化修饰,加入不同浓度HSYA后,蛋白质硝基化水平均呈剂量依赖性地降低,其中以1mmol/L HSYA的抑制作用最明显,与对照组相比,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论 HSYA可剂量依赖性地抑制heme/NaNO2/H2O2途径在体外对脑组织蛋白的硝基化修饰;提示HSYA抑制蛋白质硝基化反应可能是其对抗脑血管疾病与神经系统变性疾病的分子机制之一。
- 赵瑞杰孙莉刘星苗梁浩赵丽辉程焱
- 关键词：羟基红花黄色素A蛋白质硝基化
- 羟基红花黄色素A对缺血损伤脑组织蛋白质硝基化修饰的影响被引量：10
- 2013年
- 目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对缺血损伤脑组织蛋白质硝基化修饰的影响。方法模拟体内蛋白质硝基化的2条主要途径,体外以BSA为底物,分为对照组及低、中、高干预组(以HSYA 0.01、0.1和1mmol/L干预),Western blot法检测HSYA对BSA硝基化水平的影响。另选SD大鼠45只,随机分为假手术组、模型组和治疗组(HSYA 10mg/kg),每组15只。后2组大鼠制作大脑中动脉闭塞再灌注模型,采用Western blot法、免疫组织化学法观察脑组织蛋白质硝基化水平及HSYA对硝基化修饰的影响;TTC染色观察脑梗死体积的改变。结果与对照组比较,低、中、高干预组蛋白质硝基化水平呈剂量依赖性地降低,以高干预组的抑制作用最明显,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组脑组织中3-硝基酪氨酸仅有少量表达,与假手术组比较,模型组表达明显增加,而治疗组表达较模型组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组脑梗死体积较模型组减少48.86%(P<0.01)。结论 HSYA对缺血损伤脑组织蛋白质硝基化具有抑制作用,这可能是其脑缺血再灌注损伤保护作用的分子机制之一。
- 赵瑞杰孙莉刘星苗梁浩程焱
- 关键词：脑缺血再灌注损伤羟基红花黄色素A蛋白质硝基化
- 脑缺血中12/15-脂氧合酶对过氧化物酶体增殖物激活受体γ调节作用的初步探讨被引量：9
- 2014年
- 目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中12/15-脂氧合酶表达及活性的改变,并就12/15-脂氧合酶对过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptors γ,PPARγ）的调节作用进行初步探讨.方法 将健康雄性SD大鼠用随机数字表法随机分为假手术组（n=12）、缺血再灌注组（n=18）、干预组（n=12）,制作大鼠大脑中动脉阻塞60 min再灌注24 h模型（MCAO/R）,干预组于MCAO/R前30 min给予12/15-脂氧合酶的产物15-羟基二十碳四烯酸（15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE）.缺血60 min、再灌注24 h后,分别采用蛋白质印迹法和免疫荧光法检测缺血皮质中12/15-脂氧合酶、PPARγ的表达,通过ELISA法测定12/15-脂氧合酶产物15-HETE的表达水平.结果 （1）与假手术组相比,蛋白质印迹检测显示,缺血再灌注组12/15-脂氧合酶蛋白表达增高,差异有统计学意义（假手术组：0.458±0.026,缺血再灌注组：0.688±0.063,t=-8.195,P〈0.05）;免疫荧光检测显示12/15-脂氧合酶与PPARγ在缺血脑组织中具有定位一致性,即共表达性;酶联免疫检测显示,缺血再灌注组12/15-脂氧合酶产物15-HETE的含量（ng/mg）明显增加,差异有统计学意义（假手术组：31.202±2.188,缺血再灌注组：59.402±4.579,t=-12.787,P〈0.05）;（2）与缺血再灌注组相比,蛋白质印迹检测显示12/15-脂氧合酶产物15-HETE干预组PPARγ总蛋白（缺血再灌注组：1.584±0.116,15-HETE干预组：3.826±0.198,t=-23.884）表达增加,核蛋白（缺血再灌注组：12.167±1.131,15-HETE干预组：25.726±1.843,t=-15.360）表达增加、浆蛋白（缺血再灌注组：2.394±0.373,15-HETE干预组：鼠1.184±0.342,t=5.860）表达降低（即PPARγ活性增加）,差异均有统计学意义（均P〈0.05）.结论 脑缺血再灌注损伤时12/15-脂氧合酶表达和产物增加,12/15-脂氧合酶可能通过其产物对PPARγ表达和活性具有调节作用.
- 徐艳炜孙莉梁浩程焱
- 关键词：脑缺血再灌注损伤PPARΓ
