辽宁省博士科研启动基金(20081032)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 腺病毒载体介导PTEN基因转染大肠癌细胞的实验研究
- 2011年
- 目的观察PTEN腺病毒载体(Ad5-PTEN)对大肠癌细胞生物学行为的影响。方法将目的基因PTEN导入腺病毒载体Ad5,与辅助质粒共同转染人胚肾母细胞(293细胞)构建Ad5-PTEN。测定病毒滴度后转染新分离的大肠癌细胞。结果表达增强型绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad5-EGFP)和Ad5-PTEN在体外可以转染大肠癌细胞,其中在Ad5-EGFP腺病毒转染的大肠癌细胞观察到了绿色荧光;在Ad5-PTEN腺病毒转染的大肠癌细胞培养上清液中检测到了PTEN蛋白的表达。结论 Ad5-PTEN在体外可以有效转染大肠癌细胞,且携带的外源基因可以在胰岛细胞中稳定表达,为大肠癌的防治研究奠定了基础。
- 张睿宋纯
- 关键词：直肠肿瘤腺病毒载体PTEN
- CARP1基因克隆、表达及其泛素连接酶活性的鉴定
- 2013年
- 目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性。方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-κB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)引起的NF-κB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFα引起的NF-κB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础。
- 张睿苏文莉孙走南杨益刘京梅何湘
- 关键词：CASPASE真核表达泛素连接酶细胞生长
