国家自然科学基金(30672315)
- 作品数：10 被引量：16H指数：2
- 相关作者：束蓉宋忠臣程岚蒋少云李希庭更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院复旦大学上海市口腔医学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 体外培养人牙周牙髓相关细胞中釉原蛋白的表达
- 2009年
- 目的:观察釉原蛋白(amelogenin,Am)基因在体外培养的人牙龈上皮细胞及口腔外胚间充质来源细胞(人牙龈成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和人牙髓细胞)中的表达。方法:采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测培养细胞中釉原蛋白mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹技术检测培养细胞中釉原蛋白的表达。结果:培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞中均未检测到釉原蛋白及其mRNA的表达。结论:体外培养的人牙周膜成纤维细胞、牙髓细胞、牙龈成纤维细胞和牙龈上皮细胞不表达釉原蛋白基因。
- 李希庭束蓉文海燕程岚蒋少云
- 关键词：釉原蛋白体外培养
- 釉基质蛋白对人骨髓基质细胞增殖和矿化的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:观察釉基质蛋白(enamelmatrix proteins,EMPs)对人骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)细胞周期和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:体外培养人骨髓基质细胞,以200μg/ml EMPs作用于细胞为实验组,以不加EMPs为对照组。流式细胞仪检测EMPs对BMSCs细胞周期的影响,碱性磷酸酶试剂盒检测ALP的活性。结果:体外培养的人BMSCs生长良好,200μg/ml浓度的EMPs能提高细胞的ALP活性;影响细胞周期变化,EMPs组S期细胞数目较多,为19.48%,而对照组S期细胞数目为9.89%。结论:釉基质蛋白可促进人骨髓基质细胞的分化,影响细胞周期变化。
- 宋忠臣束蓉谢玉峰
- 关键词：釉基质蛋白骨髓基质细胞增殖矿化细胞周期
- 基因芯片分析釉基质蛋白对hBMSCs基因表达谱的影响被引量：2
- 2007年
- 目的应用基因芯片技术分析釉基质蛋白(EMPs)对人骨髓基质细胞(hBMSCs)基因表达谱的影响。方法全骨髓法体外传代培养hBMSCs。以200μg/mLEMPs刺激hBMSCs作为实验组,以正常培养的hBMSCs作为对照组。培养5d后,选择含4096种人类基因的cDNA基因芯片进行检测和分析。运用实时PCR方法对呈差异表达基因中的4条进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果。结果hBMSCs经EMPs刺激后,有27条差异表达基因,其中18条基因表达上调,9条基因表达下调。经实时PCR检测的4条差异表达基因结果与基因芯片结果一致。结论应用基因表达谱芯片可筛选经EMPs诱导后hBMSCs的差异表达基因。为进一步研究EMPs促进牙周组织再生的分子学机制奠定了基础。
- 束蓉宋忠臣
- 关键词：釉基质蛋白骨髓基质细胞基因芯片基因表达
- 人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白。方法利用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm。经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误。在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别。结论成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm。大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础。
- 程岚束蓉薛京伦陈金中田聆方煜翔
- 关键词：原核表达载体融合蛋白
- 人牙槽成骨细胞的体外培养和生物学特性检测被引量：1
- 2009年
- 目的：研究人牙槽成骨细胞体外培养及其生物学特性。方法：取人牙槽骨用组织块法进行体外细胞培养,用倒置显微镜观察细胞生长、细胞形态,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;在条件培养液中培养后用酶动力学方法作碱性磷酸酶（ALP）活性定量测定、Alizarin red染色和von Kossa染色作成骨特性检测,同位素3H掺入结合细菌胶原酶消化法测定I型胶原的合成。结果：培养第5天细胞从组织块中爬出,再培养14～16 d可以传代;在条件培养液中细胞ALP活性明显,Alizarin red染色和von Kossa染色细胞呈阳性,体外培养人牙槽成骨细胞具有分泌I型胶原的功能。结论：体外培养的人牙槽成骨细胞生长良好,并具有成骨细胞的形态和生物学特性。
- 蒋少云束蓉
- 关键词：牙槽骨成骨细胞细胞培养
- 釉基质蛋白促进牙周组织再生机制的研究进展被引量：3
- 2008年
- 釉基质蛋白是釉质特异性蛋白,目前的研究表明该蛋白具有促进牙周组织再生的作用。而釉基质蛋白对参与牙周组织再生的细胞成分所起的重要调节作用,近年来受到较多关注并取得了研究进展。本文就釉基质蛋白促进牙周组织再生机制的研究进展作一综述。
- 蒋少云束蓉
- 关键词：釉基质蛋白牙周再生细胞
- 人釉原蛋白基因转染牙周膜细胞的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的:构建含有人釉原蛋白(human amelogenin,hAm)基因的慢病毒载体质粒,用重组慢病毒感染人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs),初步探讨釉原蛋白基因修饰种子细胞用于牙周组织工程修复的可行性。方法:采用RT-PCR方法获取hAm编码基因,构建慢病毒载体质粒FUAmW,重组质粒经双酶切及测序鉴定。聚乙烯亚胺(polytheylenimine,PEI)法三质粒共转染293T细胞,获取重组慢病毒FUAmW FUGW,感染hPDLCs,应用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(green fluorescene protein,GFP)表达,流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测慢病毒载体转染效率。通过RT-PCR检测hPDLC中hAm基因的表达。结果:测序证实,RT-PCR产物序列与Genebank公布的Am编码序列一致,双酶切证实目的片段插入重组质粒。293T细胞及hPDLCs感染72h后,荧光显微镜下可见绿色荧光。FCM测得GFP感染2种细胞的阳性率分别为69.46%和33.99%。RT-PCR证实重组慢病毒FUAmW感染的细胞能表达hAm基因。结论:成功构建含有人釉原蛋白基因的慢病毒载体质粒,经293T细胞包装,得到重组慢病毒可感染牙周膜细胞。
- 于光束蓉孙颖程岚宋忠臣张秀丽
- 关键词：釉原蛋白重组慢病毒载体牙周膜细胞
- 人釉原蛋白基因重组慢病毒载体的构建及在293T细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含人釉原蛋白(human Amelogenin,hAm)成熟肽编码区基因的慢病毒载体FUAmW,并观察在重组慢病毒感染的293T细胞中釉原蛋白的表达。方法:以构建好的重组质粒PQE30-Am为模板,采用PCR技术体外扩增hAm成熟肽编码区。将扩增产物与慢病毒载体转移质粒FUGW分别用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,构建重组慢病毒载体,转移质粒FUAmW,并进行酶切及测序鉴定。通过聚乙烯亚胺(polytheylenimine,PEI)法将三质粒共转染293T细胞,包装得到重组慢病毒FUGW和FUAmW,然后分别离体感染293T细胞,培养72h后,经荧光显微镜下观察和流式细胞计数检测感染效率,采用RT-RCR及Western印迹法检测釉原蛋白基因的表达。结果:重组质粒经测序证实,插入片段与人釉原蛋白成熟肽基因序列完全一致。流式细胞仪测得重组病毒感染293T细胞绿色荧光蛋白(green fluoresence protein,GFP)的阳性率为67.38%。RT-RCR和Western印迹均证实,重组慢病毒FUAmW感染的293T细胞能够表达人釉原蛋白。结论:成功构建携带人釉原蛋白成熟肽基因的重组慢病毒载体质粒,以293T细胞包装得到的重组人釉原蛋白病毒能感染真核细胞并获得表达。
- 程岚束蓉宋忠臣张秀丽薛京伦陈金中田聆黄璐
- 关键词：釉原蛋白重组慢病毒载体转染
- 重组猪釉原蛋白对人牙龈上皮细胞生物学活性的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨重组25kDa猪釉原蛋白(recombinant porcine amelogenin,rPAm)对人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGEC)黏附、增殖和迁移的影响。方法:采用不同浓度的rPAm(0、5、10、20μg/mL)刺激第2代HGEC,在相应的时间点,应用细胞计数法测定黏附和增殖的效果,以创面愈合模型测定细胞迁移效果,采用GraphPad Prism软件对数据进行统计学分析。结果:在黏附实验中,rPAm对HGEC的黏附有抑制作用,且效果随着时间的递增和rPAm浓度的增高而加强;在增殖实验中,随着时间的递增和rPAm浓度的增高,HGEC增殖能力下降;在迁移实验中,rPAm能抑制HGEC迁移,20μg/mL效果最好,24h后呈现剂量和时间依赖性。结论:rPAm能显著抑制人牙龈上皮细胞的黏附、增殖和迁移,存在剂量和时间依赖关系。
- 李希庭束蓉宋忠臣周彦玢
- 关键词：釉原蛋白牙龈上皮细胞增殖迁移
- 猪牙胚釉原蛋白成熟肽基因原核表达克隆的构建
- 2008年
- 目的克隆猪釉原蛋白(pAm)成熟肽编码区基因片段,并构建含有该基因的重组原核表达质粒,为制备基因工程化的重组pAm奠定基础。方法从新生小猪牙胚组织中抽提总RNA,逆转录合成牙胚cDNA,通过PCR扩增pAm成熟肽编码序列(约540bp),所得目的基因插入表达载体质粒PGEX4T1,转化大肠杆菌DH5α。重组质粒PGEX4T1-pAm经双酶切和核苷酸序列分析鉴定。结果重组质粒PGEX4T1-pAm经双酶切和测序鉴定证实载体质粒PGEX4T1中插入的基因片段与pAm成熟肽基因序列完全相同。结论从发育期猪牙胚组织中克隆到釉原蛋白成熟肽编码序列可成功构建含有pAm成熟肽基因的重组表达质粒。
- 程岚束蓉
- 关键词：釉原蛋白逆转录聚合酶链式反应重组质粒
