国家重点基础研究发展计划(2004CB518706)
- 作品数：8 被引量：31H指数：2
- 相关作者：甄永苏刘秀均陈淑珍何维崔莲仙更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院华北煤炭医学院四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 六种抗肿瘤药物影响小鼠精子生成过程的定量组织学比较被引量：2
- 2007年
- 目的通过对小鼠睾丸的定量组织学研究,观察丝裂霉素C等6种抗肿瘤药物对小鼠睾丸生精过程的影响。方法制作小鼠睾丸组织切片,显微镜下观察,记录第Ⅶ相细精管的精原细胞数及第Ⅳ相细精管的次级精母细胞和处于减数分裂中期、后期的细胞数。结果腹腔注射给药,丝裂霉素C和美法仑可使小鼠睾丸精原细胞接近完全消失,而多柔比星、长春新碱、甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶对精原细胞没有影响。此6种抗肿瘤药物对次级精母细胞以及处于减数分裂中期、后期的细胞均无明显影响。给小鼠腹腔注射丝裂霉素C2mg.kg-1,3d后第Ⅶ相细精管的精原细胞接近完全消失,14d后精母细胞接近完全消失,21d后精子细胞消失,35d后3种细胞数目基本恢复正常。结论不同抗肿瘤药物对小鼠睾丸精原细胞的影响有明显的差异。精原细胞对丝裂霉素C高度敏感。6种抗肿瘤药物对次级精母细胞和处于减数分裂中期、后期的细胞数量无明显影响。
- 李毅陈淑珍甄永苏
- 关键词：丝裂霉素C精子发生精原细胞
- 糖化重组生存素腺病毒疫苗抗肿瘤作用的实验研究被引量：2
- 2007年
- 背景与目的:生存素在调控细胞凋亡和有丝分裂过程中起着重要作用,在正常分化的组织中不表达或表达极低,而在胚胎组织和大部分肿瘤组织中广泛表达,而这一特点为恶性肿瘤的基因治疗提供了很好的靶标。本研究制备糖化重组生存素腺病毒疫苗,观察其抗肿瘤作用并探讨其作用机制。方法:将重组生存素腺病毒和甘露聚糖在氧化条件下偶联,同时建立小鼠结肠癌和Lewis肺癌模型,以糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗荷瘤小鼠,观察肿瘤体积和小鼠生存时间。对小鼠肿瘤组织作TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡。为了检测疫苗的保护作用,预先以糖化重组生存素腺病毒疫苗免疫接种小鼠,或合用抗CD4、CD8和NK单克隆抗体阻断相应的淋巴细胞亚群,再接种肿瘤,观察小鼠肿瘤生长情况。结果:糖化重组生存素腺病毒疫苗治疗组小鼠肿瘤生长受到明显抑制,无明显不良反应发生,小鼠的生存时间明显延长,肿瘤细胞凋亡明显增加。同时,糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫,这一免疫反应依赖于CD4和CD8淋巴细胞,也部分依赖于NK细胞。结论:糖化重组生存素腺病毒疫苗能诱导机体产生特异性的主动免疫反应,诱导肿瘤细胞凋亡,具有明确的抗肿瘤作用,值得进一步研究。
- 李秋文艳君吴扬罗彦卢铀
- 关键词：生存素疫苗肿瘤
- 特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞的构建及生物学功能鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法:利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,共转染J.RT3-T3.5细胞,双压力抗生素筛选获得表达特异性γδTCR的转染细胞,通过ELISA和Re-altime PCR检测该转染细胞在接受抗原刺激后IL-2的分泌情况。结果:ELISA和Realtime PCR结果显示表达DBS4.3特异性γδTCR的转染细胞在DBS4.3特异性抗原仲丁胺和抗γδTCR抗体刺激作用下,活化分泌IL-2。结论:构建了特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台,为研究γδTCR识别抗原的机制奠定了基础。
- 郗雪艳曹伟崔莲仙何维
- 关键词：ΓΔT细胞抗原识别
- 抗肿瘤抗生素云南霉素诱导人肝癌HepG_2细胞凋亡被引量：1
- 2011年
- 目的观察抗肿瘤抗生素云南霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,MTT法检测云南霉素对细胞增殖的影响,Hoechest33342法检测细胞凋亡的形态变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白PARP的表达,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果云南霉素对HepG2细胞增殖抑制的IC50值为24.13μmol/L;HepG2细胞经云南霉素作用24h后,可诱导胞内凋亡标志蛋白PARP的切割,并随浓度的增高而作用增强;而HepG2细胞经云南霉素作用48h后,可出现典型的凋亡形态变化,呈剂量依赖性引起细胞凋亡。结论云南霉素可抑制人肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导细胞发生凋亡。
- 张方博刘秀均陈淑珍吴淑英甄永苏
- 关键词：凋亡HEPG2细胞
- 昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白及其生物学功能的初步鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的建立昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白技术平台并鉴定其表达产物的生物学功能。方法用搭桥PCR获得γ9Fc和δ2(OT3)Fc基因片段,构建成pBACp10ph-γ9/δ2(OT3)-Fc重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫sf9细胞,表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白;Western blot鉴定TCRγ9/δ2-Fc蛋白表达位置;胞内流式细胞仪检测γ9Fc和δ2(OT3)Fc两基因表达效率;蛋白G亲和层析后,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度;激光共聚焦扫描显微镜技术和生物传感器技术检测了TCRγ9/δ2-Fc蛋白与SKOV3细胞和MNS蛋白的结合特性。结果成功构建pBACp10ph-γ9/δ2(OT3)-Fc表达载体,经鉴定发现TCRγ9/δ2-Fc蛋白在sf9细胞内表达,但γ9Fc和δ2(OT3)Fc两基因的表达效率有较大差异。纯化得到一定纯度的TCRγ9/δ2-Fc蛋白,并且具有与SKOV3细胞和MNS蛋白结合的特性。结论成功建立昆虫杆状病毒表达系统表达TCRγ9/δ2-Fc融合蛋白的技术平台,表达产物TCRγ9/δ2-Fc可以在体外模拟TCRγδ识别抗原的特性。
- 郭阳郑静胡愉崔莲仙何维
- 关键词：昆虫杆状病毒表达系统
- 赖氨大黄酸通过抑制HER-2信号通路诱导乳腺癌SK-Br-3细胞凋亡被引量：15
- 2008年
- 为研究赖氨大黄酸(rhein lysinate,RHL)对人乳腺癌细胞株SK-Br-3细胞增殖、凋亡的影响及HER-2信号通路在其中的作用。应用MTT法检测赖氨大黄酸对SK-Br-3细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡;应用Western blotting检测HER-2信号通路蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平;应用RT-PCR和免疫化学方法分别检测HER-2 mRNA和蛋白表达水平。结果显示,赖氨大黄酸能有效抑制乳腺癌SK-Br-3细胞增殖,作用48 h的IC50值为85μmol.L-1,并能诱导其凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;Western blotting结果显示,赖氨大黄酸抑制HER-2蛋白表达和蛋白磷酸化,抑制NF-κB蛋白表达,升高p53和p21蛋白表达;RT-PCR和免疫化学结果表明,赖氨大黄酸能抑制HER-2 mRNA的转录水平,从而抑制其蛋白表达。因此,赖氨大黄酸能有效抑制SK-Br-3细胞增殖,并诱导其凋亡,HER-2/NF-κB/p53/p21参与了赖氨大黄酸诱导SK-Br-3细胞凋亡的过程。赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的难题,并且能够通过HER-2信号通路诱导细胞凋亡,有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。
- 林雅军黄云虹甄永占刘秀均甄永苏
- 关键词：细胞凋亡乳腺肿瘤
- 胶毒素增强内质网应激诱导剂衣霉素的抗肿瘤活性
- 2013年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂胶毒素与内质网应激诱导剂衣霉素联合对肿瘤细胞的凋亡诱导能力。方法采用四甲基偶氮唑蓝法观察药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用;采用两药相互作用指数评价药物联合是否存在协同作用。采用流式细胞术结合annexin V/PI双染法检测细胞凋亡比例。采用蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达水平。结果胶毒素与衣霉素对人纤维肉瘤HT-1080细胞的IC50值分别为(1.44±0.23)和(26.14±6.14)μmol·L-1。在有效剂量下,胶毒素与衣霉素联合可以使细胞出现典型的凋亡和坏死的形态改变,两药联合可以产生协同作用。流式细胞术检测结果显示,胶毒素与衣霉素联合后,细胞凋亡比例显著上升。尤其是0.2μmol·L-1胶毒素联合衣霉素组,凋亡比例达到66.6%,两药相互作用指数为0.649。蛋白质印迹法检测结果显示,凋亡相关蛋白caspase-8、caspase-3、PARP及NF-kB表达水平发生相应改变。结论胶毒素可以显著增强内质网应激诱导剂衣霉素对HT-1080的凋亡诱导能力,这一研究结果为抗肿瘤药物的联合提供了新的给药方案。
- 弓建华郑艳波李毅甄永苏
- 关键词：内质网应激蛋白酶体衣霉素肿瘤
