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国家自然科学基金(30170080)

作品数：7 被引量：37H指数：5
相关作者：刘进元杨晓东黄波金龙国李甜更多>>
相关机构：清华大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域：生物学农业科学理学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇生物学
  • 1篇农业科学
  • 1篇理学

主题

  • 4篇英文
  • 3篇基因
  • 2篇水稻
  • 2篇萝卜
  • 2篇克隆
  • 2篇分子
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质表达
  • 1篇蛋白质表达谱
  • 1篇蛋白质水平
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇盐胁迫
  • 1篇氧化胁迫
  • 1篇三维结构建模
  • 1篇上游调控序列
  • 1篇顺式作用元件
  • 1篇天然蛋白质
  • 1篇胁迫

机构

  • 6篇清华大学

作者

  • 6篇刘进元
  • 3篇杨晓东
  • 1篇李甜
  • 1篇金龙国
  • 1篇黄波
  • 1篇王丰

传媒

  • 3篇生物化学与生...
  • 1篇中国科学（C...
  • 1篇高等学校化学...
  • 1篇Acta B...

年份

  • 1篇2009
  • 1篇2007
  • 1篇2006
  • 2篇2005
  • 1篇2003
共 7 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
棉花中一个类DREB1/CBF基因(GhDREB1L)的分子克隆及其功能分析被引量：11
2006年
DREB1/CBF类转录因子在植物抵抗外界环境胁迫上起到非常重要的作用,而且对于利用基因工程技术来提高植物的抗逆性也非常有用.从棉花中分离出一个编码DREB1/CBF类蛋白(GhDREB1L)的cDNA,并对该蛋白质的序列特性、DNA结合特性及转录本的表达特征进行了分析.GhDREB1L含有一个保守的AP2/ERF结构域,其氨基酸序列与其他植物中DREB家族的DREB1/CBF组成员高度相似.采用Ni-NTA亲和层析技术,成功纯化了在BL21(DE3)菌株中表达的GhDREB1L蛋白的DNA结合区.凝胶滞留实验揭示,纯化的GhDREB1L融合蛋白能够特异性地与已经得到鉴定的DRE元件(核心区,ACCGAC)以及胚胎发育晚期丰富蛋白基因LEAD113启动子区中的类DRE元件(核心区,GCCGAC)结合.半定量RT-PCR显示GhDREB1L基因在棉花子叶中受到低温、干旱以及NaCl处理的诱导.这些结果暗示了棉花GhDREB1L转录因子可能是通过与DRE元件的结合,在低温、干旱及高盐的应答途径中起重要作用.
黄波金龙国刘进元
关键词：干旱LEA
用免疫亲和层析法纯化萝卜PHGPx天然蛋白(英文)被引量：7
2005年
萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(RsPHGPx)是一个定位于线粒体的蛋白质.为了阐明该蛋白质线粒体定位信号的准确切割位点,采用了免疫亲和层析方法纯化天然的RsPHGPx.用重组RsPHGPx 蛋白免疫兔子获得了抗RsPHGPx 的多克隆抗血清,以重组RsPH G Px 蛋白为配体,采用亲和层析技术对抗血清进行了纯化,得到了单特异性的抗RsPHGPx 的抗体.将纯化好的抗体偶联到一个N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)预先激活的琼脂糖柱子上,装配成一个以单特异性的抗RsPHGPx 抗体为配体的免疫亲和层析柱.经过对纯化条件的摸索和优化,形成了一个简单、特异的一步法纯化方案.按照该方案,从萝卜幼苗线粒体总蛋白质提取物中纯化到一个分子质量与预期值相一致的特异蛋白质.免疫印迹分析表明,该蛋白质被抗RsPH G Px 的抗血清特异识别.酶活性分析表明,该蛋白质具有显著的PH G Px 活性.这些结果表明,纯化到的特异蛋白质是萝卜的RsPH G Px天然蛋白.这是首个关于定位于植物细胞器的PH G Px 蛋白纯化的报道.这一结果为准确测定RsPH G Px 信号肽的切割位点奠定了基础,并将有助于对植物PH G Px 的亚细胞定位机制及其生理功能的深入研究.
杨晓东刘进元
关键词：天然蛋白质多克隆抗体萝卜
萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因结构及其调控序列分析(英文)被引量：7
2005年
磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)家族的重要一员,是目前已知能直接保护生物膜免受过氧化损伤的唯一酶类.此前的研究表明,萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(RsPHGPx)编码一个有生理功能的过氧化物酶,并且RsPHGPx基因的表达可能受发育和环境胁迫信号的复杂调控.要深入了解该基因的表达调控机制首先必须阐明RsPHGPx基因的结构及其上游调控序列.DNA印迹表明萝卜RsPHGPx基因以单拷贝的形式存在于基因组中.以基因组DNA为模板,通过常规PCR与染色体步行相结合的方法克隆到了一段3.3kb长的RsPHGPx基因组序列.分析发现,该基因由7个外显子和6个内含子组成,所有内含子的剪切位点均符合真核生物GT-AG规则.另外还发现该基因的上游基因是生物素合成酶基因;位于RsPHGPx基因上游的调控序列只有不足300bp.这些结构特征与拟南芥AtGPX3基因极其相似.顺式作用元件的数据库搜索发现RsPHGPx基因的上游调控序列含有多个响应激素(如E-Box和W-Box)、胁迫(如转录因子MYB和MYC的结合位点)和光(如BoxⅡ和Ⅰ-Box)信号的元件.RNA印迹分析表明RsPHGPx基因的表达受到脱落酸(ABA)和连续光照(在黄化苗中)处理的负调控,受到冷胁迫(4℃)的正调控,这暗示了预测的顺式作用元件的调控作用.然而,除草剂paraquat对该基因表达的正调控作用,暗示了某些与氧化胁迫相关的未知元件的存在.这些结果进一步印证了RsPHGPx基因的表达受发育和环境胁迫信号复杂调控的推测.这是迄今为止首个关于植物PHGPx基因结构和上游调控序列的系统报道,为今后全面认识植物PHGPx基因的表达调控机制奠定了必要基础.
杨晓东刘进元
关键词：萝卜基因结构上游调控序列顺式作用元件
水稻磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在蛋白质水平上的组织和诱导表达特征(英文)被引量：5
2009年
蛋白质是生命活动的主要承担分子,了解蛋白质在有机体中的时空分布对于正确解析蛋白质的功能十分重要.磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)是目前发现的唯一能够直接还原膜上脂类过氧化物的抗氧化酶,在保护生物膜免受过氧化损伤方面有着重要作用.采用Westernblot技术,分析了水稻PHGPx(OsPHGPx)在水稻不同组织以及多种胁迫条件下的蛋白质表达特征.结果表明,OsPHGPx在成熟水稻植株内主要分布于叶组织中,以旗叶中含量最高,而在水稻幼苗中则在茎及叶组织中均检测到较强的杂交信号.OsPHGPx在幼苗中的表达受到H2O2和NaCl的强烈诱导,但植物激素对其表达的影响较弱.H2O2和NaCl的诱导效果呈现出时间及剂量的相关性,当用0.5mmol/LH2O2处理12h或用500mmol/LNaCl处理24h,此时OsPHGPx表达量达到最大值.对H2O2清除剂二甲基硫脲处理的水稻幼苗,外源H2O2的再处理并不能诱导OsPHGPx的表达,而NaCl的诱导效果并不受影响,说明H2O2可能并不介导NaCl诱导OsPHGPx的表达.这些结果为进一步研究OsPHGPx在水稻中生物学功能奠定了基础.
李甜杨晓东刘进元
关键词：水稻蛋白质表达谱氧化胁迫盐胁迫
同步PCR技术及其在植物核酸分子定量中的应用(英文)被引量：8
2003年
同步PCR是一种集生化、光电和计算机技术于一体的封闭式DNA扩增系统 ,采用荧光染料将扩增与检测过程结合在一起 ,实现了在PCR过程中在线显示PCR反应 ,通过检测荧光强度来绝对定量起始模板的拷贝数。该技术大大简化和加速了核酸分子的定量过程 ,不仅快速、灵敏、准确、重复性好 ,而且很容易计算出待测样品中核酸分子的绝对起始拷贝数。同微阵列等分子生物技术一起 ,同步PCR技术将会在功能基因解析和病害分子诊断等方面发挥重要作用。本综述除了介绍同步PCR技术的原理和应用外 ,还介绍了定量拟南芥Aux IAA基因的转录水平的实验 ,并就同步PCR操作过程中的问题进行了讨论。
刘进元
关键词：基因表达病害分子诊断
水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及晶体生长条件初筛被引量：1
2007年
将水稻PHGPx(OsPHGPx)的编码序列克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化为大肠杆菌进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了可用于晶体学研究的OsPHGPx,其纯度超过95%,具备明显的PHGPx活性.质谱显示OsPHGPx的精确分子量为19642.5553,与理论分子量基本一致.OsPHGPx在多个晶体生长条件下出现微晶.三维结构同源建模显示OsPHGPx的结构为硫氧还蛋白折叠形式.
王丰刘进元
关键词：水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶纯化晶体生长三维结构建模
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