国家自然科学基金(30070356)
- 作品数：16 被引量：28H指数：3
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- 脂联素、球状脂联蛋白与糖尿病动脉粥样硬化被引量：6
- 2005年
- 脂肪内分泌功能的发现是近年内分泌学领域的重大进展之一.新近发现的脂联素是由脂肪细胞分泌并在脂肪细胞中高度表达的一种与细胞外基质相互作用的血浆蛋白,其血浆浓度为5～30 mg/L,约占全部血清蛋白成分的0.01%,具有抗动脉粥样硬化、抗糖尿病、增加胰岛素敏感性、抑制肝糖产生和增加骨骼肌葡萄糖摄取的作用.球状脂联蛋白是脂联素的球状结构域部分,在人血浆中已被发现,它的药理作用与全长型脂联素有些不同,但二者均具有抗动脉粥样硬化的作用.研究脂联素、球状脂联蛋白在人类的生理作用意义重大,可能有助于揭示动脉粥样硬化形成的机制,并可为防治糖尿病大血管并发症提供新的方案.
- 李丙蓉邓华聪
- 关键词：内科学糖尿病动脉粥样硬化脂联素
- 人脂联素基因重组腺病毒对内皮细胞丙二醛和超氧化物歧化酶水平的影响
- 2010年
- 目的 检测人脂联素基因重组腺病毒（Ad-apM1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）丙二醛和超氧化物歧化酶（SOD）水平的影响,探讨Ad-apM1的抗氧化效应.方法 将Ad-apM1转染HUVEC,观察对HUVEC增殖的影响.双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）检测细胞培养液中人脂联素蛋白水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD水平.结果 Ad-apM1对HUVEC增殖无明显影响,用感染复数（MOI）为50的Ad-apM1转染HUVEC 24、48、72 h后培养液中脂联素浓度显著升高.转染AdapM1的HUVEC细胞SOD显著升高,而丙二醛显著降低（均P〈0.05）.100μmol/L H2O2处理HUVEC 6、12和24 h后丙二醛水平显著升高,SOD水平显著降低（均P〈0.05）,而转染Ad-apM1可逆转其作用（P〈0.05）.结论 本研究制备的Ad-apM1能有效转染HUVEC并分泌人脂联素,具有抗氧化、减轻过氧化氢对内皮细胞的氧化损伤作用.
- 李丙蓉郑丹邓华聪兰丽珍郑宏庭
- 关键词：脂联素腺病毒人脐静脉内皮细胞丙二醛超氧化物歧化酶
- 细胞凋亡与1型糖尿病被引量：2
- 2002年
- 孙辽邓华聪张志利
- 关键词：细胞凋亡1型糖尿病脱噬作用膜糖蛋白类CD95抗原
- 硒对人脐静脉内皮细胞ECV-304单核细胞趋化蛋白-1表达的影响被引量：3
- 2003年
- 目的 观察硒对人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)表达的影响。方法 分别用高葡萄糖、糖基化终末产物 ,高胰岛素和过氧化氢孵育人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 ;在先加入 10 0 nmol/L硒后 ,再给予以上 4种因素 ,分别检测人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA的表达并比较。结果 4种因素均可作为独立因素 ,导致人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4 MCP- 1m RNA表达量增加 ;硒能抑制 4种因素所致的MCP- 1m RNA表达。结论 硒抑制 MCP- 1m RNA在人脐静脉内皮细胞 ECV- 30 4中的表达。
- 李艳波邓华聪郑丹李呼伦周宏博
- 关键词：硒脐静脉内皮细胞ECV-304单核细胞趋化蛋白-1抗氧化剂
- 含绿色荧光蛋白及人胰岛素基因的真核表达载体的构建
- 2004年
- 目的构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因与人胰岛素基因的重组真核表达载体。方法将人胰岛素基因插入到真核表达载体pIRES2-EGFP的EcoRⅠ和BamHⅠ位点中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-INS。酶切鉴定,测序证实。结果重组真核表达载体pIRES2-EGFP-INS经限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ酶切,电泳后显示360bp的INS的目的片段和5.3kb的pIRES2-EGFP载体片段,进一步测序并证明重组质粒连接正确。结论成功构建了pIRES2-EGFP-INS重组质粒,为简便快速了解胰岛素基因的转染效率奠定了基础。
- 兰丽珍邓华聪孙辽郑丹郑宏庭弓军胜
- 关键词：胰岛素基因真核表达载体
- NOD小鼠胰岛内TNF/TNFR1凋亡通路的动态变化被引量：1
- 2004年
- 随着病程的进展和胰岛炎的加重,NOD小鼠胰腺γ干扰素(IFNγ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、肿瘤坏死因子受体(TNFR)1和半胱氨酸蛋白32(CPP32)mRNA表达增加,胰岛细胞及浸润的炎症细胞TNFα、TNFR1、CPP32蛋白表达增加,提示Th1细胞因子和TNF/TNFR1凋亡通路在1型糖尿病发病中起重要作用。
- 孙辽兰丽珍邓华聪张志利刘云峰肖彧君赵同峰
- 关键词：TNFRNOD小鼠凋亡通路CPP32TH1细胞因子
- 带信号肽人胰岛素原突变体的构建及在COS-7细胞中的表达被引量：4
- 2004年
- 目的 :构建带信号肽人胰岛素原突变体的真核表达载体并在COS - 7细胞表达出成熟的人胰岛素。方法 :采用PCR体外定点突变技术 (PCR -SDM) ,将普通细胞内furin蛋白酶的识别和切割位点Arg -X -Lys -Arg -样序列 ,引入人胰岛素原C肽两端 ,同时加上信号肽、Kozak序列和限制性内切酶的酶切位点并克隆至载体pcDNA3.1(+)中 ,构建成人胰岛素原突变体的真核表达载体 ,经测序验证后转染COS - 7细胞 ,RT -PCR、Western印迹、放射免疫法检测其在COS - 7细胞中的表达。结果 :DNA测序结果表明在预期位点突变符合要求 ,经RT -PCR、Western印迹、放射免疫鉴定 ,构建的人胰岛素原突变体的真核表达载体转染的COS - 7细胞可表达、分泌人成熟胰岛素。结论 :构建了人胰岛素原突变体的真核表达载体 ,并成功地在COS -
- 兰丽珍邓华聪孙辽郑丹弓军胜刘东方郑宏庭
- 关键词：胰岛素原定点突变克隆COS细胞
- 葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 构建葡萄糖激酶 (glucokinase ,GK)基因逆转录病毒表达载体及稳定的产毒细胞系 ,为将GK基因应用于糖尿病的基因治疗打下基础。方法 质粒pCMV4 GKZ1经EcoRⅠ BamHⅠ双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体PLXSN ,构建成重组逆转录病毒表达载体PLX GK ,采用酶切及测序对重组体进行鉴定。而后脂质体转染PLX GK至包装细胞PA3 17,检测培养上清病毒滴度 ,挑选滴度较高的稳定产毒细胞系并对其行PCR及免疫组化鉴定。结果 构建了GK基因逆转录病毒表达载体PLX GK ,经酶切及序列分析证实目的基因插入位点和读码框架正确、无突变 ;建立了稳定产毒细胞系PA3 17 GK ,其培养上清平均病毒滴度为 6.8× 10 5cfu ml,最高为 1.8× 10 6 cfu ml ,PCR及免疫组化证实GK基因整合入PA3 17 GK细胞基因组并有GK的表达。
- 郑宏庭邓华聪蹇锐兰丽珍方芳
- 关键词：葡萄糖激酶基因逆转录病毒载体
- 骨形成蛋白-9于2型糖尿病时在肝组织中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的研究2型糖尿病鼠肝组织骨形成蛋白-9(bone morphogenetic proteins-9,BMP-9)基因转录及蛋白表达的变化。方法将大鼠随机分为2型糖尿病模型组与正常对照组,分别于造模后5、10、20 d处死,以RT-PCR及Western-blot对肝组织BMP-9基因转录及蛋白表达水平进行检测与分析。结果2型糖尿病模型组BMP-9基因转录及蛋白表达水平与正常组相比均显著性降低(P<0.05);并且2型糖尿病大鼠5、10、20 d处死组BMP-9基因转录及蛋白表达水平呈逐步下降趋势。结论2型糖尿病大鼠肝组织BMP-9基因转录及蛋白表达水平较正常显著降低,这一变化可能与2型糖尿病的发生发展相关。
- 郑宏庭方芳邓华聪陈卫
- 关键词：2型糖尿病肝组织
- 逆转录病毒载体介导胰岛素原基因突变体与葡萄糖激酶基因共转染的应用价值被引量：2
- 2004年
- 目的 研究逆转录病毒载体介导基因共转染的效率 ,探讨其在基因共转染领域的应用价值。方法 以携葡萄糖激酶 (glucokinase ,gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体 (mutantproinsulingene ,mpin)的逆转录病毒共同感染HepG2细胞 ,经G418筛选 ,放免法、SDS PAGE、Western blot挑选联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞 ,RT PCR鉴定。结果 G418筛选 3周获阳性细胞克隆 ,采用放射免疫法、SDS PAGE、Western blot从 2 0个细胞克隆中挑选出联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞 4株 ,选取 1株命名为细胞克隆“β” ;RT PCR证实细胞“β”中已有两个目的基因的转录。结论 在需要目的基因长期表达的基因共转染领域 ,逆转录病毒载体仍有一定的应用价值 ,但如何提高其介导的基因共转染效率有待进一步探究。
- 郑宏庭邓华聪蹇锐兰丽珍方芳
- 关键词：逆转录病毒载体基因共转染
