浙江省自然科学基金(301580)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：余海马文学易平勇王青青黄常新更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江省杭州市第三人民医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SEA基因与GPI信号肽序列融合基因的真核表达载体的构建和序列分析被引量：3
- 2002年
- 目的 将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A (staphylococcusenterotoxinA ,SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶(hPLAP 1 )C末端信号肽序列 ,即糖基化磷脂酰肌醇 (glycosyl phosphatidylinositol,GPI)附着信号序列 ,拼接成融合基因 ,并构建该融合基因的真核表达载体。方法 利用基因SOEing法 ,分别扩增hPLAP 1C末端信号肽序列和SEA基因 ,然后将二段基因拼接起来 ,拼接后与pGEM T克隆载体连接 ,再亚克隆到真核表达载体pcDNA3 .1 (+)中 ,测序鉴定。结果 分别成功扩增出hPLAP 1C末端信号肽序列 1 31bp和SEA基因 789bp ,并将二段基因序列成功拼接 (90 1bp) ,且成功构建了真核表达载体pcDNA3 .1 (+) /SEA GPI,经测序是正确的。结论 真核表达载体pcDNA3 .1 (+) /SEA GPI的构建 ,为研究SEA GPI抗肿瘤作用奠定了基础。
- 易平勇余海马文学
- 关键词：SEA基因融合基因真核表达载体肿瘤
- 表皮生长因子受体跨膜区编码序列的克隆
- 2002年
- 目的 :克隆表皮生长因子受体跨膜区 ( Transm em brane,TM )编码序列 ,为构建跨膜型超抗原和细胞因子的表达载体奠定基础。方法 :以表达 c- erb- B2癌基因的中国卵巢癌细胞系 HO- 8910细胞的 RN A逆转录产物( c DNA)为模板 ,用两条针对 c- erb- B2全长基因序列中编码 TM区序列特异性的引物 ,采用 RT- PCR方法克隆 T M区片段并测序。结果 :实验克隆的 TM编码序列 ,经测序证实与 Genbank中接受号为 M11730的 TM区序列完全一致 ;与接受号为 X0 336 3的 TM区序列存在 G→ A的多态性。结论 :成功地克隆了 TM编码序列 ,并证实源于中国的卵巢癌细胞系 H O- 8910中所包含的表皮生长因子受体基因中编码的 TM区序列存在多态性。
- 马文学余海易平勇金洪传严杰
- 关键词：表皮生长因子受体跨膜区克隆原癌基因基因表达C-ERB-B2
- 糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白的制备及抗肿瘤作用研究被引量：5
- 2004年
- 目的制备糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白(mB7.1GPI),研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用。方法用已构建的重组糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1的表达载体pcDNA3.1(+)mB7.1GPI,转染到CHO细胞中,表达和纯化mB7.1GPI。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用。建立C57BL6小鼠的淋巴瘤模型,观察用mB7.1GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。结果mB7.1GPI融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上,能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL2与IFNγ。融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期。结论糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防。
- 易平勇余海王青青黄常新李经忠马文学
- 关键词：B7.1小鼠GPI融合蛋白磷脂酰肌醇PCDNA3
- 超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A锚定的膜表达热休克蛋白70的肠癌瘤苗的抗癌治疗作用研究被引量：2
- 2006年
- 目的研制超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)锚定的膜表达热休克蛋白(HSP)70的肠癌细胞瘤苗,研究其抗肿瘤治疗作用。方法以先期实验制备的膜表达HSP70肠癌细胞株CT26。扩增后以本研究组早先研制的跨膜型SEA蛋白转染法锚定肠癌细胞,灭活并制备双重修饰的肠癌细胞瘤苗。观察瘤苗在体外对小鼠脾淋巴细胞的增殖刺激效应；在BALB/c小鼠结直肠癌移植模型中观察瘤苗的抗癌治疗作用：瘤体生长抑制和荷瘤鼠的生存时间；并同时检测实验鼠的自然杀伤细胞(NK)和细胞毒淋巴细胞(CTL)活性。结果激光共聚焦显微镜和流式细胞术均证明瘤苗细胞的双重修饰：SEA锚定,HSP70表达并结合在瘤苗细胞膜表面。比较对照,SEA锚定或膜表达HSP70的单一修饰瘤苗均显示出较高的鼠淋巴细胞增殖刺激效应；较强的瘤体生长抑制,并使荷瘤鼠的生存时间延长。而SEA锚定的膜表达HSP70的双重修饰瘤苗比单一修饰瘤苗,有着更高的淋巴增殖刺激效应,更强的瘤体生长抑制作用,并使荷瘤鼠的生存时间进一步延长。结论成功研制了超抗原SEA锚定的膜表达HSP70的肠癌细胞瘤苗,此双重修饰瘤苗对结直肠癌荷瘤小鼠有更强的治疗作用。
- 黄常新余海杨关根王青青李达马文学沈芬平
- 关键词：超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A热休克蛋白70瘤苗
