国家自然科学基金(30672391)
- 作品数：4 被引量：27H指数：2
- 相关作者：刘文超杨静悦曹大勇斯小明马骥更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂与肿瘤相关性的研究进展被引量：11
- 2009年
- 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂相关基因的突变和表达失调可直接或间接影响细胞的周期、增殖以及凋亡等功能,与肿瘤的发生发展密切相关。p16能够抑制CDK4/CDK6介导的Rb蛋白产物的磷酸化,其CpG岛异常甲基化参与宫颈癌的发生发展;p21作为p53的下游调节因子,与肿瘤血管的生成、淋巴转移及预后相关;p27作用机制复杂,与乳腺癌预后关系密切,并可恢复耐药乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性;p57在细胞周期G1到S期的转变中至关重要,其表达程度与部分肿瘤的恶性程度相关,它还参与了肿瘤细胞的凋亡过程。了解这些基因的结构和作用机制,探究其在肿瘤发生、发展中所产生的作用,进而寻找有效治疗靶点,已成为肿瘤分子生物学关注的热点。
- 马骥刘文超
- 关键词：细胞周期细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂肿瘤
- 含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备
- 2009年
- 目的:构建含人AFP基因的腺病毒载体,体外转染树突状细胞,制备树突状细胞肝癌瘤苗。方法:将AFP基因亚克隆到pIND载体和Shuttle2载体中,构建穿梭载体Shuttle2-AFP。用PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切后将所获AFP基因片段再与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成pAdeno-AFP重组腺病毒载体。其后,用重组腺病毒载体转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体。通过酶切、PCR对腺病毒载体进行鉴定。包装好的重组病毒载体pAdeno-AFP体外感染树突状细胞制备树突状细胞肝癌瘤苗后,FACS分析pAd-eno-AFP/DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测AFP水平。结果:酶切、PCR鉴定证实,穿梭质粒插入片段为AFP基因。包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带AFP基因感染树突状细胞,pAdeno-AFP/DC能高水平的表达CD1a,CD11c,CD80,CD86以及HLA-DR,并分泌较高水平的AFP。结论:构建成功的含AFP腺病毒载体可以在树突状细胞中表达AFP,为DC瘤苗的进一步研究奠定了基础。
- 杨静悦曹大勇刘文超斯小明
- 关键词：树突状细胞腺病毒载体AFP转染
- VEGF启动子介导鼠α1,3半乳糖基转移酶表达及其对缺氧的人肝癌细胞HepG2的靶向杀伤效应被引量：1
- 2009年
- 目的:利用血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子介导鼠α1,3半乳糖基转移酶(α1,3GT)在缺氧肝癌细胞HepG2中靶向表达并检测其诱导的人血清天然抗体对肝癌细胞的杀伤效应,为肝癌的靶向基因治疗方法提供新的思路。方法:利用PCR从Balb/c小鼠肝组织中扩增出小鼠VEGF基因启动子片段并插入到荧光素酶报告载体中;用所构建的荧光素酶报告载体瞬时转染HepG2细胞;经缺氧诱导后检测转染细胞中荧光素酶活性;进一步通过基因重组构建受VEGF基因启动子调控的鼠α1,3GT重组逆转录病毒载体并稳定转染HepG2细胞;转染细胞在缺氧条件下培养后,通过CDCC试验检测人血清对转染细胞的杀伤效应。结果:在转染重组有VEGF基因启动子的荧光素酶报告载体的HepG2中,荧光素酶的活性是对照组的2-3倍;通过CDCC实验发现转染有鼠α1,3GT重组逆转录病毒载体的HepG2细胞经缺氧培养后对人血清的杀伤效应更加敏感。结论:利用VEGF基因启动子介导鼠α1,3GT在缺氧肿瘤细胞中靶向表达并诱导人血清天然抗体对肿瘤细胞产生杀伤效应在肿瘤的靶向基因治疗中具有潜在的临床应用价值。
- 喻召才刘文超陈衍斯晓明曹国武
- 关键词：血管内皮生长因子肝细胞癌缺氧
- IL-18基因增强肿瘤抗原致敏DC诱导的CTL特异性杀伤肝癌细胞被引量：15
- 2009年
- 目的:探讨腺病毒介导的白细胞介素-18(IL-18)基因转染能否使肿瘤抗原冲击的树突状细胞(dentritic cell,DC)在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应。方法:携IL-18的重组腺病毒载体感染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL-18-HepG2/DC),FACS分析AdIL-18-HepG2/DC表面分子的表达,ELISA法检测IL-18的分泌水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖能力,MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞杀伤效应。结果:AdIL-18-HepG2/DC较未转染DC能高水平地表达CD1a、CD11c、CD80、CD86以及HLA-DR;较未经IL-18转染的DC分泌较高水平的IL-18。AdIL-18-HepG2/DC能非常有效地刺激自体T细胞增殖(CPM值为228 018±1 079),其刺激强度显著强于AdIL-18DC、HepG2/DC、AdlzcZ/DC及DC(均P<0.05)。当靶细胞为HepG2时,AdIL-18-HepG2/DC诱导的CTL杀伤活性显著高于其他各组(均P<0.05),并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比。结论:IL-18基因转染且肝癌抗原致敏的DC可以显著增强DC的特异性抗肝癌效应。
- 杨静悦曹大勇刘文超斯小明
- 关键词：白细胞介素-18肿瘤抗原
