国家自然科学基金(31130072)
- 作品数：5 被引量：24H指数：4
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- IL10在牛副流感病毒3型感染中的作用及其调控机制
- 牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza3virus，BPIV3)是引起犊牛呼吸道感染的重要病原体之一，世界各国的牛群感染BPIV3的抗体阳性率通常在50％到90％之间。BPIV3可感染肺上皮细胞与肺泡...
- 高明春
- 关键词：发病机制白细胞介素10免疫抑制
- 文献传递
- 裂解酶LysGH15的CHAP片段与底物互作的关键位点
- 2017年
- 金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysGH15对金葡菌表现出广谱高效的抗菌活性,本课题组已深入研究其三维结构,其中CHAP片段是LysGH15起催化作用的关键活性片段。本试验进一步通过分子模拟和对接的方法预测出CHAP与底物多肽DGlnNH2-LLys-DAla-5Gly结合的"口袋"结构,该结构由D33、S35、F36、Y50、R71、T72及N75这些氨基酸位点组成。由于脂肪族非极性氨基酸丙氨酸侧链最短且不带电荷,因此将这些位点均突变为丙氨酸,逐一研究它们对CHAP片段催化活性的影响:圆二色谱试验结果说明突变体二级结构并未发生变化;酶谱试验结果定性的说明F36突变为丙氨酸后突变体蛋白F36A的活性完全丧失,而其他位点的氨基酸突变后蛋白活性并未发生明显改变;细菌浊度测定和菌落计数试验进一步证明突变体F36A活性完全丧失,而其他突变体活性不变;鉴于F36位于"口袋"结构的"口"的部位,36位氨基酸很可能参与到CHAP与底物多肽的结合。本试验鉴定了LysGH15的CHAP与底物多肽互作过程中起关键作用的氨基酸位点。
- 胡丽媛程梦珺张玉凤张蕾蔡若鹏孙长江冯新雷连成顾敬敏王烨韩文瑜
- 关键词：分子对接金黄色葡萄球菌
- 金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysK的表达及其多克隆抗体的制备被引量：4
- 2014年
- 将噬菌体与细菌孵育25min提取噬菌体感染细菌的总RNA,通过逆转录的方法获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到目的片段,以pET-15b为载体构建重组质粒pET-15b-lysK并转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达金黄色葡萄球菌噬菌体K裂解酶基因lysK,表达产物蛋白经镍柱纯化后,测定LysK的裂解活性、裂解谱,并免疫家兔制备多克隆抗体。结果表明,成功诱导表达可溶性LysK并获得重组蛋白,酶谱试验证明LysK对金黄色葡萄球菌具有裂解活性,LysK比噬菌体K裂解谱广。制备的兔多克隆抗体能够与LysK发生特异性反应且具有较高效价,为后续进行LysK体内治疗研究打下了基础。
- 李跃宫鹏娟夏斐斐宋军顾敬敏张蕾杨梅孙长江冯新韩文瑜
- 关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶多克隆抗体
- 铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶LysYH6的表达与活性被引量：4
- 2015年
- 以耐药性铜绿假单胞菌为宿主菌分离并筛选出1株烈性噬菌体YH6,根据电镜下的形态特征,YH6为短尾噬菌体家族的成员。通过对YH6的全基因组序列测定和分析,确定了其裂解酶基因,并通过原核表达获得了噬菌体的裂解酶Lys YH6。菌落计数及浊度下降法表明:该裂解酶在EDTA(25 mmol/L)存在的条件下对铜绿假单胞菌表现出了显著的抑菌活性。具有抑菌活性裂解酶Lys YH6的获得为治疗和预防耐药性铜绿假单胞菌引起的感染开辟了新思路。
- 杨梅杜崇涛顾敬敏韩文瑜宫鹏娟雷连成孙长江
- 关键词：铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶抗菌活性
- 应用噬菌体GH15和K治疗金黄色葡萄球菌感染被引量：8
- 2013年
- 【目的】研究金黄色葡萄球菌噬菌体GH15和K的生物学特性及联合用于治疗金黄色葡萄球菌感染的潜力。【方法】通过透射电镜观察噬菌体GH15和K的形态;测定二者的裂解谱和一步生长曲线;通过体外裂解实验和体内治疗实验分别测定单独使用GH15、K及二者混合使用时的裂解能力和对菌血症小鼠的保护效果。【结果】通过电镜观察发现两个噬菌体的外形相似,但GH15的尾部比K的长。GH15裂解谱较宽,可以裂解28株金葡菌,而K仅能裂解7株金葡菌。通过对两株噬菌体感染7株共同宿主菌形成的一步生长曲线进行拟合曲线分析,表明二者对不同宿主菌的增殖趋势是不同的。在体外,混合噬菌体与单个噬菌体的抑菌活性无明显差别;在体内实验中,混合噬菌体表现出优于单个噬菌体的治疗效果,用较低的剂量即可以达到高剂量单个噬菌体的治疗效果。【结论】GH15和K所形成的混合噬菌体在治疗金黄色葡萄球菌感染具有更大的应用潜力。
- 刘晓贺顾敬敏韩文瑜李跃韩东张庆明路荣宋军冯新雷连成
- 关键词：噬菌体鸡尾酒疗法
- NDM-1肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其对小鼠菌血症的治疗研究被引量：9
- 2012年
- 噬菌体疗法在对抗多重耐药病原菌引起的感染方面具有很大的应用潜力。本研究从污水中分离到一株新的噬菌体，命名为NKP-1，并对噬菌体NKP-1的主要生物学特性进行研究。通过电镜观察确定NKP-1为短尾噬菌体，裂解试验表明该噬菌体为烈性噬菌体，具有很高的增值效率。体外试验表明它能够快速感染超强耐药的肺炎克雷伯菌株BAA-2146（NDM-1）并将其裂解。通过腹腔注射单一剂量的NKP-1（2×10^7pfu／mL）就可以有效地保护BAA-2146（4×10^9cfu／mL）感染引起的小鼠菌血症模型。在肺炎克雷伯菌BAA-2146与噬菌体NKP-1体外共同培养的过程中，我们分离到对该噬菌体具有抗性的突变菌株，通过动物试验确定该突变株表现为极低的毒力，且不影响NKP-1的治疗效果。本研究为利用噬菌体治疗多重耐药菌感染提供了理论基础与试验依据。
- 路荣顾敬敏刘晓贺李跃韩东宋军冯新韩文瑜
- 关键词：NDM-1多重耐药性肺炎克雷伯菌噬菌体
