国家自然科学基金(30672378)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
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- 相关机构：四川大学华西医院四川大学第四军医大学更多>>
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- Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响
- 2009年
- 目的研究细胞周期分裂蛋白Cell divisioncy cle42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用LipofectamineTM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48h后Cdc42mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。结果RT-PCR和Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。结论Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。
- 刘素蕊张思源刘明朱亚杰周继陶黄娟唐秋琳陈向征郎楠毕锋
- 关键词：结肠癌CDC42RHOSIRNA
- Rac1小干扰RNA对胃肠道肿瘤细胞恶性生物学行为的影响被引量：8
- 2009年
- 目的观察Rac1小干扰RNA(Rac1 siRNA)对胃肠道肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法Rac1 siRNA在lipofectamineTM2000介导下转染胃癌SGC803细胞和结直肠癌Lovo细胞,转染48h后,采用半定量RT-PCR和Western blot技术分别检测Rac1mRNA及蛋白的表达;Cell Counting Kit-8检测Rac1siRNA转染细胞的增殖变化;损伤刮擦实验和体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力;用流式细胞仪检测转染细胞株的凋亡。结果成功转染Rac1 siRNA的肿瘤细胞,RT-PCR及Western blot显示Rac1 mRNA和蛋白表达在相应的肿瘤细胞中都明显下降;Rac1 siRNA对肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞的凋亡。结论Rac1与胃肠道肿瘤细胞的恶性生物学行为密切相关。Rac1 siRNA能够部分逆转胃癌细胞SGC803和肠癌细胞Lovo的恶性生物学行为。
- 黄娟郎楠刘明陈济周继陶朱亚杰刘素蕊唐秋琳陈向征毕锋
- 关键词：RAC1SIRNA
- p53蛋白及其突变体对RhoE基因转录调控的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探索p53蛋白及其突变体对RhoE基因转录调控的影响。方法:构建pEGFP-wt-p53质粒,利用基因定点突变PCR技术构建p53单点和双点突变体质粒,构建pGL3-RhoE-promotor-Luc质粒。以P21基因的启动子序列(P21-promoter-luc)为阳性对照,EGFP-N1空载体为阴性对照,将野生型和突变型p53质粒瞬时转染PC3(p53-null)细胞,利用双荧光素酶报告基因和Westernblot方法检测p53蛋白及其突变体蛋白在转录水平和蛋白水平对RhoE基因表达的影响。结果:电泳及测序表明以上质粒均构建成功。双荧光素酶报告基因检测显示野生型p53蛋白可调控RhoE基因转录,但其突变体丧失对RhoE的转录调控作用(P<0.05),且不同位点的p53突变体蛋白之间对RhoE转录调控作用的差别无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果与基因转录结果一致。结论:RhoE是受p53蛋白调控的基因之一,而p53突变体失去了在转录水平调控RhoE表达的作用。
- 朱亚杰苏晓妹程朋张涛毕锋
- 关键词：P53蛋白RHOE突变转录
- 肺癌和乳腺癌组织中RhoE的表达及其临床意义被引量：5
- 2008年
- 背景与目的Rho家族蛋白与肿瘤细胞的生长、分化、转移有着密切的关系。本研究通过观察RhoE在肺癌、乳腺癌以及相应癌旁组织中的表达情况及其与临床病理分级的关系,为探索RhoE的生物学功能和临床意义提供依据。方法运用免疫组化SABC法检测62例肺癌和34例乳腺癌及相应癌旁组织中RhoE的表达水平。结果RhoE在乳腺和肺正常组织中普遍表达,但在肿瘤组织表达低下或缺失,而且这种差异在乳腺组织中要高于肺组织。RhoE在乳腺癌组织中的染色平均值为3.65±0.62,在相应癌旁组织中为10.53±0.44,明显高于肿瘤组织(t=12.402,P<0.001);在肺癌组织中的染色平均值为2.19±0.19,在癌旁组织中为4.11±0.24,高于相应肿瘤组织(t=7.123,P<0.005),并且随着肿瘤分化程度的降低染色强度有下降的趋势(x^2=26.536,P<0.005)。结论RhoE在肿瘤组织中表达下降,结合前期实验结果及国外新近的研究成果,可以认为RhoE在肺癌和乳腺癌的发生发展中具有明显的负调控作用,因此对RhoE进行进一步研究将为肿瘤的分子靶向治疗提供新的靶点。
- 朱亚杰许峰周继陶刘素蕊黄娟罗德云邱萌金伯泉毕锋
- 关键词：RHOE乳腺癌肺癌抑癌基因
- 一个新的与12位密码子共存的K-ras基因突变位点
- 2009年
- 目的:检测大肠癌组织中K-ras基因的突变情况以指导临床治疗。方法:通过提取15例大肠癌石蜡组织中的DNA并进行PCR扩增,之后采用国际金标准方法-直接测序法进行检测获得突变信息。结果:15例大肠癌石蜡组织样本中K-ras有4例发生突变,突变率为26.6%。值得注意的是发现一个新的突变位点-密码子42,并且与密码子12突变共存。结论:密码子42的突变进一步证明K-ras突变不仅局限于密码子12,13,61,还有与密码子12共存的42位突变。
- 陈向征罗婷刘明郎楠朱亚杰唐秋琳李立兰毕锋
- 关键词：K-RAS基因大肠癌点突变
- 胃癌中P53蛋白转录调控活性的分析及其临床意义被引量：12
- 2010年
- 目的探讨P53蛋白转录调控活性在胃癌发生发展中的作用。方法应用双荧光素酶报告基因测试（dual—luciferase reporter assay）检测人类胃癌细胞和正常细胞中p53转录调控活性，并通过逆转录-PCR对细胞中p58全长进行扩增，构建pMD18-T—p53重组质粒测序，检测p53突变对其活性的影响。应用免疫组织化学的方法联合检测P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2三种蛋白在76例胃癌及癌旁组织中表达水平，通过分析它们与肿瘤的临床病理特征及各个分子之间的相关性来间接反应P53在组织中的转录调控活性。结果双荧光素酶报告基因显示p53转录调控活性在正常细胞中明显高于肿瘤细胞，在p53基因发生突变的细胞系MKN28中P53蛋白转录活性最低。免疫组化结果显示P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2在癌旁组织中的表达明显高于肿瘤组织（P〈0．05），且随着肿瘤TNM分期的增高有表达降低的趋势（P〈0．05）。P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2之间的相关性分析结果显示3个分子在胃癌组织和癌旁组织中的表达呈正相关（P〈0．05）。结论P53蛋白转录调控活性的变化在胃癌的发生发展中起着重要的作用，p53突变可以影响其转录调控活性。P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2联合检测可以作为间接反映P53蛋白转录调控活性的效应分子。
- 朱亚杰邱萌周继陶刘明刘素蕊黄娟毕锋
- 关键词：P53蛋白MDM2蛋白胃癌
