郑州市重大科技攻关项目(03BA02BMYB05)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 相关作者：许予明张瑞郭建新张世杰宋波更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：郑州市重大科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组Mash1慢病毒表达载体的构建
- 2006年
- 目的:克隆小鼠Mash1基因的全长cDNA,构建其慢病毒表达载体Lentivirus-Mash1,为进一步研究Mash1在神经发育及干细胞神经分化中的作用奠定基础。方法:应用RT-PCR从小鼠13d胚胎中扩增出Mash1cDNA片段,经回收纯化与pGEM-T载体连接并转化感受态细菌J M109,通过蓝白筛选、PCR扩增和双酶切鉴定出阳性菌落,并对其进行基因测序。BamHⅠ和XholⅠ双酶切pGEM-T-Mash1和Lentivirus获得的目的基因双粘片段与Lentivirus双粘线性质粒相连接,转化J M109,酶切方法鉴定重组阳性菌落。结果:PCR扩增、酶切分析及序列测定证实成功获取Mash1cDNA克隆;酶切鉴定证实Lentivirus-Mash1含有大小正确的正向Mash1cDNA片段。结论:成功建立了小鼠Mash1cDNA克隆并构建了慢病毒表达载体Lentivirus-Mash1。
- 张瑞许予明赵国强郭建新宋波张世杰韩志强
- 关键词：慢病毒表达载体RT-PCR基因
- 小鼠SRY同源盒基因SOX1的克隆及其真核表达载体pEGFP-C_3-SOX1的构建
- 2006年
- 目的:克隆小鼠SRY同源盒基因SOX1的全长cDNA,构建其携带增强型荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C3-SOX1,为进一步研究SOX1在间充质干细胞神经分化中的作用奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从小鼠早期胚胎中扩增带有EcoRⅠ和HindⅢ双酶切位点的SOX1 cDNA片断,与pGEM-T载体连接后转化感受态细菌JM109,然后通过蓝白筛选、酶切技术筛选、鉴定出阳性菌落并进行DNA测序。用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切获得目的片断,再与EcoRⅠ和HindⅢ双酶切过的pEGFP-C3质粒相连接,重组子转化JM109感受态大肠杆菌,酶切方法鉴定阳性菌落。结果:多酶切及DNA测序结果表明提取及纯化的pEGFP-C3-SOX1质粒含有SOX1 cDNA碱基片段,方向及大小正确。结论:从小鼠胚胎中可成功克隆SOX1全长cDNA,并构建其真核表达载体pEGFP-C3-SOX1。
- 郭建新许予明赵国强张瑞宋波张世杰张世峰李京红
- 关键词：真核表达载体
- β淀粉样蛋白诱导胚胎大鼠神经干细胞凋亡被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨 β淀粉样蛋白 (Aβ)对大鼠神经干细胞凋亡诱导作用。 方法 分离、培养胚胎大鼠神经干细胞 ,Aβ 2 5～ 35 (2 0 μmol/L)与神经干细胞共育 4 8h后 ,原位检测神经干细胞凋亡。 结果 Aβ 2 5～ 35作用后细胞死亡率上升 ,4 8h后死亡率趋于平稳 ,凋亡检测表明细胞主要通过凋亡途径死亡。结论 Aβ 2 5～
- 鄢文海陈正跃崔景彬李开荣王俊萍王建枝许予明朱红灿
- 关键词：Β淀粉样蛋白神经干细胞凋亡
