国家自然科学基金(81101575)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
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- 超声内镜引导下射频消融术在胰腺癌治疗中的应用被引量：4
- 2016年
- 目前，对无法手术切除的晚期胰腺癌患者的治疗仍是个世界难题。近年来，射频消融术（radiofrequency ablation，RFA）作为一种新兴的姑息性介入治疗技术，已逐渐被应用于中晚期胰腺癌的治疗。既往临床上多采取术中RFA、经皮穿刺RFA及腹腔镜下RFA的方法，但这些方法因胰腺解剖位置深在，操作难度大或术后并发症多等因素影响而导致临床应用受到一定局限。随着超声内镜（endoscopic ultrasonography，EUS）穿刺器械的改进及穿刺技术的提高，超声内镜引导下RFA（EUS—RFA）逐渐应用于胰腺癌患者的治疗。EUS-RFA将实时显像技术与RFA相结合，克服了传统RFA的局限性，使操作可视化，因此更方便、更安全。本文就EUS—RFA的技术原理及在胰腺癌治疗中的临床应用作一综述。
- 朱玉峰郭杰芳金震东李兆申
- 关键词：介入治疗技术超声内镜引导射频消融术ULTRASONOGRAPHY中晚期胰腺癌
- 稳定沉默GLI1基因的人胰腺癌细胞株的建立
- 2013年
- 目的建立稳定转染GLI1siRNA表达质粒的人胰腺癌细胞株,并鉴定其干扰效率。方法采用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测5株人胰腺癌细胞中GLI1基因的表达,筛选出GLI1基因表达量最高的细胞作为目标转染细胞。脂质体转染法将构建好的3个干扰质粒pGCsi-U6-GLI1siRNA-1、pGCsi-U6-GLI1siRNA-2、pGCsi-U6-GLI1siRNA-3分别转染入目标细胞,G418抗性筛选阳性克隆,荧光显微镜下观察转染效率。采用qRT-PCR法和蛋白质印迹法检测各组稳定转染细胞中GLI1mRNA及蛋白的表达水平,鉴定干扰效率。结果筛选出GLI1基因表达量最高的Panc-1细胞株作为目标转染细胞;3个干扰质粒均成功转染Panc-1细胞,G418筛选后获得稳定转染细胞Panc-1/GLI1siRNA-1、Panc-1/GLI1siRNA-2、Panc-1/GLI1siRNA-3,荧光显微镜下可见3个质粒的转染效率均在80%以上;qRT-PCR及蛋白质印迹检测证实Panc-1/GLI1siRNA-1、Panc-1/GLI1siRNA-2、Panc-1/GLI1siRNA-3细胞中GLI1mRNA和蛋白的表达水平均显著低于阴性对照质粒(Panc-1/siControl)转染细胞及空白对照细胞(P<0.05),其中Panc-1/GLI1siRNA-1细胞表达量最低。结论成功构建了稳定沉默GLI1基因表达的胰腺癌细胞株Panc-1/GLI1siRNA-1,为后续研究奠定了基础。
- 郭杰芳高军李兆申龚燕芳金晶吴红玉满晓华
- 关键词：胰腺肿瘤GLI1小分子干扰RNA
- 靶向人转录因子GLI1基因的RNAi真核表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的利用pGCsi—U6-GFP质粒构建干扰人转录因子GLI1基因的小发夹RNA（shRNA）表达载体，并进行干扰活性鉴定。方法根据GenBank中GLI1cDNA的序列，设计并合成3条GLI1siRNA，分别克隆至质粒载体pGCsi-U6-GFP中构建重组质粒，转化大肠杆菌DH5a，扩增后提取质粒，行PCR及测序鉴定。脂质体转染法将鉴定正确的3个重组质粒pGCsi—U6-GLI1siRNA-1、pGCsi—U6-GHlsiRNA4、pGCsi—U6-GLI1siRNA-3及作为阴性对照质粒的pGCsi—U6-GLI1siRNA—C分别与过表达质粒pEGFP—N1-GLI1共转染HEK293细胞株，48h后收集细胞，半定量RT—PCR及蛋白质印迹法检测各组细胞GLI1mRNA及蛋白的表达，鉴定筛选出最佳干扰质粒。结果3个重组质粒pGCsi-U6-GLI1siRNA-1、pGCsi—U6-GLI1siRNA-2、pGCsi-U6-GLI1siRNA-3均扩增出预期大小（369bp）的片段，经测序证实与设计合成的序列完全一致。3个重组质粒转染HEK29细胞后细胞GLI1mRNA表达量分别为0．290±0．011、0．421±0．018、0．373±0．018，蛋白表达量分别为0．318±0．026、0．433±0．021、0．381±0．018，均显著低于阴性对照质粒转染细胞的0．834±0．022及0．818±0．024（P=0．000）。GLI1mRNA表达抑制率分别达65．8％、50．7％、55．7％，蛋白表达抑制率分别为63．9％、48．3％、53．9％，以pGCsi-U6-GLI1siRNA．1的干扰作用最强。结论成功构建了靶向GLI1的shRNA表达载体，筛选出具有最佳干扰效果的质粒，为进一步研究GLI1基因功能奠定了基础。
- 郭杰芳高军龚燕芳金晶吴红玉满晓华李兆申
- 关键词：RNA干扰SHRNA转录因子HEDGEHOG信号通路
- 超声内镜在胆系疾病诊治中的应用进展被引量：4
- 2016年
- 胆道系统毗邻结构复杂，故传统影像学检查难以清晰显示胆道系统。而超声内镜利用置于内镜前端的微型高频超声探头，在消化道管腔内对消化道管壁及邻近脏器进行超声扫查，可以克服气体、脂肪及骨骼的干扰，从而获得清晰的超声图像。因此，它在胆系疾病，尤其是胆总管微小结石、胆总管狭窄及胆囊早期占位性病变等疾病的诊治中具有不可比拟的优势。目前，超声内镜已被广泛应用于胆系疾病的诊断与治疗中，现就其在胆系疾病诊治中的应用进展阐述如下。
- 姜宏雪郭杰芳金震东
- 关键词：超声内镜疾病诊治胆系疾病胆总管狭窄胆道系统影像学检查
- 超声内镜在胰胆疾病治疗中的应用被引量：1
- 2016年
- 近年来,随着线阵式彩色多普勒超声内镜的问世及穿刺器械设备的发展,以超声内镜引导下穿刺为基础的介入性超声内镜已逐渐发展成为一种成熟的微创性治疗。目前,超声内镜介入治疗已被广泛应用于临床。文章就超声内镜在胰胆疾病治疗中的应用进展进行综述。
- 金震东郭杰芳
- 关键词：超声内镜胰胆疾病介入治疗
