国家自然科学基金(81372281)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- VEGF/bFGF复合多肽疫苗对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:初步探究血管内皮生长因子(VEGF)/碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)复合多肽疫苗(VEGF/b FGF complex peptide vaccine,VBP3)对雌性小鼠的毒性及其生殖的影响。方法:通过镍离子亲和层析柱纯化VBP3蛋白,将纯化获得的VBP3免疫雌性BALB/c小鼠,酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测小鼠血清抗体效价和特异性,监测亲本小鼠体重,测定亲本小鼠脏器重量并对小鼠脏器进行HE染色观察;将免疫小鼠与未免疫雄性小鼠交配后,测定F1代小鼠存活率、体重、相关脏器重量,并对相关脏器进行HE染色观察。结果:间接ELISA检测结果显示免疫小鼠血清中抗VEGF、抗b FGF抗体滴度分别为1∶3 000、1∶20 000,且免疫组F1代小鼠能检测出低滴度的抗b FGF抗体,但抗VEGF抗体不能检出。在小鼠生产率实验中,免疫组与对照组崽鼠数目未见明显差异,但免疫组F1代小鼠存活率较对照组降低(P<0.05)。在亲本小鼠中,免疫组小鼠各脏器重量与对照组比较均未有差异,而在F1代小鼠中,2个组别的小鼠肝脏重量存在差异,但其它脏器重量未有差异;HE染色显示,在亲本小鼠中,2个组别小鼠的各脏器形态未有明显差异;在F1代小鼠中,免疫组F1代小鼠的肝脏与对照组相比存在形态差异。结论:VEGF/b FGF复合多肽疫苗未对亲本小鼠主要脏器造成直接损伤,但对亲本小鼠的生殖及F1代小鼠健康具有一定的影响。
- 翁锐强潘磊彭卉彤吕成定邓宁
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子多肽疫苗
- EGFL6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响被引量：2
- 2015年
- 目的 ：通过特异性小干扰RNA（small interference RNA,si RNA）抑制人黑素瘤A375细胞中表皮生长因子样结构域蛋白6（epidermal growth factorlike-domain 6,EGFL 6）基因表达,探讨EGFL 6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响。方法：设计合成靶向EGFL 6基因的siRNA（命名为EGFL6-siRNA）,通过脂质体转染法将该siRNA转染入黑素瘤A375细胞,然后采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测黑素瘤A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法和Transwell实验分别检测A375细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：在成功转染EGFL6-siRNA 48 h后,A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白表达水平均明显下降（P值均〈0.01）。EGFL6-siRNA转染组A375细胞在转染后24~72 h各时间点的细胞增殖能力均受到明显抑制（P值均〈0.01）,且细胞侵袭能力显著降低（P〈0.01）。结论：特异性siRNA能够有效地沉默人黑素瘤A375细胞中EGFL 6基因的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。
- 吕成定吴斌华翁锐强杨晶邓宁
- 关键词：黑素瘤RNA干扰基因表达细胞增殖
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体抑制人肺癌细胞生长的作用研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究二硫键稳定的人源性抗b FGF双链抗体(ds-Diabody)对人肺癌A549细胞的体内外增殖抑制作用。方法利用镍离子亲和层析和离子交换层析的方法纯化得到ds-Diabody,间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK-8法检测ds-Diabody对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用,Western blot分析其作用于肿瘤细胞的机制,Transwell检测其对肿瘤细胞迁移侵袭的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积及裸鼠体质量变化。免疫组化法检测肿瘤组织CD31和LYVE1的表达情况,初步探讨抗b FGF的人源性ds-Diabody抗体的抗肿瘤机制。结果成功纯化得到具有抗原结合活性的ds-Diabody。CCK-8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌A549细胞株的增殖。Western blot结果表明ds-Diabody能有效阻断与b FGF相关的MAPK和Akt通路。Transwell结果表明ds-Diabody可以显著抑制A549细胞的迁移及侵袭。裸鼠体内试验中,ds-Diabody抗体显著地抑制了肿瘤的生长,抑制率为86.54%。免疫组化的结果显示ds-Diabody抗体处理组肿瘤组织中微血管密度和淋巴管密度均有下降。结论抗bFGF的人源性ds-Diabody抗体可有效地抑制人肺癌A549细胞的生长。
- 蔡亚雄张晋霞姜浩武于云飞姚双娥邓宁
- 关键词：人肺癌细胞淋巴管新生
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。
- 张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁
- 关键词：肺癌细胞
