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大鼠高亲和力二羧酸转运蛋白的克隆表达及细胞内定位: 2008年; 目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体中构建SDCT2真核表达载体,然后将它们转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达,并用激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况。结果:扩增出2kb的SDCT2全长基因,Westernblot表明SDCT2基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达;共聚焦显微镜分析显示正常SDCT2蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致;为了比较不同连接温度对重组DNA连接效率的影响,观察了3种连接温度下的转化效率,结果显示温度循环法的连接效率明显比其他2种常规连接温度要高。结论:高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白全长基因被成功克隆,其主要表达于肾小管上皮细胞膜上。; 侯剀白雪源陈香美冯哲傅博; 关键词：三羧酸循环肾小管亚细胞定位

抑癌基因PTEN随增龄在大鼠肾脏组织的表达: 2010年; 目的:研究与张力蛋白同源、第10号染色体缺失的磷酸酶基因(Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)随增龄在大鼠肾组织内表达的变化,并探讨其在肾脏衰老中的作用。方法:分别留取3、12、24月龄Wistar大鼠肾组织(n=6),石蜡切片CD34免疫组化染色观察肾组织微血管生成;western blot和免疫组化染色检测大鼠肾组织PTEN表达。结果:western blot显示,随增龄大鼠肾组织蛋白表达水平逐渐升高,24月龄大鼠表达水平显著高于3,12月龄大鼠(P<0.05);免疫组化显示PTEN在大鼠肾小球和肾小管均有表达,24月龄大鼠肾小球和肾小管阳性面积百分比均显著高于3、12月龄大鼠(P<0.05)。随增龄大鼠肾组织内出现微血管生成障碍,24月龄大鼠肾小球毛细血管和管周毛细血管密度均显著低于3、12月龄大鼠(P<0.05);相关分析显示,二者与大鼠肾组织PTEN蛋白表达水平均呈负相关(r=-0.761和-0.613,P<0.05)。结论:随增龄大鼠肾组织PTEN蛋白表达呈现上升趋势,可能通过影响血管生成参与肾脏衰老过程。; 陈俊香蔡广研陈香美卓莉马强师锁柱刘伏友; 关键词：PTEN 肾脏衰老

异鼠李素对肺癌的作用及其抗肿瘤机制的初步探讨被引量：26: 2005年; 目的探讨异鼠李素体内外对肺癌增殖的影响及初步研究其抗肿瘤机制。方法将不同浓度异鼠李素加入体外培养的人A549细胞,用MTT法,3H-TdR掺入法等测定体外抗瘤活性,用流式细胞仪、彗星电泳、免疫组化等观察其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用;采用Lewis细胞C57BL/6鼠移植瘤,观察药物对移植瘤的影响。结果异鼠李素处理A549细胞后,细胞形态出现典型凋亡特征,下调bcl-2基因,PCNA蛋白表达;上调抑癌基因P53、bax及caspase-3基因。实验观察到,异鼠李素在体内也具有明显的抗肿瘤作用,可显著降低癌细胞增殖指数,诱导Lewis肺癌凋亡,其机理可能与下调PCNA和bcl-2的表达,上调caspase-3、bax表达有关。结论异鼠李素抑制肿瘤细胞的生长增殖,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用主要机制之一,是一种有较好前景的抗肿瘤的新型中药单体。; 朱玲王正荣周黎明杨春蕾张尊真肖静任富强; 关键词：异鼠李素 A549细胞 LEWIS肺癌基因治疗

肾脏器官衰老机制的研究进展: 2011年; 器官衰老是连接细胞衰老和生物体整体衰老的桥梁。肾脏是人体中衰老较快的器官之一，表现为功能减退、修复能力下降、易于向病态转化。本文介绍了近年来肾脏衰老机制研究的新进展。; 白雪源蔡广研陈香美; 关键词：衰老机制器官衰老肾脏细胞衰老生物体

细胞周期抑制因子p19ARF对人二倍体细胞衰老的影响被引量：4: 2007年; 为了探讨细胞周期抑制因子p19ARF对人二倍体细胞复制性衰老的影响,构建了重组p19ARF真核表达载体,并通过脂质体的介导将p19ARF基因转染到人二倍体成纤维细胞WI-38中过表达,观察其对WI-38细胞衰老的影响.结果发现与对照细胞相比,在p19ARF基因导入后,细胞中p53和p21的表达水平明显上调,细胞传代数减少10～12代,生长速率降低,细胞周期阻滞于G1期,衰老标志物SA-β-gal染色阳性率上升,线粒体膜电位下降,细胞形态呈衰老细胞样变化,这些结果表明p19ARF高表达可促进人二倍体细胞的衰老进程.; 白雪源陈香美侯剀张萍冯哲傅博; 关键词：细胞衰老二倍体细胞细胞周期抑癌基因

人SDCT2β3′-非翻译区基因表达负调控序列对mRNA稳定性的影响被引量：1: 2008年; 为探索人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因(high affinity sodium-dependent dicarboxylate transporter,SDCT2)3′端非翻译区是否在基因表达调控中起作用,首先通过生物信息学分析发现,在SDCT2βmRNA的3′端非翻译区内存在585nt的AU富含区(AU-rich region,AUR),其中包括3个AU富含元件(AU-rich element,ARE),然后将SDCT2β的AU富含区DNA片段插入报告基因GFP表达载体pcDNA-GFP的下游,构建pcDNA-GFP-AUR表达载体并转染HEK293、HKC和LLC-PK1细胞系,用Western blot和流式细胞仪检测细胞中GFP的表达水平.结果显示,SDCT2β的AU富含区序列可显著降低GFP的表达水平(P<0.01).利用放线菌素D阻断RNA转录后,每隔2h从稳定转染的HEK293细胞中提取总RNA,用RNA印迹分析GFP mRNA的稳定性.结果显示GFP-AURmRNA较GFP mRNA不稳定.这些结果提示,在SDCT2β3′非翻译区的AU富含区内存在基因表达负调控区,该区可降低mRNA的稳定性、促进mRNA的降解,从而在转录后水平调控基因的表达.; 白雪源陈香美傅博汪杨; 关键词：转录后调控 MRNA稳定性

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国家自然科学基金(30070288)