国家自然科学基金(30070296)
- 作品数：26 被引量：53H指数：5
- 相关作者：周建光黄翠芬王健李杰之张惠更多>>
- 相关机构：军事医学科学院厦门大学中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 前列腺特异启动子和部分靶基因在转基因模型中的应用进展
- 2006年
- 遗传工程小鼠模型已被大量用于前列腺癌发生、发展、恶化和转移的研究。构建小鼠模型的途径主要包括转基因的过表达、基因敲除或敲入,以及使用Cre/lox技术进行条件调控。本文综述了目前构建的有明显遗传表型的转基因小鼠模型所用到的前列腺特异的启动子,以及所用到的靶基因。
- 梁瑞霞姜飞周建光黄翠芬
- 关键词：前列腺癌启动子靶基因
- 鼠mPC-1基因的克隆与特性分析被引量：3
- 2004年
- 为深入研究人前列腺癌相关基因PC 1的生物功能和进化保守状况,从小鼠肾脏中克隆了全长cDNA序列,命名为mPC 1(GenBankAccNo.AY0 4 885 2 ).mPC 1基因cDNA全长为 2 193bp,主要定位于小鼠染色体 3A1 A2区域.mPC 1基因最大开放阅读框编码的蛋白质由 2 2 4个氨基酸组成,与人PC 1蛋白编码区存在 82 %的序列一致性,含有coiled coil结构域和PEST结构域.生物信息学分析表明,由 6个外显子组成的mPC 1基因与mD5 2高度同源,其中,第一外显子代表该基因的特异性序列,实验证据显示mPC 1基因具有自己的启动子,推测mPC 1与小鼠mD5 2可能是重叠基因.对小鼠 2 0种组织器官和不同发育阶段的胚胎组织cDNA的RT PCR检测证实,该基因主要在前列腺、肾和眼组织中表达,在胃和平滑肌中有少量表达,在其他组织中表达很弱或不表达.而mD5 2基因则几乎广泛存在于小鼠的各个组织器官中,因此,两个基因虽然序列上高度重叠却是独立调控的.综上所述,mPC 1基因可能是一个与人PC
- 梁瑞霞周建光李杰之黄翠芬
- 关键词：新基因
- 与人PC-1同源的鼠PC-1基因的启动子的分子克隆和特性分析(英文)被引量：1
- 2006年
- 为了鉴定鼠mPC-1基因表达的调控元件,克隆并分析了该基因的启动子.构建了一系列mPC-1基因启动子的截短序列.通过荧光素酶报道基因,分析了它们在前列腺癌细胞和其它细胞中的表达.结果表明,在AR阳性细胞系中,mPC-1基因启动子活性远远高于SV40和p61-PSA启动子,mPC-1基因启动子599bp至449bp可能含有一个负调控元件;mPC-11.1kb启动子控制的表达主要在前列腺癌细胞系中;雄激素可调控mPC-11.1kb启动子表达.mPC-11.1kb序列是一个有前列腺癌细胞特异性和较强的启动子,经过进一步的修饰有可能作为一种有用的前列腺癌基因治疗元件.
- 梁瑞霞涂智杰王健张惠姜飞庞博郑斌李素萍施庆国黄翠芬周建光
- 关键词：启动子LNCAP细胞
- p53负调控前列腺癌细胞中PC-1基因的表达被引量：3
- 2006年
- 在前列腺癌进展中发生的PC-1基因表达失调和p53基因突变,提示这两个事件之间可能存在的联系.用依托泊苷处理前列腺癌LNCaP细胞后,PC1蛋白的表达受抑制;瞬时转染分析表明野生型p53负调控PC1启动子的转录活性;缺失突变分析将PC1基因启动子上受p53负调控的区域定位在翻译起始位点上游757bp～323bp之间.缺失PC1启动子上的雄激素受体反应元件并没有消除p53对其转录活性的抑制作用;无论p53是否存在,组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理LNCaP细胞后可以导致PC1启动子转录活性升高.因此,p53和去乙酰化酶可以独立抑制PC1启动子活性.这些研究结果表明,野生型p53负调控PC1基因启动子的转录活性,而前列腺癌进展过程中p53突变可能和PC-1基因的表达失调有关.
- 王健张惠周建光黄翠芬
- 关键词：P53负调控
- PC-1分子在细胞内定位的深入探讨被引量：1
- 2004年
- 为了寻找影响PC 1分子进入细胞核的序列 ,将该分子不同区段分别与EGFP融合表达 ,通过观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布 ,发现PC 1分子的第 112～ 190区段是一独立的功能区 ,缺失这一区段后 ,分子的其余部分能够进入细胞核并在其中积累 ,这一区段使PC 1分子被排斥于细胞核之外 ,并在细胞质中浓缩成许多点状结构 .运用以SOS恢复系统为基础的酵母双杂交方法 ,发现PC 1分子能够定位于细胞膜上 ,通过缺失突变发现该分子的第 112～ 190区段是一独立的细胞膜定位信号序列 ,这一序列将其定位于细胞的胞膜上 .
- 张浩周建光李杰之黄翠芬
- 关键词：分子细胞核亚细胞定位基因
- RNA干涉抑制NIH3T3细胞中外源PC-1基因表达
- 2005年
- 目的:获得能有效抑制PC 1基因表达的RNAi靶标,用RNAi技术研究PC- 1基因表达在前列腺癌中的作用。方法:用DNA重组技术构建了可表达短发夹RNA的重组质粒,将重组质粒与表达PC-1- EGFP融合蛋白的质粒共转染NIH3T3细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达差异,从 5个候选靶标中初筛出最合适的RNAi靶标,再通过RT- PCR和Western印迹从mRNA水平和蛋白质水平检测该RNAi靶标抑制PC- 1基因表达的效果。结果:利用RNA干涉有效靶点抑制了NIH3T3细胞中外源PC -1基因表达。结论:这一策略适合大量筛选RNAi有效靶标序列,其结果为研究RNAi技术降低PC 1基因的表达对前列腺癌细胞的影响奠定了基础。
- 周立权张惠高雪松王健梁瑞霞洪宝发周建光
- 关键词：RNA干涉基因表达前列腺肿瘤
- 人前列腺癌cDNA文库的构建和筛选被引量：2
- 2005年
- 目的:PC1基因是与前列腺癌相关的新基因,在雄激素非依赖和转移的前列腺癌晚期细胞系C42中高表达。为了进一步研究PC1基因的功能及作用机制,构建C42细胞的cDNA文库,寻找与前列腺癌相关基因PC1相互作用的蛋白。方法:从前列腺癌细胞系C42中提取总RNA,进而分离poly(A)+RNA,用poly(A)+RNA进行反转录并以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(dT)为引物进行PCR扩增,得到两端具有同源臂的PCR片段,以此同源臂为基础在酵母中实现同源重组。通过文库片段、线性化的pGADT7Rec和诱饵质粒pGBKT7PC1C共转化酵母AH109菌株,在文库构建的同时进行与PC1相互作用蛋白的筛选;或先将文库片段,线性化的pGADT7Rec转化AH109,再利用AH109和Y187两种酵母菌株的接合生殖进行筛选。最后用Far Western印迹方法进一步从体外论证了PC1蛋白可与自身相互作用形成二聚体。结果:构建了具有基因多样性和库容量足够大的人前列腺癌cDNA文库,双链cDNA片段的长度大小范围为250～5000bp。共转化的效率为4.3×105,重组效率为1.9×106,筛选的克隆数为4.3×105。接合法筛选时的接合效率为32%,筛选的克隆数为1.0×106。筛选到4个与PC1蛋白相互作用的阳性克隆。从体外证明了PC1蛋白可形成二聚体。结论:此文库的多样性和库容量均符合筛选需求。可用于前列腺癌相关基因?
- 张惠庞博王健周建光李杰之黄翠芬
- 关键词：前列腺肿瘤基因文库酵母双杂交
- PC-1分子转录激活功能研究被引量：2
- 2004年
- PC 1基因是在人前列腺癌细胞中克隆的新基因 ,表达水平随前列腺癌恶性程度增加而升高 ,其表达产物具有转录因子的一些特征 .为研究PC 1分子的转录激活功能 ,首先应用酵母双杂交系统将PC 1全长以及不同区段的cDNA克隆到表达载体pAS2 1中 ,然后分别转化酵母细胞株CG 194 5 .lacZ和His3报告基因激活的检测结果表明 ,该分子具有转录激活活性并将该活性定位于N端的 4 6个氨基酸区域 .此外 ,将PC 1分子不同区段的cDNA分别克隆至表达载体pZHO1中 ,将它们与报告基因质粒pTRE luc共转染哺乳动物细胞COS7和C4 2 ,Firefly荧光素酶相对活性的检测结果表明 ,该分子N端的 4
- 张浩周建光李杰之于梅黄翠芬
- 关键词：转录激活活性酵母双杂交
- 前列腺癌转移细胞模型——LNCaP细胞模型被引量：6
- 2005年
- 前列腺癌是严重威胁欧美国家男性健康的恶性肿瘤。研究前列腺癌发生与发展的分子机制，尤其是从雄激素依赖性向雄激素非依赖性转化的分子机制对该病的诊断和治疗极为重要。前列腺癌转移LNCaP细胞模型包括LNCaP、C4、C4-2和C4-2B等一系列的遗传背景相同的细胞系，成功模拟前列腺癌细胞从雄激素依赖性发展到雄激素非依赖性，从不转移到转移各个阶段的基本生物行为学的特征，已成为当前应用最为广泛的前列腺癌细胞模型之一。
- 张惠周建光黄翠芬
- 关键词：前列腺肿瘤细胞系雄激素类
- P53参与抑制PC-1基因转录的结构域分析被引量：1
- 2007年
- 目的:分析P53分子参与抑制PC-1基因转录的结构域。方法:构建P53分子突变体;将前列腺癌LNCaP细胞瞬时转染野生型或突变型p53及含PC-1启动子的荧光素酶表达载体p4939,分析PC-1启动子的转录活性。结果:P53分子N端转录激活域及富含脯氨酸功能域突变体没有减弱对PC-1启动子的转录抑制作用,而特异性DNA结合域上175、273位突变体和C端339～346位氨基酸的缺失突变体都减弱了对PC-1启动子转录的抑制作用;另外P53分子第175和273位突变体在前列腺癌细胞中对野生型P53的转录抑制功能表现出显性负效应。结论:P53分子特异性DNA结合域和C端结构域参与对PC-1基因启动子的转录抑制,而P53突变体的显性负效应可能是PC-1在前列腺癌进展中表达失调的因素之一。
- 王健张惠周建光
- 关键词：P53功能域
