上海市科学技术委员会资助项目(024119011)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王健张臻朱小华朱乃硕徐金华更多>>
- 相关机构：复旦大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂质体转染对HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导小鼠特异性免疫应答的影响被引量：2
- 2008年
- 目的研究不同免疫方式对HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的影响,探索新型HSV-2DNA疫苗的有效免疫方式。方法利用真核表达质粒pcDNA3.1构建HSV-2糖蛋白gD,gB,gC和早期表达蛋白ICP 27的多表位复合DNA疫苗HV-pcDNA3.1。C57/BL6小鼠分为脂质体包裹pcDNA3.1空载体质粒对照组、脂质体包裹HV-pcDNA3.1质粒和裸质粒HV-pcDNA3.1肌肉注射免疫三组。ELISA检测小鼠血清HSV-2特异性IgG,IL-2和IFN-γ,乳酸脱氢酶法检测杀伤性T淋巴细胞(CTL)活性。结果与裸质粒免疫组相比,脂质体包裹HV-pcDNA3.1免疫组小鼠血清中HSV-2特异性IgG和IFN-γ表达明显增加,CTL活性增强。结论脂质体包裹质粒比裸质粒肌肉注射方式免疫小鼠能显著提高HSV-2多表位复合DNA疫苗的免疫活性。
- 徐金华许炎郑志忠夏天王健梁俊张臻朱小华朱乃硕
- 关键词：单纯疱疹病毒2型DNA疫苗脂质体
- 单纯疱疹病毒2型多表位复合DNA疫苗的构建与免疫原性被引量：1
- 2008年
- 目的构建单纯疱疹病毒2型（HSV-2）糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗，探讨其诱导机体免疫应答的能力。方法将HSV-2野生株经PCR鉴定后，利用PCR技术从其基因组扩增出HSV-2 ICP27 377-459、gD146-179、gD223-306、gB529-606、gC247-282和gD1-77等6个基因片段。采用多基因片段一步酶切连接法获得构建的6个片段的复合DNA疫苗（HV）融合基因片段，经pGEMT载体克隆后，定向插入真核表达质粒pcDNA3．1载体中，构建重组真核表达质粒HV-pcDNA3．1，并对其进行酶切分析及测序鉴定。10只C57／BL6小鼠均分为脂质体包裹pcDNA3．1空载体质粒对照组和脂质体包裹HV-pcDNA3．1质粒免疫组。ELISA检测小鼠血清HSV-2特异性IgG、IL-2和IFN-γ，乳酸脱氢酶法检测CTL功能。数据行t检验。结果酶切重组质粒HV-pcDNA3．1，电泳可见两条带，分别为融合基因HV（1．3kb）和线性质粒pcDNA3．1（5．4kb）。测序结果表明，克隆基因插入方向正确，与基因库HSV-2相关序列同源性达99．9％。与pcDNA3．1空载体质粒组相比，HV-pcDNA3．1免疫组小鼠血清中HSV-2特异性IgG（0．29±0．14比0．11±0．04，P〈0．05）、IL-2（1246．8±157．0比685．2±104．2，P〈0．05）和IFN-γ（1340．3±108．5比547．7±189．3，P〈0．05）表达明显增加，CTL活性增强（31．82±10．12比8．30±2．91，P〈0．05）。结论成功构建了HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗，能有效引起小鼠机体特异性体液免疫和细胞免疫应答。
- 徐金华许炎郑志忠夏天王健梁俊张臻朱小华朱乃硕
- 关键词：疱疹病毒2型DNA糖蛋白类
- 单纯疱疹病毒2型泛素化新型DNA疫苗构建被引量：3
- 2007年
- 目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)早期表达蛋白感染细胞蛋白(ICP)27强制泛素化的DNA疫苗表达质粒。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术从人基因组DNA和HSV-2基因组中分别扩增出泛素全长基因和HSV-2、ICP27 377-459,PCR鉴定后酶切连接获得融合基因片段,插入真核表达质粒pcDNA3．1载体中,构建出重组真核表达质粒Ub-ICP-pcDNA3．1,并对其进行测序鉴定。结果构建的重组质粒Ub-ICP-pcDNA3．1克隆基因插入方向正确,与预期序列完全一致。结论成功构建了HSV-2早期表达蛋白ICP27强制泛素化DNA疫苗。
- 徐金华许炎郑志忠夏天王健梁俊张臻朱小华朱乃硕
- 关键词：单纯疱疹病毒2型DNA疫苗泛素化
- 白介素2基因佐剂协同HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导小鼠免疫应答被引量：2
- 2007年
- 目的研究白介素2(IL-2)cDNA协同HSV-2多表位复合DNA疫苗免疫对小鼠体液和细胞免疫应答的影响。方法利用真核表达质粒pcDNA3.1分别构建HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP 27的多表位复合DNA疫苗HV-pcDNA3.1和IL-2的真核表达质粒IL-2-pcDNA3.1。15只C57/ BL6小鼠分为3组,分别接受pcDNA3.1空载体注射、HV-pcDNA3.1单独免疫或HV-pcDNA3.1及IL-2- pcDNA3.1联合免疫。共免疫2次,间隔2周。末次免疫3周后。ELISA法检测小鼠血清HSV-2特异性IgG、IL-2和IFN-γ,淋巴细胞特异性增殖反应和乳酸脱氢酶法检测杀伤性T淋巴细胞(CTL)功能。结果与HV-pcDNA3.1单独免疫组相比.IL-2-pcDNA3.1的协同免疫可以提高小鼠血清中和IFN-γ表达(1956.19±219.60 ng/L,P<0.05),增强淋巴细胞特异性增殖反应(促细胞增殖率为2.75%±0.26%,P<0.05)和CTL活性(47.91%±15.09%,P<0.05)。小鼠血清HSV-2特异性IL-2水平在协同免疫组为(1421.16±220.98)ng/L,HV-pcDNA3.1单独免疫组为(1246.84±157.02)ng/L.两组间差异无统计学意义。结论IL-2 cDNA的协同免疫可以显著提高HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导的细胞免疫应答水平。
- 徐金华许炎郑志忠夏天王健梁俊张臻朱小华朱乃硕
- 关键词：疱疹病毒2型糖蛋白类
