重庆市自然科学基金(CSTG2007BA5007)
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：第三军医大学大坪医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向c-Met的shRNA重组质粒的构建及生物活性鉴定
- 2009年
- 目的设计以人c-Met基因为靶向的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制c-Met mRNA及蛋白表达的效应,筛选RNAi作用最强的shRNA片段。方法设计3对针对c-Met基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA的重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA,通过脂质体介导的方法将其转染到喉癌Hep-2细胞株中。采用RT-PCR及Western-Blot法检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达的变化,判断各shRNA的干扰效应。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western-Blot法检测,转染干扰质粒后,c-Met基因的mRNA水平及蛋白表达水平均下调,以重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-sh RNA2效应最显著。结论成功构建了针对c-Met基因的重组RNAi质粒,为下一步探讨c-Met基因对喉癌Hep-2细胞的生物学行为的作用奠定了基础。
- 谢治年姬长友陈继川
- 关键词：喉肿瘤原癌基因蛋白质C-MET
- RNA干扰抑制c—Met表达对喉癌Hep-2细胞体内外生长的影响被引量：4
- 2010年
- 目的采用RNA干扰（RNAi）技术抑制人喉癌Hep-2细胞c—Met基因表达，观察对其体外生物学活性和体内生长的影响。方法构建能够表达针对c—Met的小干扰RNA的RNAi质粒和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒，采用阳离子脂质体Lipofectamine2000作为转染试剂将其转染人喉癌细胞株Hep-2，通过RT—PCR及Western Blot方法检测转染效率，筛选出抑制效果最好的c—Met—siRNA序列；通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、运动实验及侵袭实验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力。在裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c—Met—siRNA基因治疗实验中，采用Western Blot法检测重组质粒对c—Met基因及MMP-9、VEGF基因表达的影响。结果pSilencer2．0／c—Met—shRNA转染人喉癌细胞株Hep-2后，c—Met的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P值分别为0．003和0．02），细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制（P值分别为0．001，0．004和0．004）。肿瘤接种到裸鼠后第35天，重组质粒组肿瘤体积为（138±27）mm^3，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；重组质粒组瘤体内c—Met、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低（P〈0．05）。结论c—Met—siRNA能成功下调靶基因的表达，并能显著抑制喉癌Hep-2细胞的生长、运动、侵袭及移植裸鼠成瘤后的生长，siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c—Met治疗的新策略。
- 姬长友谢治年陈继川王宜南关力谦李洪涛张民刘蓉蓉
- 关键词：RNA干扰喉肿瘤细胞系肿瘤
- c-Met-siRNA对喉癌Hep-2细胞株生物学行为的作用被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨c-Met-si RNA体外对喉癌细胞株生长、运动及侵袭的影响。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine2000作为转染试剂,将pSilencer2.0/c-Met-shRNA转染人喉癌细胞株Hep-2,通过RT-PCR及Western-Blot方法检测转染效率,筛选出抑制效果最好的c-Met-siRNA序列;通过MTT法、运动实验及侵袭实验比较转染前后细胞的生长、运动及侵袭能力。结果:pSilencer2.0/c-Met-shRNA转染人喉癌细胞株Hep-2后,c-Met的mRNA和蛋白表达水平显著降低,细胞的生长、运动及侵袭均受到明显抑制。结论:c-Met-siRNA能成功下调靶基因的表达,并能显著抑制喉癌Hep-2细胞的生长、运动及侵袭,是潜在的喉癌治疗新方法。
- 谢治年姬长友陈继川王宜南关力谦李洪涛张民杨俊慧
- 关键词：喉肿瘤SIRNAHEP-2细胞
- RNA干扰及其在喉鳞癌研究中的应用
- 2008年
- 谢治年姬长友
- 关键词：喉肿瘤鳞状细胞RNA干扰
- 肝细胞生长因子拮抗剂NK4在肿瘤研究中的进展及其在喉癌研究中的展望
- 2009年
- 谢治年姬长友
- 关键词：肝细胞生长因子喉肿瘤
- pSilencer2.0-c-Met-siRNA基因在裸鼠体内对人喉癌Hep-2细胞生长的影响
- 2009年
- 目的探讨pSilencer2.0-c-Met-siRNA重组质粒对人喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法采用裸鼠喉癌皮下荷瘤模型模拟c-Met-siRNA基因治疗实验,观察c-Met-siRNA重组质粒的抗瘤疗效,Western-blot法检测重组质粒对c-Met基因及MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达的影响。结果肿瘤接种后第35 d,重组质粒组肿瘤体积为13 827 mm3,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);重组质粒组瘤体内c-Met、MMP-2、MMP-9、VEGF基因表达率比对照组明显降低(P<0.05)。结论pSilencer2.0-c-Met-siRNA重组质粒能明显抑制人喉癌Hep-2细胞移植裸鼠成瘤后的生长,siRNA表达质粒介导的基因治疗有希望成为喉癌靶向性c-Met治疗的新策略。
- 谢治年姬长友陈继川王宜南关力谦李洪涛张民杨俊慧
- 关键词：短发夹RNAC-MET基因喉肿瘤
