广东省自然科学基金(9151063101000016)
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
- 相关作者：龙大宏刘菲菲陈艳张君度龙静怡更多>>
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- 阳离子载基因MePEG-PLGA纳米粒的制备及优化处方的筛选被引量：1
- 2011年
- 目的建立纳米粒沉淀法制备阳离子甲氧基封端的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸嵌段聚合物(MePEG-PLGA)纳米粒的方法。方法本研究利用单因素设计和正交实验选定最优实验方案,并对纳米粒的物理性质如表面形态,粒径分布、Zeta电位、DNA结合率,保护DNA能力进行考察。结果最优条件制备得到的纳米粒粒径大小为89.7 nm,表面电位为28.3 mV,透射电镜下的纳米粒颗粒分散,大小均匀,表面光滑,呈球形分布,DNA结合率为80%,并能很好地保护所载基因不受核酸酶降解。结论利用纳米粒沉淀法制备得到的阳离子纳米粒有望成为高效的基因载体。
- 刘菲菲龙大宏
- 关键词：聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物聚乙二醇十六烷基三甲基溴化铵
- 拟平鳅头背部斑纹和下唇结构变异及其分类学意义
- 2014年
- 针对拟平鳅(Liniparhomaloptera disparis)的两个亚种(L.disparis disparis和L.disparis qiongzhongensis)现有形态分类特征的含糊,通过观察标本室保存的15条水系441尾标本,首次提出利用下唇结构类型作为拟平鳅亚种的补充形态鉴别依据,结合头背部斑纹特征,能有效地鉴别拟平鳅各地理种群和亚种,为拟平鳅的分类和鉴定提供参考依据。依据头背部斑纹差异归纳出4种类型,分别为小斑块型(云开山脉以东的7条水系及海南岛万泉河),虫蚀纹型(云开山脉以西的5条水系),混合斑纹型(海南岛的万泉河、南渡江、昌化江共3条水系),大斑块型(海南岛的昌化江)。依据下唇结构变化情况总结出3种下唇类型,分别是半圆型(云开山脉以西的5条水系),几字型(云开山脉以东的7条水系),马蹄型(海南岛的3条水系)。依据头背部斑纹特征结合下唇结构特征,对照模式标本的描述,重新定义了拟平鳅原有的两个亚种,将分布于云开山脉以东水系的种群鉴定为指名亚种,拟平鳅L.disparis disparis,其鉴别特征为:头背部斑纹为小斑块型并且下唇类型为几字型;将海南岛种群鉴定为琼中拟平鳅L.disparis qiongzhongensis,它们都具有独特的马蹄型下唇类结构,且头背部斑纹以混合斑纹型为主。重要的发现是,分布于云开山脉以西的种群与已命名的2个亚种在形态上有明显的差异,其头背部斑纹为独特的虫蚀纹型且下唇类型为半圆型。这可能是一个新亚种。分子生物学方法也许能证明云开山脉以西的种群在遗传上的独特性以及形成新亚种的可能性。云开山脉东、西两侧以及海南岛不同水系的拟平鳅的种群分化问题值得进一步探究。
- 杨立张洁宋波龙赵俊庆宁
- 关键词：华南大陆
- 神经干细胞的单层培养及分化过程中HES1和MASH1的表达变化被引量：2
- 2014年
- 【目的】建立神经干细胞(NSC)体外培养方案,使NSC的体外可以得到增殖和分化,并检测NSC分化过程中HES1和MASH1的表达变化。【方法】无菌条件下取SD大鼠胚胎端脑,无血清悬浮培养,形成P2代神经球后,将神经球消化成单细胞,分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养,并对两种不同培养方式下的NSC进行干性鉴定和分化能力鉴定。用不同浓度(20、40、80μg/L)的脑源性神经生长因子(BDNF)诱导NSC分化,选出最合适的浓度。用BDNF最佳诱导浓度诱导NSC分化,Q-PCR检测分化过程中HES1和MASH1的表达变化。【结果】神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的NSC;分化3 d后,在不加入任何诱导因素的情况下,单层贴壁培养的NSC能更高比例[(19.55±1.09)%]地分化为β-tubulinⅢ阳性细胞;BDNF 40μg/L能诱导出更多的β-tubulinⅢ阳性细胞[(34.17±0.60)%];在分化1、3和7 d时,Q-OCR结果表明MASH1在BDNF诱导下组较NSC和对照组表达水平明显上升。【结论】单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元,BDNF为40μg/L时能诱导出更高比例的神经元,BDNF可以诱导MASH1在NSC分化过程中表达明显上升。
- 刘菲菲徐丽萍龙大宏陈艳张君度龙静怡
- 关键词：神经干细胞神经球分化脑源性神经生长因子
- Aβ(1-40)及192-IgG-saporin联合作用对大鼠学习记忆以及海马区锥体细胞和胆碱能纤维的影响
- 2009年
- 目的探讨Aβ(1-40)及192-IgG-saporin联合应用对大鼠学习记忆及海马区锥体细胞及胆碱能纤维的影响。方法采用Aβ(1-40)和192-IgG-saporin侧脑室内注射方法建造老年性痴呆(AD)动物模型。2周后,Y迷宫检测大鼠学习记忆能力并观察海马区形态学变化。结果Y迷宫结果显示联合组,Aβ(1-40)组及192-IgG-saporin组学习记忆能力与正常组均有下降(P<0.05)。刚果红染色阳性结果证明Aβ(1-40)以及联合组海马区内有类老年斑样物质沉积.尼氏染色表明,与正常组和192-IgG-saporin组相比Aβ(1-40)以及联合组,海马区锥体细胞数量均出现减少(P<0.05)。免疫组织化学显示,与正常组以及Aβ(1-40)比较,192-IgG-saporin以及联合组胆碱能纤维数量均出现明显减少(P<0.01)。结论 Aβ(1-40)及192-IgG-saporin联合应用制造的AD模型能够更全面的模拟AD病理特征,是较理想的模型。
- 贺小松龙大宏许孟杰罗春云刘菲菲
- 关键词：Β淀粉样蛋白学习记忆锥体细胞胆碱能纤维
- 生境破碎化对鼎湖山蝶类多样性的影响被引量：10
- 2015年
- 随着鼎湖山自然保护区旅游业迅猛发展,人为干扰不断加剧,需了解人为干扰造成的生境破碎化对蝶类的影响.该次调查在鼎湖山自然保护区的缓冲区、核心区和旅游区共记录蝴蝶9科、90属、144种.其中蛱蝶科种类最多(35种,24.31%),保护种19种,主要为凤蝶科(4种)、眼蝶科(4种)、蛱蝶科(4种);园林害虫11种,主要为弄蝶科(3种).调查结果显示,旅游区的特有蝶类种类少(1种),其寄主为金丝桃科植物,多样性最低;而保护区内特有蝶类的种类较多(34种),主要寄主为禾本科植物;寄主植物最丰富的是山蟠蛱蝶,主要寄生于豆科植物;核心区多样性最高,其中有收录于红色名录的燕凤蝶、么妹黄粉蝶、惊恐方环蝶等.结合鼎湖山自然保护区各功能区的生境、蝶类物种多样性和群落多样性的分析结果显示,人为干扰越强,生境破碎化程度越高,蝴蝶种类数量越少,与海拔高度则无明显关系.
- 蔡雅虹龙志泳林东陈嘉欣陈敏豪毕倩琪李旭坤庆宁
- 关键词：蝴蝶生境破碎化
- 重组真核表达载体pEGFP-BDNF的构建被引量：1
- 2012年
- 目的将脑源性神经生长因子(BDNF)构建到表达质粒(pEGFP-N1)上。方法本实验采用RT-PCR的方法,从大鼠海马总RNA中扩增目的基因,分别用一步法(直接构建到表达载体上)和两步法(先构建到克隆载体再构建到表达载体上)构建重组载体,通过酶切和基因测序筛选鉴定正确的阳性克隆,并对两种方法做简单的比较。结果两种方法构建的重组载体都插入了正确的序列。两步法的转染效率明显高于一步法,但一步法也同样得到了正确的阳性克隆。结论成功构建了pEGFP-BDNF重组表达载体。
- 刘菲菲龙大宏龙静怡
- 关键词：脑源性神经生长因子基因克隆增强型绿色荧光蛋白
- 载神经生长因子纳米药物体外诱导PC12细胞的药效被引量：2
- 2013年
- 背景:研究发现经表面修饰过的聚合物纳米粒能通过血脑屏障,可以改善药物对中枢神经系统疾病的疗效。目的:以生物可降解材料聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物制备高包封率的载神经生长因子的纳米粒,并初步探讨其对PC12细胞的体外诱导效果评价。方法:采用复乳化溶剂扩散法制备载牛血清白蛋白的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒,用单因素分析及正交设计对工艺进行优化筛选;扫描电镜观察纳米粒形态;纳米粒分析仪测定平均粒径和分散指数;BCA法测定纳米粒包封率及载药量,并进一步研究纳米粒体外释放特性。得到最好的制备方案后,制备载神经生长因子的聚合物纳米粒,并以此处理PC12细胞,倒置荧光显微镜观察载神经生长因子的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒对PC12细胞的体外诱导状况,对其诱导效果、毒性及缓释效果进行评价。结果与结论:最优处方制备的载牛血清蛋白的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒呈球形、大小均匀,平均粒径(258.9±5.73)nm,包封率为(80.56±2.23)%,内水相中投药量10mg时载药量约(4.24±0.12)%,体外释放符合Higuchi方程,分初期突释释放和后期缓释释放2个阶段,0-56d的累积释放总量分别为76.61%(牛血清白蛋白)、62.34%(神经生长因子)。载神经生长因子的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒可以诱导PC12细胞像神经元样分化效能,表现出良好的缓释性能及无毒性作用。提示制备的载神经生长因子的聚乙二醇-聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒理化性质优良,在体外有良好的缓释效能及无毒性作用。
- 包国庆龙大宏陈艳刘菲菲张君度
- 关键词：生物材料纳米生物材料神经生长因子纳米药物纳米粒PC12细胞
- 神经干细胞定向分化为多巴胺能神经元过程中Mash1及Hes1基因的表达被引量：1
- 2015年
- 目的建立神经干细胞(NSCs)分化为多巴胺能神经元的体外模型,并进一步研究此分化过程中Mash1及Hes1基因的表达变化。方法无菌条件下取孕14-16d胎鼠端脑进行NSCs体外培养,将NSCs进行Nestin免疫荧光检测,对照组和实验组(GDNF+IL-1α联合组)诱导2周后进行β-tubulinⅢ和TH免疫荧光染色,计算各组阳性细胞率,荧光定量PCR技术检测P4代NSCs分化1周和2周时Mash1及Hes1基因的表达变化。结果免疫荧光检测结果显示,NSCs的Nestin阳性细胞率为(93.04±3.55)%,诱导分化2周后对照组、实验组β-tubulinⅢ阳性细胞率分别为(12.65±1.58)%和(33.95±2.97)%,两组间比较差异存在统计学意义(P<0.05)。对照组、实验组TH阳性细胞率分别为(1.46±0.41)%、(15.51±1.94)%,差异存在统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR结果显示,NSCs诱导分化后,Mash1基因表达较未分化状态时升高,各组间比较差异存在统计学意义,实验组高于对照组(P<0.05),分化2周高于1周(P<0.01);Hes1基因于分化后表达降低,对照组与对实验组之间以及分化1周与2周之间比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 GDNF和IL-1α联合作用能够诱导NSCs定向分化为多巴胺能神经元;Mash1与Hes1基因可能参与NSCs分化为多巴胺能神经元的过程。
- 张君度龙大宏陈艳刘菲菲龙静怡
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元HES1
- 胶质细胞源性神经营养因子诱导神经干细胞分化过程中bHLH转录因子的表达变化被引量：2
- 2013年
- 目的观察胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）对神经干细胞分化的影响，探讨碱性螺旋环螺旋（basic helix-loop-helix，bHLH）转录因子是否参与在此过程中。方法无菌条件下取孕14。16d胎鼠端脑进行神经干细胞体外培养，将第三代神经球分为对照组和GDNF组，分化1、3、7d细胞进行免疫荧光染色并计算β-tubulinIII阳性率，荧光定量PCR技术检测bHLH基因Hes-1、Hes．5、Mash-1的表达变化。结果免疫荧光染色结果显示，分化1、3、7d时，β-tubulinlll阳性细胞比率分别为：对照组：（3．76±1．14）％、（7．40±1．25）％、（12．65±1．58）％；GDNF组：（7．29±1．57）％、（19．80±1．67）％、（27．55±2．03）％，GDNF组神经元分化率明显高于对照组（P〈0．05）。荧光定量PCR结果显示，Hes-1和Hes-5在分化1、3、7d均保持极低表达，各时间点间比较无明显差异；Mash-1表达则在分化1、3、7d内持续上升，各时间点间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GDNF能通过Mash-1的激活来诱导神经干细胞分化为更多的神经元，并且此过程中bHLH转录因子表达有明显特异性，将为日后进行神经干细胞定向分化的机制研究奠定基础。
- 张君度龙大宏陈艳刘菲菲
- 关键词：神经干细胞胶质细胞源性神经营养因子分化
- 鼎湖山自然保护区夏季蝴蝶资源调查被引量：5
- 2011年
- 鼎湖山是中国陆地北回归线上唯一的季风阔叶林自然保护区.作者于2006年7月和2009年7月对鼎湖山自然保护区蝴蝶物种多样性进行了研究,共采集蝴蝶标本240号,隶属7科69种,有9种为鼎湖山新纪录,其中拟四眼矍眼蝶Ypthima imitan还是广东省新纪录.结合前人的研究,整理出鼎湖山蝶类资源名录,共有蝴蝶10科115属192种,多为东洋界的种类(69.28%),有10种为中国特有种,国家重点保护动物1种,为金裳凤蝶Troides aeacus,易危种4种,近危10种.本研究对鼎湖山蝴蝶的多样性保护和可持续性开发利用具有理论意义和应用价值.
- 杨立陈维昊张洁陈扬林少妍陈燕君郑冬阳梁享吴惠贞庆宁卢文华Richard LUTMAN
- 关键词：鳞翅目物种多样性
