国家自然科学基金(31201938)
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
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- 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体研究进展被引量：2
- 2014年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给世界养猪业造成了巨大损失。对PRRSV受体的深入研究有助于揭示病毒与宿主细胞的相互关系,明确病毒的入侵机制及其对宿主细胞的影响,帮助人们了解病毒的侵入过程、复制动力学及其一系列在胞内发生的事件;对于揭示病毒感染过程与免疫系统之间的相互作用,阐明细胞病理和组织病理是非常有价值的,也必然会对抗病毒药物和疫苗研发产生巨大的推动作用。
- 黄海军彭霞卢顺周莉向敏陈志华占才耀陶弼菲
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征细胞受体病毒入侵
- 稳定转染CD151或CD163的Marc145细胞系的建立及其在PRRS疫苗生产中的应用被引量：1
- 2015年
- 为了进一步探讨提高PRRSV感染靶细胞滴度的有效方法,本研究采用脂质体介导方法,通过G418筛选稳定转染Marc145细胞,并利用单个细胞克隆技术,获得了稳定超表达CD151蛋白和(或)CD163蛋白的Marc145细胞株,经免疫荧光化学和Western Blot鉴定证实,成功表达出基因重组猪CD151蛋白和CD163蛋白。在GMP生产车间将超表达CD151、CD163蛋白或CD151/CD163蛋白共表达的Marc145细胞感染PRRSV,使病毒感染滴度提高了10倍以上。将上述收获的病毒液制备了灭活苗,疫苗效力超过部颁标准。
- 阮征刘开武吴建英华娟夏瑜王莲芳胡小明刘杰黄海军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征真核表达疫苗生产
- 猪感染肺炎支原体模型的建立及评估
- 2015年
- 为了建立猪肺炎支原体感染的动物模型,选取实验室培养保存的猪肺炎支原体济南株F66株(编号:CVCC354),在不同时间点对12头实验猪进行人工感染,分别建立早期、中期和晚期猪支原体肺炎动物模型。采用PCR、形态学、组织学等多种方法对模型进行评估,证实早期、中期和晚期猪支原体肺炎动物模型成功建立。
- 代长云吴建英阮征胡修忠周华刘开武张四化夏瑜华娟李杰黄海军
- 关键词：肺炎支原体动物模型
- 山羊超数排卵技术研究进展被引量：2
- 2014年
- 超数排卵可以为胚胎移植提供胚胎,获得稳定、高效的超数排卵效果已成为推广胚胎移植的关键。本文从促卵泡素与促黄体生成素的比值、孕激素、优势卵泡以及其他因素对超数排卵的影响进行了综述,并就目前采用的超排方法进行了归纳总结,以期为超数排卵技术推广应用提供借鉴。
- 刘杰卢顺高其双黄海军蒋思文
- 关键词：超数排卵激素山羊
- 动物疫苗生产中异源微生物污染清除技术的建立及应用
- 2014年
- 通过2种方式建立了清除细胞、病毒等培养用原材料中异源微生物污染物的技术:1)采用钴-60γ射线辐照技术彻底除去细胞培养基、洗涤液、消化液等与细胞直接接触的原材料中的异源微生物,确定了钴-60最佳辐照剂量(12 kGy);2)通过对细胞进行基因遗传修饰建立抗病专用细胞系(株)。试验证实,2种方式在获取无异源微生物方面均有较好效果并各有优点。第一种物理方式处理时间短、效果好;第二种方式处理时间较长,一旦建立起来稳定的种子细胞库可以长时间发挥作用,而且由于采用单个细胞克隆方法建立细胞库后细胞均一性明显提高,可以有效提高生产产量。2种方式可供生物制品生产企业在生产过程不同阶段进行选择。
- 黄海军高其双吴建英程蕾张四化陈志华占才耀王莲芳刘武刘杰
- 关键词：病毒培养支原体基因修饰
- 稳定转染pGM-CSF基因的哺乳动物细胞系的建立
- 2013年
- 构建稳定表达猪pGM-CSF基因的细胞系可以为工业化生产猪pGM-CSF并将其应用于新型兽药的开发提供生产细胞源。本试验用脂质体介导法将真核表达载体plRES2-EGFP-pGM-CSF瞬时转染BHK-21细胞,通过不同浓度的G418加压筛选和进一步采用单个克隆法筛选,建立稳定转染且高效表达pGM-CSF的BHK-21细胞株9个,采用Elisa方法测定稳定转染pGM-CSF的BHK-21细胞株细胞培养上清液中pGM-CSF的表达水平达到329.37±13.76ng/mL。为下一步从细胞培养物中大量提取目的蛋白并最终开发出一种用于提高动物疫苗免疫效力的新型生物制剂奠定基础。
- 陶弼菲高其双陈志华向敏占才耀钱运国夏瑜华娟王莲芳任远黄海军
- 关键词：哺乳动物细胞稳定转染蛋白表达
- PRRS病毒主要受体蛋白CD151和CD163真核表达载体的构建
- 2014年
- 为了进一步研究PRRSV与细胞受体之间的相互作用机理,通过基因工程方法从PAM细胞中克隆获得了CD151和CD163全长编码片段,利用Sal I和Kpn I内切酶对回收得到的CD151(762 bp)和CD163(3 333 bp)DNA片段进行酶切,构建了p IRES2-EGFP-CD151和p IRES2-EGFP-CD163真核表达载体。经PCR和酶切鉴定后,分别提取重组质粒进行细胞转染。荧光显微镜下可见单独转染CD151和CD163基因或CD151/CD163共转染的Marc 145细胞表达强烈的绿色荧光,Western blot分析结果进一步证实,CD151和CD163蛋白在转染后的细胞中获得超表达。猪CD151和CD163真核表达载体的成功构建为进一步探索CD151和CD163在PRRSV感染细胞过程中的协同作用提供了物质基础,特别是对深入研究PRRS病毒的入侵及宿主识别具有重要意义。
- 阮征李杰刘开武王莲芳华娟胡小明刘杰黄海军
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒真核表达载体细胞转染
- 细胞支原体巢式PCR检测方法的建立及应用被引量：5
- 2014年
- 动物生物制品生产过程中细胞(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。细胞支原体污染可显著影响生产用细胞的培养及生物功能的发挥,最终影响生物制品的生产,给生物制品企业造成巨大损失,建立高效、快速、敏感度高的检测方法十分必要。建立了一种支原体巢式PCR检测方法,该方法高效、快速、灵敏,可以最大限度降低假阴性和假阳性结果的出现。该方法的建立对培养细胞、动物疫苗等生物制品企业的检测标准化管理有一定的借鉴意义。
- 黄海军高其双彭霞周莉向敏陈志华占才耀卢顺陶弼菲钱运国童伟文李杰华娟王莲芳夏瑜任远
- 关键词：支原体细胞培养巢式PCR生物制品
- 新生猪骨髓间充质干细胞衍生细胞的分离、培养及生物学特性分析被引量：2
- 2015年
- 利用骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)治疗疾病已经逐渐成为现实,但是作为被移植的种子细胞,BMSCs体外传代能力非常有限,种子细胞来源极为贫乏。本研究通过差速贴壁筛选的方法分离出一种猪BMSCs的衍生细胞株,命名为猪骨髓间充质干细胞衍生细胞(Bone mesenchymal stem-derived cells,BMSDCs)。分别对BMSDCs与BMSCs细胞进行细胞生物学特性分析,探讨其体外诱导分化特性,并应用流式细胞术测定细胞表面标记物。结果表明,BMSC和BMSDCs细胞倍增时间分别为31.3 h和30.3 h,平均传代时间分别为3-5 d和2-3 d;两种细胞均阳性表达CD34、CD90,阴性表达CD44、CD45;经体外诱导后均可分化为成脂细胞和成肌细胞。在传代能力上,前者可传代15至20次,后者可长期传代(200次以上)且维持正常染色体特征。研究认为在适宜的实验条件下,体外培养的猪骨髓间充质干细胞的衍生细胞——BMSDCs能够稳定生存增殖并维持BMSCs多向分化潜能,可作为组织工程的理想种子细胞。
- 阮征王莲芳胡修忠吴建英张四化代长云华娟夏瑜胡小明李杰黄海军
- 关键词：骨髓间充质干细胞生物学特性
