国家自然科学基金(30070267)
- 作品数：15 被引量：44H指数：5
- 相关作者：范明孙长凯丁爱石韩大跃赵杰更多>>
- 相关机构：大连医科大学军事医学科学院解放军第210医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 噬菌体肽库中筛选NMDA受体抗原表位被引量：1
- 2003年
- 为了获得人N 甲基 D 天冬氨酸受体 (NR)主亚基 (NR1)M3 M4环B细胞表位 ,以人NR1分子M3 M4环单克隆抗体MAB36 3淘筛噬菌体展示随机 12肽库 ,对筛选克隆进行特异性ELISA检测和竞争结合实验分析 .从 30个克隆中得到一个阳性克隆序列“VHTNPSTWQPIL” (克隆 1) ,原核表达的NR1M 3 M 4环可以与克隆 1竞争结合MAB36 3.固相合成 5个表位探针短肽 ,发现其中只有R (2 2 )LRNPSKD可以与M3 M4环竞争结合抗体 ,将NPS三个氨基酸残基逐一敲除 ,缺失N或NP的合成肽和M 3 M 4环竞争抗体的能力减弱 ,缺失NPS的合成肽完全没有竞争能力 ,证明MAB36 3的表位为NPS ,S可能是关键性残基 .
- 康晓楠孙长凯范明薛沿宁邵宁生赵杰韩大跃施广霞
- 关键词：噬菌体肽库NMDA受体抗原表位
- N-甲基-D-门冬氨酸受体主亚基单克隆抗体抗谷氨酸兴奋毒性的体外实验研究被引量：7
- 2003年
- 目的 研究人N 甲基 D 门冬氨酸受体 (NMDAR ,NR)主亚基 (NR1)单克隆抗体mAbN1是否对兴奋毒性脑损害有防护作用。方法 取 10只新生大鼠海马神经细胞进行体外原代培养 ,建立了谷氨酸对培养海马神经细胞兴奋毒性神经损伤模型 ,观察抗体保护后神经细胞形态 ,检测细胞存活率 (锥虫蓝拒染法 )和细胞培养上清乳酸脱氢酶漏出量 ,每组 2个平行皿 ,实验重复 4次。结果 经 0 .3μmol/LmAbN1预处理后 ,神经元具有明显抗谷氨酸兴奋毒性损伤能力 ,存活率提高 35 % ;抗体表位合成肽可以阻断这种保护 ,提示该抗体的保护功能是特异性的。结论 NR1单克隆抗体mAbN1具有体外抗兴奋毒作用 。
- 康晓楠孙长凯范明丁爱石赵杰王吉庆韩大跃施广霞
- 关键词：N-甲基-D-门冬氨酸受体体外实验细胞培养缺血性脑损伤
- 原代海马神经元兴奋毒性模型的建立及存活率的检测与意义被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨和观察药物对神经元的损伤及保护作用。方法 在体外进行海马神经元原代培养并建立谷氨酸兴奋毒作用模型 ;采用台盼蓝染色法、乳酸脱氢酶检测和程序性细胞死检测技术进行原代培养海马神经元存活率检测。结果 神经元的损伤程度与谷氨酸浓度相关 ,NMDA受体拮抗剂MK 80 1对谷氨酸引起神经元死亡有明显的保护作用。结论 谷氨酸通过NMDA受体引起细胞损伤 。
- 沈洁孙长凯范明马辉林平佟玉英施广霞
- 关键词：海马神经元谷氨酸兴奋毒性毒作用存活率原代培养
- 噬菌体肽库中筛选NMDA受体模拟抗原
- 2002年
- [目的 ]研究发现脑缺血患者体内存在N甲基 -D -门冬氨酸 (NMDA)受体自身抗体 ,了解其滴度与疾病程度的相关性。 [方法 ]用NMDAR1单克隆抗体淘筛噬菌体展示随机 12肽库 ,获得NMDAR1模拟表位抗原。 [结果 ]细胞竞争ELISA结果显示 ,该模拟抗原可以竞争细胞表面天然抗原与抗体的结合 ,具有抗原模拟性。 [结论 ]噬菌体肽库中筛选NMDAR1受体模拟抗原可以用于临床病人血清检测。本研究为下一步临床检验准备了必要条件。
- 康晓楠孙长凯范明王芳丁爱石施广霞
- 关键词：噬菌体肽库NMDA受体自身抗体模拟表位脑缺血
- 人NMDA受体主亚基M3-M4环基因片段的高效表达、纯化与鉴定被引量：2
- 2003年
- 用基因工程方法获得人N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate ,NMDA)受体主亚基M3 M4环靶片段 ,以此为免疫原 ,用于进一步免疫原性及相关应用研究 .自人脑胶质瘤组织中提取总RNA ,采用RT PCR扩增出人NMDA受体主亚基M3 M4环的基因片段 ,并按照计算机辅助原核表达载体pBV2 2 0中外源基因高效表达的数学模型预测方法 ,将其进行优化改构 .将目的基因克隆到pBV2 2 0中 ,转化大肠杆菌DH5α ,升温诱导表达 ,从蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的表达情况 ,通过制备性SDS PAGE进行纯化 ,从相对分子质量、免疫反应性、肽质谱指纹分析等方面进行鉴定 .结果表明 ,成功构建了人NMDA受体主亚基M3 M4环的原核表达载体 (命名为pBV NR1L3) ,通过基因优化 ,实现了高效表达 .凝胶扫描分析表达量约占菌体总蛋白 2 9% ,重组肽纯度达 95
- 张玉梅孙长凯范明李伍举刘淑红赵杰韩大跃王嘉玺
- 关键词：受体亚基原核表达
- 谷胱甘肽抗谷氨酸诱导海马神经元损伤钙超载机制研究被引量：3
- 2006年
- 目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)对谷氨酸(G lu)诱导海马神经元死亡影响及其作用机制。方法选用新生Wistar大鼠原代培养海马神经元Glu细胞毒性损伤模型,采用台盼蓝活细胞拒染、培养液乳酸脱氢酶(LDH)测定及TUNEL细胞凋亡原位检测等方法比较GSH及GSSG预处理3d对Glu细胞毒性损伤的影响,同时利用激光扫描共聚焦显微镜观测细胞内Ca2+浓度的变化,并与MK-801比较。结果GSH及GSSG均可减少Glu诱导神经元死亡,轻度抑制Glu诱导的神经元Ca2+内流,但不及MK-801。结论谷胱甘肽对Glu细胞毒性神经损伤有保护作用,除与通常公认抗氧化作用有关外,抑制Glu诱导的神经元Ca2+内流亦为其保护机制之一。
- 王晓虹孙长凯王苏平范明丁爱石吴燕马辉王禄
- 关键词：兴奋毒性海马神经元谷胱甘肽激光扫描共聚焦显微镜
- 银杏内酯B对谷氨酸诱导海马神经元损伤的影响被引量：5
- 2007年
- 目的观察银杏内酯B(ginkgolide B,GB)在不同给药模式下对谷氨酸所致海马神经元损伤的影响。方法采用CO2超临界萃取的方法制备GB,建立新生Wistar大鼠原代培养的海马神经元谷氨酸毒性模型,采用台盼蓝染色、程序性细胞死亡检测技术及乳酸脱氢酶测定的方法,观察预处理与急救两种给药模型下不同剂量GB的神经保护作用,并与MK-801急性给药相比较。结果GB在两种给药模式下均能不同程度地提高细胞存活率,降低凋亡率,减少LDH漏出量,且在一定范围内保护作用呈剂量依赖的方式。其中预处理的效果明显优于急救给药处理,但均弱于MK-801组。结论GB对谷氨酸细胞毒性损伤有保护作用,预防性用药效果更佳。GB可能不仅仅通过拮抗血小板活化因子(PAF)受体等下游事件实现其神经保护作用。如果我们重视其预处理给药的显著效果,将其用于高危人群的预防干预可能有更大价值。
- 孙晶孙长凯范明丁爱石尹琳王小同邬伟
- 关键词：兴奋毒性预处理神经保护
- NMDAR1单克隆抗体抑制谷氨酸诱导的大鼠海马神经元Ca^(2+)内流被引量：2
- 2007年
- 目的观察人N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR,NR)主亚基(NR1)单克隆抗体mAbN1对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元Ca2+内流的影响。方法建立谷氨酸介导的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,以mAbN1及MK-801分别预处理海马神经元,用Fluo-3/AM法,在激光扫描共聚焦显微镜下观察对细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响。结果mAbN1能显著抑制谷氨酸所致海马神经元[Ca2+]i升高,此作用强于MK-801,且其本身对生理状态下神经元[Ca2+]i无影响。结论mAbN1的抗兴奋毒性作用可能是通过改变NR的蛋白质二级结构从而影响兴奋毒性作用中的Ca2+内流实现的。
- 吴兰香孙长凯范明丁爱石
- 关键词：兴奋毒性海马神经元共聚焦显微镜
- N-甲基-D-门冬氨酸受体重组肽抗血清对谷氨酸兴奋毒性导致神经元坏死和凋亡的保护作用被引量：2
- 2003年
- 目的 观察N 甲基 D 门冬氨酸受体 (NMDAR ,NR)主亚基 (NR1)M3M4环重组肽自身抗血清对不同浓度谷氨酸诱导的神经元死亡的保护作用。方法 用NR1M3M4环重组肽免疫Balb/C(H 2 d)小鼠制备抗血清 ,用锥虫蓝染色法和原位末端标记 (TUNEL)法观察抗血清对原代培养海马神经元兴奋毒性坏死和凋亡的保护效应。结果 在高浓度谷氨酸 (5 0 0 μmol/L)条件下 ,阳性抗血清可以使神经元坏死减少 16 % ;在低浓度谷氨酸 (5 0 μmol/L)作用下 ,阳性抗血清保护可使神经元凋亡率减少 13%。结论 NMDAR重组肽自身免疫抗血清具有抗兴奋毒性作用 ,这一结论为免疫防治兴奋毒性脑损伤策略的建立提供了坚实的体外基础。
- 康晓楠孙长凯朱克范明丁爱石马清钧石成华赵杰韩大跃王耀山施广霞包礼平
- 关键词：N-甲基-D-门冬氨酸受体谷氨酸兴奋毒性神经元
- 傅里叶变换红外光谱分析NMDA受体单克隆抗体抗兴奋毒损伤机理被引量：3
- 2003年
- 人N 甲基 D 门冬氨酸受体 (NMDAR ,NR)单克隆抗体MABN1具有明确的抗兴奋毒保护作用 ,但其机制不明 .以MABN1和MK 80 1分别预处理海马细胞 ,拮抗谷氨酸兴奋毒损伤作用 ,采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)技术 ,对不同处理后的海马细胞红外光谱特性进行比较 .将去卷积的酰胺Ⅰ带进行曲线拟合后发现 ,MABN1组与MK 80 1组的蛋白质二级结构有明显不同 。
- 康晓楠孙长凯范明宋占军赵杰王吉庆施广霞
- 关键词：NMDA受体单克隆抗体海马神经元中枢神经系统
