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乙型脑炎病毒致弱株的筛选及其生长特性被引量：1: 2013年; 本文将乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因I型HEN0701株在BHK-21细胞上传代,并通过空斑纯化和接种小鼠来筛选弱毒株。通过空斑试验和一步生长曲线,比较弱毒株和其亲本强毒株的生长特性。结果显示,JEV HEN0701株经过在BHK-21细胞上传代100代和10轮空斑纯化,挑选获得6株克隆株。将6株克隆株经脑内和皮下接种小鼠,筛选获得一株致弱株10S3。与HEN0701相比,10S3的空斑形态比较一致;而生长曲线显示,HEN0701在BHK-21上生长速度比10S3快。; 郑浩郑旭晨郭亦非童武刘飞张青占单同领童光志; 关键词：乙型脑炎病毒致弱

宿主菌株及培养温度对乙型脑炎病毒cDNA克隆稳定性的影响被引量：2: 2013年; 本研究旨在探讨宿主菌株及培养温度对JEV cDNA克隆在宿主菌中稳定性的影响。选取猪源乙型脑炎病毒基因Ⅰ型HEN0701株和基因Ⅲ型SH0601株为研究对象,分别将两毒株基因组克隆中不稳定的质粒转化不同大肠杆菌菌株,并改变转化菌的培养温度,将不同条件下培养的质粒进行序列分析。试验结果表明,不同宿主菌株对重组质粒不稳定性的影响不显著;低温培养可以克服克隆序列的不稳定。对获得的突变质粒的分析结果显示,基因组5'端的3个起始密码子和E蛋白可能与质粒的不稳定性相关。; 郑旭晨郑浩童武单同领郭亦非童光志; 关键词：乙型脑炎病毒培养温度

乙型脑炎病毒反向遗传系统的构建: 乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)属黄病毒科黄病毒属,是一种重要的蚊传人兽共患病病原。近年来,我国出现基因I型(genotype I,GI)JEV,并逐渐成为主要流行基因型。本...; 郑浩郑旭晨郭亦非童武童光志

乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究被引量：1: 2014年; 为了探求乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定遗传的影响因子，本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1-2913 bp为研究对象，分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用。在5＇端，分析片段中潜在的原核启动子序列，通过PCR扩增得到不同长度的cDNA片段；在3＇端，通过内切酶酶切截断基因组prM蛋白或E蛋白编码区，获得3＇末端不同的cDNA片段。将各片段克隆入pCR-BluntII-TOPO载体，转化大肠杆菌，于37℃条件下培养。结果显示，片段73-2913 bp、97-2913 bp、355-2913 bp及1-933 bp、1-1275 bp能够在转化菌中稳定遗传；含有其他片段39-2913 bp、54-2913 bp及1-1800 bp、1-1971 bp的重组细菌不能在37℃条件下生长；片段1-1600 bp虽然能够在转化菌中传代，但是出现不规律突变。以上结果表明：软件所预测各原核启动子片段中，基因组73-118 bp区域与cDNA克隆稳定性有关，且上游的54 bp至73 bp的序列对该区域启动子存在影响；在JEV基因组1275 bp至1600 bp之间可能存在毒性蛋白编码序列。; 郑旭晨郑浩郭亦非刘飞梁超童武单同领于海童光志; 关键词：乙型脑炎病毒

乙型脑炎病毒反向遗传系统的构建: <正>乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)属黄病毒科黄病毒属,是一种重要的蚊传人兽共患病病原。近年来,我国出现基因I型(genotype I,GI)JEV,并逐渐成为主要流行基因...; 郑浩郑旭晨郭亦非童武童光志; 文献传递

乙型脑炎病毒NS1'蛋白编码框的扩展对病毒毒力的影响: 2014年; 通过分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组中核糖体移码序列,在对NS2A基因实施同义突变基础上,设计2组引物,通过PCR突变方法,依次删除移码后NS1'基因开放阅读框的终止密码子,并将突变片段替换JEV感染性克隆pJEHEN中相应片段,获得了2株突变全长克隆。经体外转录合成RNA,再以RNA转染细胞,拯救出两株突变病毒vJET1和vJET2。通过RT-PCR扩增突变病毒中含突变位点的基因组片段,测序证实了vJET1基因组3690位核苷酸存在由T向A的突变,vJET2基因组3690位和3819位核苷酸均存在由T向A的突变。将vJET1和vJET2感染Vero细胞后,Western blot检测显示,两株突变病毒表达的NS1'蛋白均出现延长现象。生长曲线显示,与亲本病毒vTHen相比,突变病毒增殖速度均出现下降。动物实验显示,与vTHen相比,vJET1和vJET2对小鼠的神经毒力与神经侵袭力也出现下降。上述结果表明,NS1'编码框的延伸降低病毒在体外培养细胞上的增值速度,也减弱了病毒对小鼠的毒力。; 郭亦非郑浩郑旭晨童武刘飞梁超单同领于海童光志; 关键词：乙型脑炎病毒突变毒力

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