广西省自然科学基金(0542069)
- 作品数：9 被引量：23H指数：3
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- 提高腺病毒表达载体扩增效率的研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨在体外扩增重组腺病毒表达载体的有效方法。方法用含10%胎牛血清RPMI1640培养液常规培养人胚肾293细胞,当细胞生长至70%～80%汇合时,加入含有报告基因LacZ的重组5型腺病毒载体(Ad5CMVLacZ)共同培养36～38h。用X-gal组织化学方法检测Ad5CMVLacZ转染和表达的程度。结果293细胞生长至70%～80%汇合时,分裂增殖旺盛,形态为梭形、多角形,有明显分裂相,为指数生长期细胞。加入Ad5CMVLacZ8h后,293细胞开始出现肿胀,细胞间联系疏松,36～48h后细胞变成圆形、球形,对光折射增强,并聚集成葡萄串状。在此时间段作X-gal组化反应显示,约90%的293细胞被转染和表达产物。结论用上述方法可提高体外扩增腺病毒载体的效率,只要把握好病毒转染的时机和收获被转染293细胞的时机,就有可能制备出高滴度的病毒液,从而满足基因治疗神经退行性疾病的需要。
- 崔卫刚郭灵曾庆堂磨洁琳韦力蓝玲
- 关键词：体外扩增腺病毒载体Β-半乳糖苷酶人胚肾细胞
- 胰岛素逆转1型糖尿病脑病模型大鼠海马齿状回神经发生障碍与空间学习记忆异常的研究被引量：4
- 2009年
- 目的揭示海马齿状回神经发生与1型糖尿病脑病发病的相互关系以及用胰岛素干预后所发生的变化。方法分别用链脲佐菌素和胰岛素建立1型糖尿病脑病大鼠模型和胰岛素治疗大鼠模型,采用Morris水迷宫以及5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU,一种神经干细胞DNA合成的标记物）单标、BrdU＋NF（神经丝,成熟神经元的标志物）双标、BrdU＋GFAP（胶质原纤维酸性蛋白,成熟星形胶质细胞的标志物）双标的免疫组织化学方法,测试大鼠的空间学习记忆能力,并在光镜下观察处于海马齿状回神经发生过程中的细胞存活、迁移和分化的程度。结果1型糖尿病脑病模型大鼠的空间学习能力,海马齿状回BrdU单标、BrdU＋NF双标和BrdU＋GFAP双标的阳性细胞数均明显下降（P〈0.01）;用胰岛素治疗后可提升以上各项指标几乎接近正常水平（P〈0.01）,但各种阳性细胞形态以及细胞迁移的方向、路径和终点均不受到明显的影响。结论个体内长期缺乏胰岛素,导致海马齿状回神经干细胞生存率和分化率下降,可能是诱发1型糖尿病脑病的一个因素;尽早用胰岛素进行干预可逆转神经发生障碍和学习记忆异常,这将有利于防治该脑病的发生。
- 崔卫刚郭灵蓝玲邓祥发曾庆堂磨洁琳林丹
- 关键词：糖尿病脑病胰岛素学习记忆神经发生齿状回海马
- 将含有报告基因LacZ的重组腺病毒载体从大鼠鼻腔转移至脑的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨将携带有报告基因的腺病毒载体由鼻腔转移至脑途径的可行性。方法将携带半乳糖苷酶报告基因(LacZ)的5型重组腺病毒载体(Ad5 CMVLacZ)注入SD大鼠鼻腔黏膜,分别在注射3 d、7 d、14 d、21 d及28 d切取大鼠鼻腔黏膜以及与嗅觉信息传导途径相关的脑组织,进行冰冻切片和β-半乳糖苷酶(β-gal)免疫组织化学反应显色,判断该载体是否转染和表达蛋白质产物。结果β-gal免疫组化染色反应显示,该病毒载体从第3天起即可在鼻腔黏膜与嗅球内的细胞转染和表达,在第7天至第21天病毒载体逐渐向颅内深部的室管膜下区、杏仁核及齿状回细胞转移和表达,持续性表达蛋白质产物达28 d之久。结论经鼻腔黏膜注入腺病毒载体不仅可将外源性基因转移到脑实质内,还可确保外源性基因转染和表达成功。
- 蓝玲郭灵
- 关键词：腺病毒载体Β-半乳糖苷酶基因鼻腔
- 褪黑素对1型糖尿病脑病大鼠学习记忆和海马齿状回细胞凋亡及Bax与Bcl-2蛋白表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨褪黑素治疗对1型糖尿病脑病空间学习忆忆、海马齿状回细胞凋亡以及凋亡相关基因Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。方法将成年健康雄性Wistar大鼠随机分成4组(每组均为12只大鼠):1型糖尿病脑病组、载体模型治疗组、褪黑素治疗组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素(55mg/kg,溶于柠檬酸缓冲液中),建立1型糖尿病脑病模型;通过对该脑病模型大鼠腹腔注射褪黑素(200μg/kg,溶解于乙醇生理盐水中),建立褪黑素治疗模型;分别通过对大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液、乙醇生理盐水,建立载体治疗模型;但未对正常对照组大鼠进行过任何处理。应用Morris水迷宫、Bax、Bcl-2、TUNEL反应技术,观察各组大鼠空间学习记忆、海马齿状回的颗粒下区(SGZ)和颗粒细胞层(GCL)的细胞凋亡及Bax与Bcl-2基因的蛋白表达程度。结果1型糖尿病脑病大鼠在水迷宫的逃避潜伏期和游泳距离均比其它各组的对应指标明显延长(P<0.01),该脑病组大鼠海马齿伏回的SGZ和GCL的Bax阳性细胞数、TUNEL阳性细胞数也均比其它各组的对应指标明显升高(P<0.01),但该脑病组SGZ和GCL的Bcl-2阳性细胞数则明显低于其它各组的相应指标(P<0.01)。应用褪黑素治疗该脑病组大鼠30d后,可将1型糖尿病脑病组大鼠的以上各项指标逆转至接近正常水平(P<0.01)。结论褪黑素治疗不仅可纠正因1型糖尿病脑病大鼠海马齿状回凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2蛋白质表达水平比例异常而引发的细胞凋亡,还可改善该脑病的空间学习记忆障碍,提示褪黑素在防治该脑病中具有一定的功效。
- 玉洪荣王薇郭灵张芳蓝玲白鹭
- 关键词：褪黑素糖尿病脑病学习记忆细胞凋亡BAX齿状回海马
- 1型糖尿病脑病大鼠空间学习记忆与海马齿状回神经干细胞增殖的观察被引量：6
- 2009年
- 目的揭示1型糖尿病继发性脑病变(糖尿病脑病)的发生与海马齿状回颗粒下区(SGZ)神经干细胞增殖之间的关系。方法应用链脲佐菌素(溶解于柠檬酸缓冲液中)腹腔注射,将成年雄性Wistar大鼠建立成1型糖尿病脑病模型;将用柠檬酸缓冲液腹腔注射的大鼠或正常大鼠分别作为载体模型组或正常对照组。在建立模型成功后的60d,用Morris水迷宫和5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU,一种神经干细胞合成DNA的标记物)免疫组化方法,观察各组大鼠空间学习记忆能力以及SGZ神经干细胞(BrdU阳性细胞)的变化。结果1型糖尿病脑病模型大鼠的逃避潜伏期和游泳距离均较载体模型组或正常对照组大鼠明显延长(P<0.01);而且该脑病组大鼠SGZ的BrdU阳性细胞数也明显低于载体模型组或正常对照组大鼠(P<0.01)。结论个体内长期缺乏胰岛素可导致SGZ神经干细胞增殖出现障碍,从而引发空间学习记忆能力下降,这可能是诱发1型糖尿病脑病的一个因素。
- 郭灵崔卫刚蓝玲邓祥发曾庆堂林丹磨洁琳
- 关键词：糖尿病脑病神经干细胞细胞增殖学习记忆齿状回海马
- 成年大鼠侧脑室注射与脑实质注射腺病毒表达载体转染脑细胞的比较研究被引量：1
- 2009年
- 目的比较观察脑室注射和脑实质注射腺病毒表达载体转染脑细胞的范围及表达产物的程度。方法分别将Ad5CMV LacZ表达载体（20μl，病毒滴度为1．01×10^5pfu／ml）注入成年SD大鼠右侧脑室、尾壳核、内侧隔核-斜角带复合体和背侧海马，在注射后3～28d将大鼠脑制作成为切片，进行X-gal组织化学反应，观察被转染和表达的细胞形态和数目。结果在侧脑室内注射后3d，右侧侧脑室室管膜细胞及其下层开始有病毒载体转染和表达，继之向对侧侧脑室、第三脑室和第四脑室转染和表达产物，脊髓中央管壁偶尔有被转染和表达的细胞；而将等体积和等滴度的AdSCMV LacZ载体注入尾壳核、内侧隔核-斜角带复合体和背侧海马，则均出现直径约2～5mm的转染范围，表达产物的细胞离注射原位最远处约为5—6mm，细胞表达产物很局限并相对集中；而侧脑室注射病毒载体可以随脑脊液流动而使转染范围广，但被转染细胞主要集中在室管膜及其下层，离脑室壁最远处也只在0．5—2mm范围内。结论侧脑室注射病毒表达载体便于基因治疗弥漫性脑疾病；而脑实质注射病毒表达载体则利于基因治疗局部性脑疾病。
- 王薇郭灵
- 关键词：脑室脑实质腺病毒LACZ基因
- 提高BrdU标记成年大鼠在体脑神经干细胞增殖和分化效率的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨合理利用BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）单标成年在体脑神经干细胞增殖以及双标成年在体脑神经干细胞分化的策略。方法在BrdU通过腹腔注射6h后或在BrdU腹腔注射后14～21d将大鼠灌注固定，继之用邻片进行H—E染色以作定位，分别对脑组织切片进行BrdU单标或BrdU＋NT（神经丝，成熟神经元的标志物）、BrdU＋GFAP（胶质原纤维酸性蛋白，成熟星形胶质细胞的标记物）以及BrdU＋GC（半乳糖脑苷脂，成熟少突胶质细胞的标记物）的双标免疫组织化学反应，光镜下观察和计数单标或双标的阳性细胞。结果BrdU单标阳性细胞多见于侧脑室的SVZ（室管膜下区）和SGZ（齿状回颗粒下区），而BrdU＋NT阳性细胞多位于嗅球和齿状回的颗粒细胞层，BrdU＋GFAP阳性细胞多见于SVZ或SGZ；BrdU＋GC阳性细胞数最少，散在分布于以上四个部位内。结论在进行BrdU标记脑神经干细胞前应该制定优化组合方案，以获得最佳的单标和双标的识别效果。
- 蓝玲郭灵
- 关键词：BRDU脑神经干细胞神经丝胶质原纤维酸性蛋白
- 成年大鼠脑神经干细胞表达PCNA和Ki-67抗原的比较研究
- 2009年
- 目的比较成年大鼠侧脑室管膜下区(SVZ)和齿状回颗粒下区(SGZ)神经干细胞表达增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67抗原的动态变化。方法采用免疫组织化学方法,分别对成年雄性SD大鼠SVZ和SGZ的PCNA阳性细胞及Ki-67阳性细胞进行定性和定量研究。结果PCNA或Ki-67免疫反应产物均位于细胞核,两种细胞的形态及分布也相似,但在SGZ或SVZ内的PCNA阳性细胞数均明显低于Ki-67阳性细胞数(P<0.05)。结论PCNA和K-67联合应用可以更全面和准确地评估成年在体神经干细胞的增殖状态。
- 廖章鼎郭灵
- 关键词：增殖细胞核抗原KI-67抗原神经干细胞
- Ⅰ型糖尿病脑病模型大鼠空间学习记忆以及海马齿状回细胞凋亡和Bax与Bcl-2蛋白表达的变化被引量：2
- 2009年
- 目的探讨1型糖尿病脑病海马齿状回细胞凋亡、Bax与Bcl-2蛋白表达、空间学习记忆之间的相互关系。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(溶于柠檬酸缓冲液)建立1型糖尿病脑病模型大鼠,通过腹腔注射柠檬酸缓冲液建立载体模型大鼠。应用Morris水迷宫、TUNEL技术、Bax与Bcl-2免疫组化方法,观察各组大鼠海马齿状回颗粒下区(SGZ)、颗粒细胞层(GCL)的Bax、Bcl-2、TUNEL阳性细胞和空间学习记忆的变化。结果糖尿病脑病组大鼠的SGZ、GCL的Bax阳性细胞数、TUNEL阳性细胞数、水迷宫的逃避潜伏期和游泳距离均明显高于载体模型组或正常对照组大鼠的对应指标(P<0.01);而糖尿病脑病组大鼠的Bcl-2阳性细胞数则明显低于载体模型组或正常对照组大鼠(P<0.01),但以上各组3类阳性细胞的形态和分布却均无明显差异。结论体内长期缺乏胰岛素可打破凋亡基因Bax与抗凋亡基因Bcl-2的蛋白表达水平之间原有的正常动态平衡状态,致使海马齿状回的细胞倾向于多发生细胞凋亡事件,这可能是引发1型糖尿病脑病神经发生障碍及空间学习记忆异常的一个因素。
- 玉洪荣王薇郭灵张芳蓝玲白鹭
- 关键词：糖尿病脑病学习记忆细胞凋亡BAX齿状回海马
