国家自然科学基金(39970131)
- 作品数：7 被引量：53H指数：5
- 相关作者：朱平张英王奕嘉李惠芳王逸群更多>>
- 相关机构：北京大学第一医院首都医科大学附属北京儿童医院郑州市第三人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因表达载体的家族特异性抗淋巴瘤疫苗被引量：5
- 2004年
- 目的 构建免疫球蛋白重链可变区 (IgHV)基因片段与细胞因子粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)或白细胞介素 2 (IL 2 )的融合基因表达载体作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗 ,接种动物了解该疫苗抗淋巴瘤免疫功能。方法 从脐带血免疫球蛋白基因文库获得 6个片段长度差异较大的IgHV3基因片段 ,测序后利用生物信息资源分析预测其重链可变区的T细胞表位 ,分析IgHV1 6个片段。选择包含了绝大多数T细胞表位的IgHV1、IgHV3基因 ,将框架区 (FR)为主的IgHV(FR)基因片段及IgHV(FR)与GM CSF或IL 2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体中。表达载体通过脂质体转染COS细胞 ,ELISA法确定GM CSF或IL 2的表达情况。将一些表达载体作为核酸疫苗免疫小鼠 ,通过间接免疫荧光法和细胞因子分泌法检测小鼠抗同一家族淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。结果 计算机评分系统预测显示在每个IgHV序列中约存在 30个左右分别受HLA位点限制的T细胞表位 ,90 %以上的T细胞表位位于框架区 ,积分排位于前 1 0 %的T细胞表位都位于框架区。构建了去除CDR3区后以框架区 (FR)为主的IgHV1 (FR)和IgHV3(FR)真核表达载体。将GM CSF或IL 2基因连接到 2个IgHV基因的 3′端。IgHV (FR ) GM CSF/pcDNA3.0中GM CSF的表达量高于对照组 2
- 刘辉朱平林宁晶张英卜定方王奕嘉王逸群杨英
- 关键词：免疫球蛋白细胞因子融合基因基因表达载体肿瘤疫苗
- 系统性红斑狼疮自体外周血干细胞移植T细胞克隆基因谱型变化被引量：14
- 2003年
- 目的 通过系统性红斑狼疮 (SLE)自体外周血干细胞移植 (APBSCT)前后T细胞受体 β(TCRβ)CDR3基因表达谱型的变化 ,探讨SLE发病机理以及患者干细胞移植后T淋巴细胞克隆的免疫重建特征。方法 应用RT PCR扩增APBSCT的SLE患者外周血的TCRβ可变区 (V) 2 5个家族的基因序列 ,在长泳道测序胶上电泳 ,形成TCRβCDR3基因表达谱型图。通过谱型图上电泳条带分析SLE移植前T细胞克隆增生的特征以及移植后T细胞克隆群的变化 ,做增生T细胞克隆的TCRβ基因序列分析 ,了解TCRβ基因与自身免疫病的相关性。 结果 正常TCRβV2 5个家族的基因序列电泳后分别出现呈高斯分布的 10余条电泳条带 ,组成CDR3基因表达谱型图。 8例SLE患者谱型图均出现异常 ,4例TCRβ在 βV13.1基因家族T细胞出现寡克隆增生 ,3例在 βV8,βV9,βV15家族中出现寡克隆性增生。APBSCT后T细胞克隆分布趋于正常 ,CDR3恢复多态性 ,部分恢复到正常TCRβ基因分布。测序结果显示谱型图上单一条带过度浓集往往是单克隆或者寡克隆T细胞增殖 ;发现SLE一个异常T细胞克隆的TCRβV8CDR3氨基酸序列与已报道强直性脊椎炎疾病相关克隆完全一致。 结论 SLE患者出现T细胞寡克隆增生 ,增生的T细胞克隆可能与自身免疫病发病有关。APBSCT后免疫重建 ,抑制了致病的T细胞?
- 符粤文朱平赵晓武李惠芳曾中州张蕊王奕嘉张英刘继华
- 关键词：系统性红斑狼疮自体外周血干细胞移植T细胞克隆基因表达谱免疫重建RT-PCR
- 用TCRβ链可变区谱型图分析疾病中T淋巴细胞克隆的变化被引量：4
- 2005年
- T细胞是通过T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)识别抗原,根据基因重排所产生的TCRβ链可变区(BV)基因可以将T细胞克隆分为24个基因家族。利用T细胞表面的TCRBV片段的不同可以建立TCRBV基因谱型图,分析并识别具有不同功能的T细胞克隆,了解各种T细胞克隆在恶性疾病及自身免疫性疾病中的功能和增殖情况。体外扩增具有特异性抗肿瘤活性的T细胞,再将其输给患者,有可能发展为肿瘤免疫治疗的新方法。通过对TCRBV的基因特征分析,可以发展抗TCR的单克隆抗体或者DNA疫苗抑制自身免疫病相关性或者肿瘤性T细胞生长,以治疗这些难治性疾病。TCR转基因技术还能使普通T细胞修饰成抗肿瘤T细胞。本文就T细胞受体特征、TCRBV基因谱型分析方法、TCRBV片段与自身免疫性疾病、血液病中增殖的T细胞克隆,识别肿瘤抗原肽的T细胞的寡克隆增生和TCRBV谱型分析与骨髓移植作一概述。
- 朱霞郭晓玲朱平
- 关键词：T细胞受体免疫治疗
- 抗磷脂综合征识别相关抗原的T细胞克隆受体分析被引量：2
- 2006年
- 为了了解识别抗磷脂综合征相关抗原的T细胞受体特征,用基因谱型图的方法分析一例抗磷脂综合征患者体内的T细胞特征。结果发现优势T细胞呈寡克隆性增生;进一步分析2群主要T细胞克隆的T细胞受体(TCR)基因特征表明,其TCRβ链基因主要由TCRβV8和TCRβV23家族基因编码,T细胞接触抗原的TCRβVCDR3区氨基酸序列分别是CASSLLVAGGPRAYNEQFFGPG和CASSLAGFGQPQHFGDG,其CDR3区模体YNEQFF-GPG和QHFGDG与报道的特发性血小板减少性紫癜和系统性红斑狼疮高度一致。结论这些自身免疫病增殖的T细胞克隆可能识别同样的抗原。
- 欧媛朱平朱霞顾江英刘静杜金伟张英刘红星庄昕
- 关键词：抗磷脂综合征T细胞受体
- 转mdr1基因诱导CIK细胞耐药并保持肿瘤杀伤活性被引量：14
- 2003年
- 目的 将多药耐药基因 (mdr1)转入细胞因子诱导的杀伤 (cytokine inducedkiller,CIK)细胞 ,观察其是否产生耐药性并且保持肿瘤杀伤活性。方法 用IFN γ ,CD3单抗 ,IL 2 ,IL 1等细胞因子体外诱导外周血单个核细胞获得CIK细胞。采用电穿孔方法将mdr1基因表达质粒pHamdr转入CIK细胞。转染后 72h提取细胞总RNA ,DNA酶消化残留质粒DNA后进行RT PCR ,鉴定mdr1基因表达 ;流式细胞仪检测细胞膜耐药蛋白 (P gp)表达。四唑蓝比色法 (MTT)检测转基因后CIK细胞对阿霉素和秋水仙碱的耐药性 ;同时检测转染前后CIK细胞对MCF7细胞 (人类乳腺癌细胞系 )的杀伤活性变化。结果 转染mdr1后的CIK细胞mdr1mRNA阳性 ,P gp阳性的CIK细胞为 2 1%～ 37% (平均 2 7% )。转染后CIK细胞获得了多药耐药性 ,对阿霉素的IC50 值较转染前升高了 2 2 .3～ 4 5 .8倍 ,对秋水仙碱的IC50 值升高了 6 .7～ 11.35倍。转染前后CIK细胞对MCF7肿瘤细胞的杀伤活性无明显变化 (P >0 0 5 )。结论 CIK细胞转入mdr1基因后获得了多药耐药性 ,转染后的CIK细胞仍然保持原有的肿瘤细胞杀伤活性。
- 杨永红李惠芳石永进王逸群张英王奕嘉朱平
- 关键词：CIK细胞肿瘤杀伤活性耐药性细胞免疫治疗肿瘤
- 免疫球蛋白重链框架区的抗原九肽诱导特异性细胞毒T细胞增殖被引量：9
- 2004年
- 目的 探索免疫球蛋白重链可变区 (IgHV)是否存在T细胞识别的表位。 方法 PCR扩增 10 8例急性淋巴细胞白血病 (ALL)的 7个IgHV家族的重排基因 ,PCR产物直接测序并翻译成氨基酸。利用互联网生物信息资源分析B ALLIgHV基因的重排类型和基因变异 ,利用SYFPEITHI和BIMAS软件预测IgHV基因编码蛋白质的T细胞表位。合成代表性九肽IgHV1家族的QLVQSGAEV ,进行T2结合分析、合成九肽诱导的T细胞扩增、扩增细胞的HLA A 0 2 0 1/QLVQSGAEV四聚体检测等实验 ,确定合成九肽的免疫原性。结果 6 6 %的B ALL检测到IgHV基因重排克隆。在 4 0份测序得到的B ALLIgHV序列中 ,选出 2 6份进行HLA A 0 2 0 1分子结合九肽的预测 ,发现 7个IgHV家族共有 12条抗原九肽。除 1条位于第 3互补决定区 (CDR3)外 ,10条(83% )位于框架区 (FR) ,并与相应胚系VH 家族的代表序列相同 ;为同一IgHV家族的白血病细胞所共有。合成的IgHV1抗原九肽可将T2细胞表面HLA A 0 2 0 1分子的表达提高 1 6 3倍。HLA A 0 2 0 1正常供者的外周血淋巴细胞接受该九肽负荷的自身PBMC的 1轮刺激 ,CD8+ 四聚体 + 细胞达1 6 4 % ,继续接受该九肽负荷的T2细胞的 2轮刺激 ,CD8+ 四聚体+ 细胞增至 82 5 7%。
- 刘英朱平胡亚美
- 关键词：免疫球蛋白抗原细胞增殖急性B淋巴细胞白血病
- 骨髓增生异常综合征世界卫生组织新分型的临床评价被引量：12
- 2004年
- 朱平冯茹曹香红董玉君岑溪南
- 关键词：骨髓增生异常综合征世界卫生组织MDSAMLFAB分型
