“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A-40)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：田克恭孙明丁银巧张文杰赵德明更多>>
- 相关机构：中国动物疫病预防控制中心中国农业大学中华人民共和国农业部更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的利用毕赤酵母系统表达口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB,用于FMDV感染与疫苗免疫动物的鉴别诊断和3AB蛋白功能研究。方法采用PCR方法从pGEM-T-Easy-3ABC质粒中扩增3AB基因,将其插入pPICZαA酵母表达载体中,构建的重组表达质粒线性化后电转入毕赤酵母GS115中,在0.5%甲醇诱导下表达3AB蛋白,运用SDS-PAGE和ELISA方法鉴定表达蛋白。结果成功构建了pPICZαA-3AB重组酵母表达质粒,并转化入毕赤酵母GS115中,SDS-PAGE和ELISA鉴定结果表明,重组酵母菌株表达出约19kD的3AB蛋白,与针对FMDV的3AB蛋白单克隆抗体有特异性反应。结论在毕赤酵母中成功表达了FMDV3AB蛋白,与抗FMDV3AB蛋白单克隆抗体具有反应性。
- 丁银巧张剑锐张云霞曹振孙明田克恭
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白毕赤酵母真核表达
- O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及其在重组杆状病毒中的表达被引量：1
- 2006年
- 利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒VP1基因在Sf9细胞中的表达研究。首先克隆了VP1基因片段,将pMD18-VP1质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBac分别用BamH及Hind酶切后,用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pFastBac-VP1;再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,在菌体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1;将Bacmid-VP1转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,并进行表达水平的检测。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,VP1蛋白在重组杆状病毒中获得表达。
- 韩松金宁一鲁会军郑敏尹革芬葛淑敏金扩世
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因杆状病毒
- AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达被引量：4
- 2009年
- 利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。
- 丁银巧张文杰张云霞赵铁柱孙明遇秀玲赵德明田克恭
- 关键词：VP1基因杆状病毒真核表达
