天津市自然科学基金(09JCYBJC09500)
- 作品数：9 被引量：32H指数：3
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- 重组人促红细胞生成素对脑创伤大鼠神经功能和空间记忆的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对颅脑创伤大鼠行为学和神经功能恢复的影响。方法 30只成年雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、生理盐水对照组和rhEPO治疗组。治疗组大鼠于打击后半小时内腹腔注射rhEPO 5 000 U,连续注射5 d,对照组打击后半小时内腹腔内注射等量生理盐水。于术后1、4、7、14、21、25 d对3组大鼠神经功能进行mNSS评分。术后21～25 d进行水迷宫实验,记录大鼠每日逃避潜伏期和目标象限百分率。结果 mNSS评分结果显示,与生理盐水治疗组比较,rhEPO治疗组大鼠于伤后第14、21、25天其行为学功能得到明显改善(P<0.05)。rhEPO治疗组大鼠伤后24和25 d的象限百分率明显比生理盐水治疗组大鼠升高(P<0.05),逃避潜伏期短于生理盐水治疗组(P<0.05)。结论 rhEPO对脑创伤大鼠行为学功能和学习及记忆功能的恢复有明显的促进作用。
- 王亮王晓楠王东尉辉杰刘晓智刘振林张建宁
- 关键词：重组人促红细胞生成素脑创伤水迷宫
- 纳米分子PAMAM作为miR药物载体靶向胃腺癌的功能研究
- 2013年
- 目的检测纳米级生物材料聚酰胺-胺(PAMAM)作为微小RNA(miR)基因投递载体对胃腺癌细胞的功能作用,为研发高效小分子靶向投递药物奠定基础。方法透析法制备叶酸(FA)/PAMAM络合物;分别以FA/PAMAM络合物和脂质体为载体转染miR-7至胃腺癌细胞株SGC-7901,荧光显微镜观察络合物转染效率,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法检测miR-7水平;细胞免疫荧光法检测miR-7靶基因表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(PKB)和细胞增殖活性抗原(PCNA)的表达;Transwell体系检测瘤细胞迁移能力。结果与脂质体相比较,FA/PAMAM络合物可显著提高SGC-7901细胞miR-7表达水平,降低瘤细胞EGFR、PKB和PCNA的水平,降低瘤细胞迁移百分率(均P<0.05)。结论PAMAM可以作为小分子药物miR的靶向投递载体,有望进一步推动新的基因靶向药物研发。
- 宋玮姜忠敏徐萍梁英虹刘晓智
- 关键词：胃腺癌微小RNA聚酰胺-胺
- 叶酸／聚酰胺-胺介导miR-7抑制胶质瘤U251恶性表型的研究被引量：4
- 2011年
- 目的研究叶酸／聚酰胺-胺（FA／PAMAM）作为miR-7载体治疗胶质瘤U251的效果。方法将FA／PAMAM／miR-7络合物转染胶质瘤细胞株U251，绘制细胞生长曲线，检测细胞周期和细胞凋亡情况，Transwell体系检测瘤细胞迁移能力，软琼脂克隆实验检测细胞致瘤性；qRT—PCR方法检测miR-7水平，Western blot方法检测EGFR、P13K和AKT2的蛋白表达。结果获得稳定转染的U251细胞增殖速度减慢，细胞周期延长，凋亡细胞比例增多，细胞迁移能力、软琼脂克隆形成能力均有明显降低（P〈0．05）；miR-7水平明显提高，EGFR、P13K和AKT2蛋白水平均有一定程度降低（P〈0．05）。结论FA／PAMAM能够高效投递miR-7基因至胶质瘤细胞，发挥肿瘤生长抑制作用。
- 刘振林刘晓智赵玉军史万超姜忠敏李罡张合亮胆迎
- 关键词：神经胶质瘤微小RNA
- 叶酸/聚酰胺-胺作为miR-7基因载体的胶质瘤靶向性研究被引量：1
- 2012年
- 目的检测叶酸/聚酰胺-胺(FA/PAMAM)作为miR-7基因载体的细胞转染效率及其胶质瘤靶向功能,为研发高效小分子靶向投递药物奠定基础。方法透析法制备FA/PAMAM络合物,透射电子显微镜观察粒子形貌;以其为载体转染miR-7至人脑胶质瘤细胞系U251,荧光显微镜观察络合物转染效率,qRT-PCR方法检测miR-7水平;制作去胸腺小鼠颅内U251胶质瘤模型,分别经尾静脉、颈内动脉及肿瘤原位进行络合物移植,48 h后取脑制作冰冻切片,荧光显微镜观察络合物在肿瘤内的聚集程度;蛋白印记(Western blot)法检测miR-7靶基因EGFR和细胞增殖活性抗原(PCNA)的蛋白表达。结果粒子形貌规整,与U251细胞共培养48 h后可获得高效转染,并显著提高miR-7水平。经尾静脉、颈内动脉及肿瘤原位三种途径移植后获得的冰冻切片中均可发现络合物粒子在肿瘤部位的聚集,但聚集程度为尾静脉<颈内动脉<肿瘤原位。Western blot结果示EGFR和PCNA水平较对照组均有不同程度下降(P<0.05)。结论 FA/PAMAM能够高效投递miR-7基因至体内、外胶质瘤细胞,有望成为一种新的高效小分子靶向投递药物进行胶质瘤基因治疗。
- 刘振林李罡苏治国王骏飞赵玉军陈镭刘洪良姜忠敏刘晓智
- 关键词：胶质瘤微小RNA表皮生长因子受体
- 叶酸／聚酰胺-胺介导miR-7治疗小鼠胶质瘤被引量：14
- 2012年
- 目的探讨叶酸／聚酰胺-胺（FA／PAMAM）介导的微小RNA-7（miR-7）基因治疗体内胶质瘤的实际效果。方法以络合物FA／PAMAM为基因载体转染miR-7至人脑胶质瘤细胞系U251，荧光下观察转染效率，逆转录定量PCR（qRT-PCR）检测miR-7水平。制备去胸腺小鼠颅内U251胶质瘤模型，于成瘤后第3天在肿瘤原位实施络合物移植，M砒动态观察荷瘤小鼠颅内肿瘤体积及水肿变化，记录小鼠生存期。荷瘤小鼠瘤组织切片行原位凋亡检测，免疫组织化学法检测细胞增殖活性抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9的表达，Westernblot法检测表皮生长因子受体（ECFR）和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶2（AKT-2）的蛋白表达量。结果与脂质体转染比较，FA／PAMAM对miR-7具有更高的基因转染效率。M砌显示，FA/PAMAh量／miR-7组的肿瘤体积增长速度明显低于脂质体／mia-7组，小鼠生存期延长。对照组的细胞凋亡率为（5．3±0．9）％，脂质体／miR-7组的细胞凋亡率为（11．4±2．4）％，FA／PAMAM／miR-7组的细胞凋亡率为（17．7±3．7）％，FA／PAMAM／miR-7组的细胞凋亡率明显增加。免疫组化结果显示，PCNA、MMP-2和MMP-9在对照组中的阳性率分别为（57．3±7．4）％、（45．4±6．9）％和（55．1±7．3）％，在脂质体／miR-7组中分别为（49．3±5．9）％、（31．7±7．1）％和（39．4±6．4）％，在FA／PAMAM／miR-7组中分别为（34．6±5．4）％、（24．5s4．1）％和（25．4S5．1）％。EC,FR和AKT-2蛋白在对照组中的相对表达强度分别为1．09±0．12和0．62±0．10，在脂质体/miR-7组中分别为0．63±0．11和0．43s0．07，在FA／PMM／面R-7组中分别为0．47s0．09和O．31S0．04。FA／PAMAM／miR-7组中PCNA、MMP-2、MMP-9、EGFR和AKT-2蛋白的表达水平均有不同程度下降（均P〈0．05）。结论FA／PAMAM具有较脂质体更高的基因转染效率，药物作用时间�
- 刘晓智苏治国姜忠敏李罡宋军黄凯王亮陈镭刘振林
- 关键词：胶质瘤微小RNA表皮生长因子受体小鼠络合物
- miR-7沉默EGFR/PI3K通路逆转脑胶质瘤U251细胞的恶性表型被引量：11
- 2011年
- 目的:探讨利用微RNA(microRNA-7,miR-7)靶向沉默表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol kinase-3,PI3K)通路途径逆转脑胶质瘤的恶性表型。方法:利用脂质体转染法将带有miR-7基因序列的表达质粒转入人脑胶质瘤细胞株U251中;采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)方法检测转染细胞中miR-7的表达水平;免疫细胞化学法和蛋白质印迹法检测EGFR、PI3K和AKT2蛋白的表达情况;绘制细胞生长曲线,FCM法检测细胞周期变化,Transwell小室法检测瘤细胞迁移能力,软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞致瘤性。结果:RFQ-PCR结果显示,miR-7基因转染组细胞中miR-7水平明显高于对照组和无义序列组;蛋白质印迹法检测结果显示,转染组U251细胞中EGFR、PI3K和AKT2蛋白的水平较对照组均有明显降低(P<0.05);U251细胞增殖速度减慢,处于S期的细胞所占比例减少,细胞迁移及软琼脂克隆形成能力均有明显降低(P<0.05)。结论:转染miR-7可有效沉默胶质瘤U251细胞中EGFR/PI3K通路主要成员蛋白的表达,进而逆转其恶性表型,有望成为一种新的胶质瘤基因治疗方法。
- 刘晓智姜忠敏陈镭刘洪良史万超张合亮刘振林
- 关键词：神经胶质瘤U251细胞
- 不同物理密度介质诱导干细胞表达多种组织细胞标记蛋白被引量：3
- 2012年
- 干细胞凭借其多组织分化潜能，成为当前医学界包括血液科、神经科、心脏科、骨科、皮肤科等在内的多学科研究热点^[1-3]。我们在近期工作中偶然发现将干细胞移植到特定物理密度的材料表面时，干细胞有顺材质硬度分化的特性。
- 刘晓智刘振林姜忠敏陈镭苏治国王骏飞李罡
- 关键词：组织细胞标记蛋白干细胞移植介质分化潜能
- 温度敏感干细胞株的建立及其对脑外伤亚低温治疗的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的建立一种温度敏感型干细胞株，为脑外伤患者接受亚低温治疗期间实施干细胞原位移植打下基础。方法用含温度敏感性猿猴病毒40大T抗原（tsSV40IX）的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞（UCMSCs），PCR检测外源基因的整合，绘制细胞生长曲线，检测其致瘤潜能；脑组织行增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化及原位细胞凋亡检测，实验动物予以神经功能缺陷评分。结果基因片段被成功整合，该细胞株在33℃时增殖旺盛，可耐受极低的营养条件，并可在软琼脂中形成小的细胞克隆；37℃时停止生长，低营养耐受力下降，无细胞克隆形成；亚低温治疗期间脑组织高表达PCNA，凋亡少见。结论温度敏感型干细胞株的建立使脑外伤患者在接受亚低温治疗期间实施干细胞原位移植提供了条件。
- 刘振林刘晓智王骏飞姜忠敏陈镭李罡苏志国杨树源
- 关键词：颅脑损伤干细胞
- RNAi沉默AQP-4技术治疗胶质瘤性脑水肿的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的应用RNA干扰（RNAi）技术靶向沉默胶质瘤内水通道蛋白4（AQP-4）的表达，观察其对胶质瘤源性脑水肿的治疗效果。方法构建靶向AQP-4的siRNA质粒，免疫荧光化学方法检测其对C6细胞AQP-4的沉默效果；建立sD大鼠颅内c6胶质瘤模型，分对照组、空载组、无义序列组和siRNA组；聚合酶链式反应和蛋白印迹方法分别检测第3、6、9、12天AQP-4的mRNA和蛋白水平；干／湿比重法和Evans蓝测定法检测不同时相脑组织含水量和血脑屏障通透性改变；比较动物生存期。结果siRNA可沉默AQP-4表达；siRNA组脑组织水含量和血脑屏障通透性均明显低于对照组、空载组和无义序列组，动物生存期最长。结论靶向AQP-4的RNAi技术可在-定程度上减轻胶质瘤性脑水肿的发生和发展，为胶质瘤脑水肿提供了-种新的治疗策略选择。
- 梁冰刘晓智张赛苏治国陈镭姜忠敏于士柱刘振林
- 关键词：神经胶质瘤脑水肿水通道蛋白RNA干扰
