国家重点基础研究发展计划(G1999054101)
- 作品数：17 被引量：77H指数：6
- 相关作者：俞守义徐建国张冬梅胡静王红更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学中国疾病预防控制中心传染病预防控制所安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划安徽省高校省级自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 江苏省徐州市分离的大肠杆菌O157:H7菌株携带志贺毒素2型别的变化被引量：19
- 2003年
- 目的 研究我国分离的大肠杆菌O15 7:H7菌株的志贺毒素型别的变化。方法 使用针对志贺毒素 2及其变种的引物对进行PCR检测、细菌染色体DNA的PstI酶切后的Southern印迹实验和PCR产物的HaeⅢ、RasⅠ酶切分析 ,以及PCR产物克隆后的序列分析方法以及致病性大质粒的PstI酶切分析。结果 1999年分离自徐州市的人的 5株菌均携带slt1、slt2 ,而 2 0 0 0年从江苏省徐州市患者分离的 10株和蜣螂标本分离的 4株共计 14株大肠杆菌O15 7:H7菌株仅携带slt2vha毒素基因 ,其致病性质粒的限制性酶切图谱与 1999年的菌株相比也发生了改变。结论 鉴于江苏省徐州市1999年的分离的 5菌株全部携带slt1和slt2基因 ,结果提示该地的优势菌型发生了改变 ,可能当地大肠杆菌O15 7:H7感染的流行病学特点有关。针对slt2变异基因而设计的引物及其以此为基础进行的限制性片段长度多态性分析的方法对于研究O15 7:H7菌株的志贺毒素型别的变化能够满足特异性及灵敏性的要求。
- 郑翰逄波景怀琦杨晋川赵广法李洪卫徐建国
- 关键词：志贺毒素腹泻溶血尿毒症综合征
- 缺失耶尔森菌HPI irp6基因EAggEC的构建被引量：2
- 2003年
- 目的 构建小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6重组自杀质粒 ,并应用其构建EAggEC上该基因的缺失株。方法 根据已知小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛irp6基因序列 ,设计PCR引物 ,扩增并克隆了irp6结构基因 ,在体外进行精确突变后 ,插入氯霉素抗性基因。再将含氯霉素的irp6缺失基因亚克隆入自杀质粒 pKNG1 0 1中 ,构建成irp6基因重组自杀质粒 pKH6 ,并以肠粘附聚集性大肠杆菌EAggEC 1 7 2为出发菌株 ,通过体内同源重组 ,置换其irp6基因。结果 经接合转移和同源重组 ,利用蔗糖抗性筛选 ,pKH6上的同源序列有效的置换了EAggEC 1 7 2的irp6基因。结论 以小肠结肠炎耶尔森菌为靶构建的irp6基因重组自杀质粒成功的缺失了EAggEC 1 7 2的irp6基因 ,获得了携带耶尔森菌强毒力岛的EAggEC 1 7 2irp6基因缺失株EAG6 。
- 胡静俞守义阚飙刘志华
- 关键词：耶尔森菌
- 三种细菌HPI核心区ybtE基因核苷酸序列及推导氨基酸序列的比较研究被引量：2
- 2008年
- 目的比较三种肠聚集性大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌和鼠疫耶尔森菌HPI毒力岛核心区ybtE基因的同源性。方法PCR扩增肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)17-2ybtE基因的完整序列,克隆后测序。用ABIPRISM软件对该ybtE基因序列与已知的鼠疫耶尔森菌HPI的ybtE基因以及小肠结肠炎耶尔森菌HPI的irp5基因进行核苷酸序列和推导氨基酸序列比较。结果核苷酸序列,EAEC17-2与鼠疫耶尔森菌及小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性分别为99.8%和98.2%,鼠疫耶尔森菌与小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性为98.2%;推导氨基酸序列,EAEC17-2与鼠疫耶尔森菌及小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性分别为99.8%和97.6%,鼠疫耶尔森菌与小肠结肠炎耶尔森菌之间的同源性为97.8%。结论ybtE基因作为HPI的功能基因高度保守,EAEC中的HPI可能来源于YpsHPI。
- 张冬梅王斌
- 关键词：毒力
- HPI毒力岛缺失的EAggEC17-2突变菌株的构建及其功能研究
- 2005年
- 目的构建HPI毒力岛缺失的EAggEC172突变株,初步研究EAggEC菌株携带的耶尔森菌HPI毒力岛合成铁载体Ybt的功能。方法以EAggEC172为出发菌株,irp8基因部分序列作为同源重组的一侧序列,irp5基因序列作为同源重组的另一侧序列,中间插入有氯霉素(Cm)抗性基因(cat基因)标记。通过接合转移和同源重组,构建了缺失约24kb的HPI毒力岛功能核心区区域EAggEC172的全岛缺失株EA85。应用流式细胞技术(FACS)检测指示菌株WACSirp1::KN(pCJG3.3N)荧光强度的变化情况,对EA85缺失株和出发菌株进行了合成Ybt的功能比较研究。结果成功构建了EAggEC172HPI全岛缺失株EA85。EAggEC172菌株具有表达Ybt的功能,而缺失株EA85丧失了合成Ybt的能力。结论EAggEC172HPI毒力岛的缺失,使Ybt的合成彻底阻断。EAggEC172具有的合成Ybt的功能是由其染色体携带的HPI毒力岛所决定的。
- 胡静俞守义阚飙刘志华
- 关键词：突变菌株基因序列同源重组流式细胞技术
- 肠聚集性大肠杆菌ybtE基因缺失突变株的构建被引量：2
- 2007年
- 目的构建肠聚集性大肠杆菌ybtE缺失突变株,为下一步ybtE基因功能的研究奠定基础。方法应用PCR扩增肠聚集性大肠杆菌的ybtE基因,将其克隆至pUC18载体,酶切缺失988bp ybtE片段,并插入998bp的卡那霉素抗性基因,利用定向克隆技术将突变的ybtE片段克隆至自杀质粒pKTN701,形成重组自杀质粒。将携带重组自杀质粒的SM10λpir与EAEC17-2进行接合转移,利用同源重组,根据卡那霉素抗性筛选并鉴定接合子。结果经PCR、酶切和探针杂交鉴定,得到2株肠聚集性大肠杆菌ybtE缺失突变株。结论成功构建肠聚集性大肠杆菌ybtE基因缺失突变株。
- 张冬梅胡静俞守义
- 关键词：基因突变
- 产毒性和致病性大肠埃希菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛分布的研究被引量：9
- 2003年
- 目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性 (ETEC)和致病性大肠埃希菌(EPEC)中的分布。方法 用聚合酶链反应扩增和原位杂交方法。结果 在检测的 93株ETEC和 10株EPEC的毒力岛的检出率分别为 3 2 .2 5 % ( 3 2 93 )和 3 0 .0 0 % ( 3 10 ) ,1株肠聚集性大肠埃希菌(EAggEC)也检出了毒力岛 ,而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA(asntRNA)位点。结论 ETEC、EPEC以及EAggEC是致病性较强的病原菌 ,而小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在ETEC和EPEC中具有阳性率较高的分布 。
- 王勇王红向前孙素霞俞守义
- 关键词：产毒性大肠埃希菌小肠结肠炎耶尔森菌
- 志贺菌福氏2a301菌株torA基因改变的研究被引量：2
- 2005年
- 目的 探讨志贺菌福氏 2a30 1菌株torA基因的改变以及与TorA(trimethylamineN oxideTMAOreductase ,三甲胺N 氧化物还原酶 )转运相关的TAT分泌系统的存在。方法 利用酶活性检测和Westernblot方法来验证志贺菌福氏 2a30 1测序菌株torA基因发生的碱基置换 ,并且利用正常大肠杆菌中torA基因的克隆转化来研究TAT分泌系统的存在。结果 实验表明志贺菌福氏2a30 1菌株不具有TorA酶活性 ,不表达TorA蛋白 ,和序列分析的结果相符 ;但是 ,将torA基因克隆子转化入 30 1菌株后 ,转化子获得了TorA酶活性 ,表达了TorA蛋白。结论 在志贺菌福氏 2a30 1菌株中torA基因发生了改变 ,但具有完整的TAT分泌途径 ,可以转运蛋白。
- 张晶波叶长芸李新军白雪梅吴龙飞徐建国
- 关键词：志贺菌基因改变N-氧化物酶活性检测分泌途径
- 产毒性和致病性大肠杆菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛的检测被引量：4
- 2002年
- 目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中的分布,探讨毒力岛在大肠杆菌中的结构和功能。方法 对毒力岛的关键基因irp2、fyua和asn-intB进行PCR扩增和DNA测序,并对irp2和fyua进行原位杂交。结果 在检测的93株肠产毒性大肠杆菌和10株肠致病性大肠杆菌基因irp2的检出率分别为32.25％（30/93）和30％（3/10）,fyua的阳性率为21.51％（20/93）和30％（3/10）,而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA（asn tRNA）位点。结论 小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性和致病性大肠杆菌中较高的阳性率,对于大肠杆菌毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化可能具有重要意义。
- 王勇王红向前孙素霞俞守义
- 关键词：大肠杆菌小肠结肠炎原位杂交
- 我国腹泻病患者和家畜家禽粪便标本中携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的调查被引量：10
- 2000年
- 目的 了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征。方法 使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法。结果 在各地送检的从腹泻病患者粪便标本中分离到的、用常规方法不能鉴定的大肠杆菌中 ,均检出带有小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌菌株 ,检出率为 2 7.0 5 % (436 / 16 12 )。从市售食品标本中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的检出率为 10 .2 3% (9/ 88)。从家畜家禽粪便中分离的大肠杆菌中 ,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌检出率为 5 .71% (16 / 2 80 )。携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌所致腹泻的典型临床表现为食欲不振、腹痛、寒战乏力、正常体温或低热、每日腹泻多在 6次以上、多为粘液便。结论 携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国分布广泛 ,检出率高于其他几类致泻性大肠杆菌 。
- 程伯鲲崔树玉温宪芹姜桂香李连青刘巧突赵斌秀叶长芸徐建国
- 关键词：大肠杆菌耶尔森氏菌腹泻HPI
- 耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体的构建被引量：2
- 2005年
- 目的构建耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体,为进一步构建HPI全岛缺失株打下基础。方法根据已知小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因序列设计PCR引物,扩增并克隆irp8结构基因,作为同源重组的一侧序列,以irp5的部分序列作为同源重组的一侧序列,并将之克隆入同一载体,中间插入有卡那霉素(Km)基因(kan)抗性标记。以自杀质粒pCVD442为载体,构建了含有irp8基因和irp5部分序列的缺失突变载体pCO85。结果构建的突变载体经酶切及PCR鉴定克隆片段大小与预期一致。结论成功构建了致耶尔森菌HPI毒力岛全岛缺失突变载体,这个以小肠结肠炎耶尔森菌为靶序列构建的重组自杀质粒可应用于肠杆菌科及其他菌属HPI毒力岛全岛缺失株的构建。
- 胡静俞守义阚飙刘志华
- 关键词：耶尔森菌
