深圳市科技计划项目(200801010)
- 作品数：15 被引量：41H指数：3
- 相关作者：刘建军蒋英芝杨细飞周丽刘威更多>>
- 相关机构：深圳市疾病预防控制中心湖南师范大学华南理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目湖南省研究生创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术筛选人血清蛋白标志的研究进展被引量：2
- 2012年
- 随着质谱技术的发展,它在分子诊断学和卫生学领域中起着越来越重要的作用。基质辅助激光解离电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术是一种快速、简便易行和高通量的蛋白质组学研究方法,在卫生研究尤其是临床研究中具有广阔的应用前景。该文介绍了MALDI-TOF-MS技术的原理及其优缺点,并对其与蛋白质组学各种技术的联合应用在筛选人血清蛋白标志方面的研究进展进行综述,同时对MALDI-TOF-MS技术的发展、完善以及将来的应用前景提出了可能的方向。
- 刘威刘建军
- 关键词：血清分子诊断学蛋白质组学
- 三氯乙烯对L-02肝细胞活力及SET蛋白表达的影响被引量：1
- 2012年
- 三氯乙烯（Trichloroethylene,TCE）是工业上广泛应用的一种有机溶剂,主要通过呼吸道和皮肤进入人体产生职业性危害,吸收后主要蓄积于肝脏、脑、心脏等器官。
- 李杰王晓梅刘建军杨细飞杨亮
- 关键词：三氯乙烯MTT法蛋白印迹
- 带组氨酸标签的癌蛋白SET真核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2009年
- 目的为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建了癌蛋白SET和His标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)/SET-His。方法从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增SET-His基因并进行双酶切,序列纯化后定向克隆至pcDNA3.1/zeo(+)载体,阳性克隆载体进行双酶切和测序鉴定,阳性克隆载体瞬时转染入L-02肝细胞,利用Western blotting检测SET-His融合蛋白的表达。结果利用RT-PCR从L-02细胞总RNA中成功克隆出SET基因,经双酶切和测序鉴定证实pcDNA3.1(+)/SET-His真核表达载体构建成功。经Western blotting验证表明,SET-His融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。结论该结果为研究SET蛋白相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机理奠定了基础。
- 陈谋通刘建军杨汝德何浩伟蒋英芝贺连华
- 关键词：三氯乙烯组氨酸标签
- 毒理蛋白质组学与人类健康危险度评价
- 2010年
- 人类生存环境中存在多种有毒物质，很多相互作用的因素都能对某种环境暴露下的人体健康造成影响。多数毒性反应都涉及到DNA、RNA、蛋白质、代谢产物及它们之间复杂的相互作用。为进行人类健康危险度评价，我们必须了解毒物毒性作用机制及作用方式。这就要求我们不仅要从基因表达水平（转录组学）、蛋白质水平（蛋白质组学）和代谢产物水平（代谢组学）进行研究，而且还要将零散的数据进行整合，并能够完整地阐述毒性作用的网络通路和关键机制。
- 刘建军庄志雄
- 关键词：危险度评价毒性作用机制基因表达水平环境暴露相互作用代谢产物
- 三氯乙烯药疹样皮炎差异血清蛋白的筛选及鉴定
- 2010年
- 目的 筛选并鉴定三氯乙烯（trichloroethylene,TCE）暴露者、TCE药疹样皮炎急性期及恢复期差异血清蛋白.方法 收集TCE暴露者血清（Ⅰ组）、TCE药疹样皮炎急性期患者血清（Ⅱ组）和TCE药疹样皮炎恢复期患者血清（Ⅲ组）各5份,各组血清样本等量混合,去除白蛋白、IgG等高丰度蛋白后经除盐处理并定量.采用双向凝胶电泳技术对上述3组混合血清分别进行蛋白分离,银染后扫描成像,用ImageMaster Platinum 2D 5.0软件进行分析,筛选差异蛋白,并应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行鉴定.结果 经去除高丰度蛋白和除盐处理后获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,处理后血清蛋白检出量增至（300±12）个.经MALDI-TOF-MS鉴定得到5个差异蛋白,分别为：补体4b、载脂蛋白A-Ⅰ、载脂蛋白C-Ⅲ、载脂蛋白C-Ⅱ和转甲状腺素蛋白.补体4bⅢ组相对Ⅰ组表达量为1.352 88,表达上调.Ⅱ组相对Ⅰ组血清中载脂蛋白C-Ⅱ相对表达量为1.512 14,表达上调;载脂蛋白A-Ⅰ、载脂蛋白C-Ⅲ和转甲状腺素蛋白相对表达量分别为-1.601 17、-1.034 49、-1.313 35,表达有所下调.结论 筛选的差异蛋白功能与机体免疫及肝功能异常有关,为阐明TCE致TCE药疹样皮炎作用机制及筛选相关生物标志物提供了重要信息.
- 刘建军邢秀梅黄海燕袁建辉徐新云周丽杨细飞方道奎
- 关键词：三氯乙烯血清电泳凝胶光谱分析
- 三氯乙烯药疹样皮炎患者肝功能动态变化被引量：3
- 2011年
- 目的 观察职业性三氯乙烯（trichloroethylene，TCE）药疹样皮炎患者血清肝功能指标动态变化，为TCE药疹样皮炎肝损害的治疗提供依据。方法收集10例职业性TCE药疹样皮炎并发肝损害患者不同时间点血清，采用全自动生化分析仪测定血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）、丙氨酸转氨酶（AIJT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、谷氨酰转移酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）、AST／A¨比值、白蛋白朦蛋白比值（A／G）等11项指标，分析各指标动态变化。结果10例TCE药疹样皮炎患者11项肝功能指标变化范围是TP：43．2～74．2g／L，ALB：24．6～44．6g／L，A／G：0.77～2.10，TBIL：3.7～268．2μmol／L，DBIL：1．0～166．0μmol／L，IBIL：2.4～167．5μmol／L，ALT：11～5985U／L，AST：14-5586U／L，GGT：15～1500U／L，ALP：35～309U／L，S／L：0．07～1．94。TBIL、DBIL、AⅡ、AST、GGT、ALP浓度明显升高，尤以ALT、AST、GGT变化最明显；AIJrr最高达5985U／L，AST最高达5586U／L，GGT最高达1500U／L。TP、ALB、S／L明显降低，TP最低降到43．2g／L，S／L最低至0．07。A／G基本保持不变，IBIL变化不规律。结论TCE药疹样皮炎患者早期肝损害严重，病情易反复发作。
- 刘威张艳芳张志敏李培茂姜晓东周桂凤刘建军
- 关键词：三氯乙烯肝功能试验胆红素皮炎
- 稳定干扰SET肝细胞株的生物学鉴定
- 2012年
- 目的:对稳定干扰SET(patient SE translocation)的肝细胞株进行生物学性状鉴定,为研究SET蛋白在肝细胞中的作用奠定基础。方法:培养人肝L-02细胞、慢病毒载体介导的稳定干扰(siRNA)SET L-02肝细胞及psiRNAc L-02肝细胞(空载体转染细胞),于倒置显微镜下观察细胞形态,利用MTT吸光度与细胞数目间关系绘制生长曲线,采用染色体畸变试验观察染色体有无结构异常,软琼脂克隆实验检测细胞的恶性转化。结果:与正常肝细胞比较,稳定干扰SET肝细胞及psiRNAc肝细胞的生长形态无明显变化,3组细胞的生长曲线趋于一致。染色体畸变分析表明SET基因沉默的人肝L-02细胞染色体结构与数目未发生明显改变。软琼脂克隆实验表明SET基因沉默的人肝L-02细胞未发生恶性转化。结论:SET siRNA的导入未引起细胞生物学特征的改变,遗传性状保持稳定,说明所构建的SE7基因沉默的人肝L-02细胞模型是稳定的,为后续的研究提供了工具细胞。
- 周丽李杰黄遂杨细飞刘建军
- 关键词：三氯乙烯生物学性状细胞增殖
- 14例三氯乙烯药疹样皮炎患者肝损害病例分析被引量：4
- 2011年
- 目的分析三氯乙烯(TCE)药疹样皮炎患者肝功能损害的临床资料,为临床治疗提供依据。方法对病例组14名TCE药疹样皮炎患者肝功能指标进行分析,并与接触对照组16名接触TCE但未发病者和健康对照组15名健康者进行比较。结果病例组血清中的直接胆红素(DBIL)44.2(7.6～166.0)μmol/L、丙氨酸转氨酶(ALT)681.5(169.0～1 815.0)U/L和天冬氨酸转氨酶(AST)191.5(48.0～1 690.0)U/L均明显升高,而白蛋白(ALB)下降明显,为30.3(26.6～33.8)g/L,上述指标与健康对照组和接触对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);接触对照组DBIL、ALT、AST与ALB水平与健康对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05) TCE药疹样皮炎患者肝脏损害严重,应加强防范。
- 张艳芳刘威刘建军汤海燕张志敏李培茂
- 关键词：三氯乙烯药疹样皮炎肝损害
- 蛋白质功能研究方法及技术被引量：21
- 2009年
- 随着后基因时代的到来,蛋白质功能研究已经成为蛋白质组学研究的核心内容,是生物科学极具挑战的领域之一。近年来虽已有大量文章涉及某些蛋白质功能方面的研究,但对蛋白质功能研究方法方面进行系统综述的文章非常少,因此,从差异蛋白的筛选鉴定、蛋白质相互作用、蛋白质亚细胞定位、蛋白质表达改变的分子遗传学手段(如RNAi)、生物信息学等方面对目前蛋白质功能研究方法和技术及其最新研究进展进行综述,研究者可根据不同的蛋白和实验需要选择适宜的方法。
- 蒋英芝贺连华刘建军
- 关键词：蛋白质功能蛋白质组学亚细胞定位蛋白质相互作用RNA干扰
- 人SET基因RNA干扰重组质粒载体的构建及其在肝细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的建立真核质粒载体介导的人SET基因RNA干扰表达体系,并检测其在肝细胞中对SET蛋白表达的影响,为研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性的作用打下基础。方法设计并合成2对人SET基因特异性短发夹RNA(short hair-pin RNA,shRNA)寡核苷酸链,退火形成双链DNA后插入到真核表达质粒psiRNA-hH1 neo中产生shRNA重组质粒载体,经酶切和测序鉴定成功后,转染至L-02肝细胞中,48h后收集细胞提取总蛋白,Western blotting检测干扰后SET蛋白的表达。结果 shRNA重组质粒的酶切和测序鉴定均正确,Western blotting结果显示重组质粒psiRNA1组的干扰效果较好,对SET蛋白表达的抑制率达60%左右,与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建针对人SET基因的RNA干扰真核质粒载体,其能有效地抑制肝细胞内SET蛋白的表达,为深入研究SET蛋白在三氯乙烯致肝细胞毒性中的作用奠定了基础。
- 黄新凤刘建军蒋英芝席仁荣杨亮
- 关键词：RNA干扰WESTERNBLOTTING
