国家自然科学基金(81200555)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
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- 高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响被引量：5
- 2017年
- 目的:观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株第5~10代[HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%(体积分数)胎牛血清],观察1.5%、2.5%、4.25%(质量分数)葡萄糖腹膜透析液(dextrose)及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮(rotenone),线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮(thenoyltrifluoroacetone,TTFA),线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A(antimycin A)对细胞IL-1β表达的影响(免疫印迹);通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇(resveratrol,RSV)诱导自噬,3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、自噬相关蛋白5(autophagy related gene 5,ATG5)siRNA、自噬相关蛋白(Beclin1)siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS),免疫印迹分析IL-1β的表达。结果:对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮(10μmol/L)、抗霉素A(50 mg/L)、噻吩甲酰三氟丙酮(10μmol/L)各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA(negative control,NC siRNA)、RSV(50μmol/L,诱导自噬)、3-MA(10 mmol/L,抑制自噬)、ATG5 siRNA(抑制自噬)、Beclin1 siRNA(抑制自噬)各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论:长期应用高糖腹膜透析液,
- 李相友伍军罗丹陈晚先朱戈丽张艳霞毕智敏封宝红
- 关键词：人腹膜间皮细胞NLRP3IL-1Β
- 腹膜透析液对腹膜间皮细胞TLR2和TLR4表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的观察不同浓度葡萄糖（dextrose）腹膜透析液、艾考糊精（ieodextrin）腹膜透析液对人腹膜问皮细胞Toll样受体2（TLR2）和TLR4表达的影响。方法体外培养人腹膜闯皮细胞株第5～10代（HMrSV5，DMEM／F：Z培养基含10％胎牛血清）用于实验研究。MTT检测细胞活力，实验分为5组：阴性对照组、1．50％dextrose组、2．50％dextrose组、4．25％dextrose组、7．5％icodextrin组，应用蛋白免疫印迹法（westernblot）检测TLR2和TLR4的表达水平。结果不同浓度dextrose腹膜透析液作用24h对腹膜间皮细胞TLR2和TLR4的表达无明显影响。作用48h，1．50％dextrose组、2．50％dextrose组、4．25％dextrose组TLR2分别降低（5．5±2．8）％、（31．4±7．5）％、（54．9±1.9）％，TLR4分别降低（32．9±17．6）％、（47.7±13．5）％、（66．4±13．5）％；作用72h，1．50％dextrose组、2．50％dextrose组、4．25％dextrose组TLR2表达分别降低（29．4±14．7）％、（38．9±9．9）％、（63．5±16．5）％，TLR4表达分别降低（59．5±16．8）％、（63．1±9．5）％、（79．2±14．0）％；7．5％icodextrin组TLR2和TLR4表达与阴性对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论dextrose透析液下调HMrSV5 TLR2和TLR4的表达；icodextrin透析液对TLR2和TLR4的表达无显著影响。
- 伍军何敏张健何文飞程兵
- 关键词：腹膜透析人腹膜间皮细胞TOLL样受体2TOLL样受体4
- 葡萄糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞线粒体活性氧的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察不同浓度葡萄糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞线粒体活性氧(ROS)的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞株第5至10代(HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%胎牛血清)用于实验研究。MTT检测细胞活力,实验分为7组:对照组、1.5%Dextrose组、2.5%Dextrose组、4.25%Dextrose组、线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂Rotenone组(5μM)、线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂Thenoyltrifluoroacetone(TTFA)组(5μM)、线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂Antimycin A组(100μg/ml),应用流式细胞仪检测总线粒体、呼吸线粒体、超氧化线粒体。结果各组作用12h,1.5%Dextrose、2.5%Dextrose、4.25%Dextrose、Rotenone、Antimycin A组总线粒体、超氧化线粒体明显增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),TTFA组与对照组比较无明显差异。结论葡萄糖腹膜透析液作用下人腹膜间皮细胞线粒体活性氧产生增加。
- 伍军何敏张健何文飞程兵朱戈丽张艳霞
- 关键词：人腹膜间皮细胞
- NLRP3基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及miR-22-3p靶向调控被引量：3
- 2018年
- 目的构建核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NACHT,LRR and PYD domains-containing protein 3,NLRP3)基因3'非编码区(untranslated region,UTR)野生型及突变型双荧光素酶报告质粒载体,分析微小RNA(miR)-22-3p对NLRP3的调控作用。方法应用生物信息软件预测miR-22-3p与NLRP3基因的结合位点;将NLRP3基因的3'UTR序列及其突变体克隆到双荧光素酶报告基因载体psi CHECK2中,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒载体,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及基因测序方法鉴定载体是否构建成功;将培养的人胚肾293T细胞(HEK293T)分为4组:(1) miR-22-3p对照+psi CHECK2;(2) miR-22-3p对照+psi CHECK2-NLRP3-3'UTR(野生型);(3) miR-22-3p模拟物(mimic)+psi CHECK2-NLRP3-3'UTR(野生型);(4) miR-22-3p模拟物(mimic)+psi CHECK2-NLRP3-3'UTR^(mut)(突变型),分别检测细胞荧光素酶活性。结果成功构建了NLRP3基因3'UTR野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒载体; NLRP3-3'UTR野生型与miR-22-3p mimic共转染293T细胞后,荧光素酶活性降低,下降43%,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论成功构建NLRP3基因3'UTR双荧光素酶报告质粒载体并初步验证miR-22-3p对NLRP3的调控作用。
- 伍军李相友朱戈丽张艳霞毕智敏
- 关键词：NLRP3
- 白藜芦醇对腹膜透析液作用下人腹膜间皮细胞线粒体活性氧产生的影响
- 2013年
- 目的白藜芦醇对腹膜透析液作用下人腹膜间皮细胞线粒体活性氧产生的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代（HMrSV5，DMEM／F12培养基含10％胎牛血清）用于实验研究。MTT检测细胞活力。实验分组：阴性对照组（培养基）、阳性对照组（加入Rotenone，细胞线粒体呼吸链酶复合体I抑制剂）、实验组（1．5％葡萄糖腹膜透析液）、丁预组（白藜芦醇＋1．5％葡萄糖腹膜透析液）。流式细胞仪检测总线粒体、呼吸性线粒体、产活性氧线粒体。结果与阴性对照组比较，实验组总线粒体、产活性氧线粒体增加，差异具有统计学意义。与实验组比较，干预组总线粒体、产活性氧线粒体减少，差异具有统计学意义。结论白藜芦醇可降低含葡萄糖腹膜透析液作用人腹膜间皮细胞后活性氧的产生。
- 伍军何敏邓行江何文飞程兵
- 关键词：白藜芦醇人腹膜间皮细胞活性氧
