国家自然科学基金(30120160823)
- 作品数：29 被引量：148H指数：6
- 相关作者：钱其军苏长青刘新垣崔贞福薛惠斌更多>>
- 相关机构：第二军医大学中国科学院上海生命科学研究院中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒介导人血管抑素抑制乳腺癌生长的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :研究腺病毒介导的重组人血管抑素PlasminogenK5基因对乳腺癌的治疗作用。方法 :通过PCR将人血纤维蛋白酶原的信号肽基因加至Plasminogen的K5结构域基因 ,克隆到质粒pCA13,并在 2 93细胞中同源重组 ,得到腺病毒Ad K5。将Ad K5体外感染乳腺癌细胞B Cap 37和血管内皮细胞ECV30 4 ,观察其对细胞生长的影响 ,同时在乳腺癌的裸鼠动物模型上 ,检测其对肿瘤生长的抑制作用。结果 :在感染Ad K5的B Cap 37细胞中检测到K5基因mRNA的表达。Ad K5对血管内皮细胞ECV30 4有抑制作用 ,但对癌细胞B Cap 37没有直接抑制作用。动物实验表明Ad K5能显著抑制肿瘤的生长。结论 :K5基因能抑制乳腺癌实体瘤的生长。
- 罗春霞邹卫国邱松波马建岗刘新垣
- 关键词：腺病毒PLASMINOGENK5基因治疗乳腺癌
- E1B55kDa缺失的增殖腺病毒抗肿瘤效果差异及其分子机制
- 2007年
- 目的:观察E1B55kDa缺失的增殖腺病毒CNHK200和CNHK200-hA对A549肺癌和MBD-231乳腺癌动物模型的抗肿瘤效果,结合研究肿瘤细胞柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的表达状态,分析腺病毒抗肿瘤效果的差别及其分子机制。方法:建立A549肺癌和MBD-231乳腺癌裸鼠模型,给予病毒总剂量1×109pfu的CNHK200和CNHK200-hA治疗。观察期结束,取肿瘤标本进行柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和腺病毒壳蛋白Hexon的免疫组化定位。结果:在CAR水平高表达的A549细胞内,CNHK200-hA和CNHK200均可以有效增殖并杀伤肿瘤细胞,产生明显的疗效。相反,在CAR水平低下的MBD-231细胞内,CNHK200-hA和CNHK200没有增殖复制能力,CNHK200几乎没有任何治疗效果,CNHK200-hA的治疗效果仅由Angiostatin基因表达所产生。结论:CAR在E1B55kDa缺失的增殖腺病毒的感染和增殖过程中起着至关重要的作用,肿瘤细胞CAR表达低下可以影响腺病毒载体的感染力和增殖力,从而降低用腺病毒进行肿瘤基因治疗的疗效。
- 王伟国苏长青马炬明施建国胡慧珍李林芳姜梨华钱其军
- 关键词：增殖腺病毒肿瘤模型基因治疗
- 构建重组腺病毒的新策略
- 2005年
- 重组腺病毒作为基因载体具有很多优越性,因此极大地引发了人们的研究兴趣.构建第一代和第二代腺病毒的方法各式各样,大体上可分为两类:一类是DNA直接在哺乳动物细胞内进行重组,另一类是先在细菌中构建好病毒DNA再转染哺乳动物细胞.而第三代腺病毒因缺失了大部分的病毒基因,构建时需要辅助病毒.几年前,腺病毒的构建还是一项耗时费力的工作,现在已经有了许多优化构建过程的新策略。
- 唐云霞顾锦法蒋琳兰
- 关键词：重组腺病毒基因载体病毒基因
- EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立
- 2004年
- 目的:建立表达Epstein-Barr(EB)病毒核抗原-1(EBNA1)的肿瘤细胞株,用于EB病毒相关肿瘤的研究。方法:将1 200 bp的EBNA1基因片段插入真核细胞表达载体pcDNA3中,使用脂质体介导pcDNA3/EBNA1质粒进入人鼻咽癌CNE2细胞和人宫颈癌Hela细胞,通过G418进行阳性克隆的筛选,PCR、RT-PCR进行鉴定。结果:成功建立EBNA1基因阳性的鼻咽癌和宫颈癌肿瘤细胞株,经PCR、RT-PCR检测证明两种转基因细胞株稳定表达EBNA1。结论:EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立,为体外进行EB病毒相关肿瘤的研究提供细胞模型。
- 张丽娅廖志勇车小燕温坤潘玉先
- 关键词：EBNA1肿瘤细胞株EB病毒
- 细菌内同源重组构建含人内皮抑素基因腺病毒及在胃癌细胞中的体外转染实验
- 2003年
- 目的 :采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad -CMV -hEn。方法 :将hEn基因自 pCA13-hEn质粒中酶切下来 ,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒 pAdtrack -CMV -hEn ,并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒 pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA ,PacⅠ酶切后在 2 93细胞中包装成腺病毒颗粒。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,同时测定了病毒滴度。并采用RT -PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEnmRNA的转录。结果 :由 pAdtrack -CMV -hEn和pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5 183后 ,可得到阳性重组体细菌克隆 ,包装完成的腺病毒经PCR检测表明已含有hEn基因。纯化所得腺病毒滴度约为 2 .4× 10 11pfu /ml。RT -PCR证实在感染重组体腺病毒Ad .CMV -hEN的细胞中有相应mRNA的转录。结论 :细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。所构建的Ad -CMV -hEn在体外能有效转录相应的mRNA。
- 阴忆青齐荣邹卫国秦新裕刘新垣
- 关键词：腺病毒载体内皮抑素胃癌基因治疗
- 靶向端粒酶的肿瘤基因治疗新策略被引量：1
- 2002年
- 端粒酶在 85 %以上的各类恶性肿瘤中激活并维持细胞的无限增殖能力 ,是目前发现的恶性肿瘤细胞区别于正常细胞最广谱的分子标记 ,具备了作为肿瘤靶向基因治疗的物质基础。因此 ,端粒酶已成为肿瘤基因治疗的理想靶点 。
- 苏长青钱其军等
- 关键词：端粒酶基因治疗肿瘤治疗靶点
- 腺病毒介导的全抗体基因治疗卵巢癌的实验研究被引量：19
- 2004年
- 目的 探讨应用基因治疗方法表达完全抗体的可行性及其对肿瘤的治疗作用。方法构建携带曲妥珠单抗 [Trastuzumab ,商品名 :赫赛汀 (Herceptin) ]全抗体基因的腺病毒载体 ,利用重组技术获得增殖缺陷型腺病毒Ad SG Her ,用Ad SG Her转染人正常肝细胞株L 0 2 ,判断体外肝细胞是否可以表达Herceptin抗体 ;将卵巢癌SK OV 3细胞接种于裸鼠皮下 ,3d后把 4 0只成瘤裸鼠随机分为3个治疗组和 1个对照组 ,每组各 10只。治疗组裸鼠尾静脉分别注射不同滴度的Ad SG Her :治疗A组注射 2× 10 9空斑形成单位 ( pfu) /只 ,B组注射 1× 10 9pfu/只 ,C组注射 5× 10 8pfu/只。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别在体外转染Ad SG Her后的第 3天和第 7天 ,以及裸鼠接受Ad SG Her治疗后的第 3、7、10、14、2 1、2 8、35天检测Herceptin的表达量 ;通过间接免疫荧光法 (IFA)和Western印迹法分别检测血清中的抗体与Her2过表达卵巢癌细胞株SK OV 3结合的特异性以及所表达全长抗体的完整性 ;同时观察不同滴度的Ad SG Her对荷SK OV 3实体瘤裸鼠的治疗作用。结果 构建的带有全长Herceptin基因的重组腺病毒Ad SG Her ,在体外及体内均能高效表达人源化抗体Herceptin。Western印迹显示
- 郭明高姜明红杨琴李月敏崔贞福李林芳吴孟超钱其军
- 关键词：介导作用基因治疗卵巢癌HERCEPTIN赫赛汀
- 腺病毒CNHK200-hEndostatin质量控制方法的研究被引量：3
- 2007年
- 目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法。方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、野生型腺病毒(AdWT)检测、残余宿主DNA含量检测和牛血清蛋白残余量检测等腺病毒质量控制项目的方法,并对纯化的腺病毒样品进行初步检测。结果:建立用SDS-PAGE方法对腺病毒进行蛋白鉴定,用限制性内切酶图谱分析的方法对腺病毒进行基因组鉴定,用PCR方法鉴定人内皮抑素基因,用ELISA方法检测人内皮抑素表达量,用D260法和HPLC方法进行腺病毒颗粒数测定,用D260/D280方法和HPLC方法进行纯度检测,用PCR方法进行野生型腺病毒检测,用杂交方法进行残余宿主DNA含量检测,用反向间接血凝实验测定牛血清蛋白残余量。结果表明建立的方法可有效应用于腺病毒样品检测,并且我们制备的纯化腺病毒样品均符合要求。结论:基本建立了腺病毒CNHK200-hEndostatin的质量控制方法,改良的应用HPLC对腺病毒颗粒数进行定量检测的方法准确迅速,优于传统方法。应用建立的方法对纯化的腺病毒样品进行检测,基本符合临床应用要求。
- 薛惠斌施军霞朱文川陈敏钱其军
- 关键词：腺病毒科内皮抑素类基因疗法
- 腺病毒介导的小鼠内皮抑素治疗胃癌的研究
- 2004年
- 目的:研究腺病毒介导的鼠内皮抑素基因对胃癌的治疗作用。方法:利用病毒重组技术将内皮抑素克隆人增殖缺陷型腺病毒基因组中,观察体外转染表达后的生物学活性。通过建立荷人胃癌的裸鼠动物模型,分析基因转导后动物肿瘤细胞中内皮抑素的表达情况及对肿瘤的抑制作用。结果:构建了表达内皮抑素的重组腺病毒载体pcA13-mEndo;检测到内皮抑素在体外的mRNA水平和蛋白质水平均有表达;鸡胚绒毛尿囊膜实验表明其对血管生长起抑制作用;荷瘤裸鼠体内肿瘤生长抑制明显。结论:所构建的pcA13-mEndo重组腺病毒载体可有效表达具有生物学活性的内皮抑素,使得肿瘤内微血管生成减少,肿瘤细胞增殖减慢,为抗血管生成方法治疗实体瘤的临床应用奠定基础。
- 姜明红聂明明方国恩崔贞福吴红平李琳芳吴孟超钱其军
- 关键词：内皮抑素血管生成抑制剂腺病毒胃癌
- 腺病毒载体携带人TRAIL基因治疗H446小细胞肺癌的体外实验研究被引量：11
- 2007年
- 目的评价携带人TRAIL基因的腺病毒载体对人小细胞肺癌细胞株H446的基因治疗功效。方法构建的携带人TRAIL基因的腺病毒Ad-hTRAIL,感染人小细胞肺癌细胞株H446以及人正常肝细胞株WRL-68,人正常成纤维细胞株MRC-5,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肿瘤细胞的效能,流式细胞术(FCM)检测Ad-hTRAIL对细胞早期凋亡的影响,并进行RT-PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL mRNA和TRAIL蛋白的表达量。结果携带人TRAIL基因的增殖缺陷型腺病毒Ad-hTRAIL对H446细胞的感染效率较高;感染72h后H446、WRL-68、MRC-5细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为32.02、17.08、16.89μg.L-1,在MOI=1.0时,Ad-hTRAIL即可引起H446细胞明显凋亡;而在MOI=100时对正常细胞WRL-68、MRC-5也没有明显杀伤作用。结论Ad-hTRAIL能够强烈诱导小细胞肺癌细胞H446凋亡而对正常肝细胞及成纤维细胞无明显抑制作用,Ad-hTRAIL在小细胞肺癌的基因治疗方面有潜在的应用前景。
- 刘永靖陈飞虎于奇韩继彪苏长青钱其军
- 关键词：小细胞肺癌基因治疗腺病毒TRAIL
