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“九五”国家科技攻关计划(96-901-01-54): 作品数：15 被引量：154H指数：5; 相关作者：邹全明曾浩张卫军毛旭虎郭刚更多>>; 相关机构：第三军医大学重庆医科大学更多>>; 发文基金：“九五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

重组幽门螺杆菌热休克蛋白A的纯化研究: 2005年; 目的对重组幽门螺杆菌热休克蛋白A大肠杆菌工程菌表达的rHspA蛋白进行纯化研究。方法酵后的重组大肠杆菌进行高压破菌后,采用镍离子亲和柱层析和凝胶过滤柱层析相结合的方法分离纯化rHspA,使用SDS-PAGE和HPLC鉴定蛋白纯度,注射免疫家兔检测纯化后的rHspA的免疫学活性。结果所纯化获得的rHspA蛋白纯度>98%,总回收率为60%,并且保持了良好的免疫学活性。结论建立了从重组大肠杆菌中纯化高纯度rHspA的工艺,为Hp疫苗的进一步研究提供了材料。; 郭鹰邹全明朱永红吴超张卫军; 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白柱层析

从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位被引量：10: 2002年; 目的建立一种有效的方法，从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位（rUreB）。方法重组大肠杆菌发酵后，表达的rUreB包涵体经洗涤、变性、复性，采用Q Sepharose Performance阴离子交换层析和Pheny1 Sepharose High Performance疏水层析分离纯化。使用 SDS－PAGE和HPLC检测纯度，选用 ELISA和 Western－bloning对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果 rUreB包涵体经洗涤和溶解后，rUreB的纯度＞70％。包涵体溶解液经阴离子交换层析和疏水层析后纯度超过95％。rUreB纯品具有良好的生物学活性。结论建立了从包涵体中获得高纯度的rUreB的工艺，为进一步的研究打下了基础。; 王缚鲲邹全明张卫军田文标朱永红杨珺毛旭虎; 关键词：人幽门螺杆菌尿素酶包涵体层析 B亚单位

幽门螺杆菌粘附素与大肠杆菌LtB融合疫苗的口服免疫与预防试验被引量：5: 2004年; 目的　观察幽门螺杆菌粘附素HpaA与大肠杆菌LtB融合蛋白质经口服免疫BALB/c小鼠后机体产生的免疫应答和蒙古沙鼠免疫预防作用。方法　用PCR方法扩增HpaA和LtB目的基因片段 ,将LtB与 pPIM质粒连接后 ,再与HpaA基因连接 ,转化大肠杆菌DH5α ,经酶切获得含有ltB -hpaA的pPIM -ltB/hpaA融合质粒。将重组质粒转化E coliBL2 1(DE3) ,筛选获得重组工程菌 ,经发酵、包涵体提取 ,复性 ,纯化获得LtB -HpaA。BABL/c小鼠设正常对照组、单独rHpaA对照组、CT +HpaA实验组、融合蛋白LtB -HpaA组和rLtB +rHpaA实验组 ,免疫 4周后检测血清抗原特异性IgG、IgA和胃冲洗液、肠冲洗液中sIgA。蒙古沙鼠分 3个实验组 ,正常对照 (PBS)组 ,单独HpaA免疫组和LtB -HpaA组 ,免疫 4周 ,于末次免疫后 14天灌活力良好的H pyloriSS1活菌 ,1个月处死动物 ,采集标本 ,用细菌培养和病理切片检查评价蒙古沙鼠的免疫保护作用。结果　融合蛋白LtB -HpaA组及将CT和LtB作为外粘膜佐剂的CT +HpaA组和LtB +HpaA组中血清IgA和IgG、胃冲洗液和肠冲洗液中sIgA含量明显高于单独HpaA组和对照组 ,差异非常显著 (P <0 0 0 1)。蒙古沙鼠融合蛋白rLtB-HpaA组比单纯rHpaA组效果明显 (rLtB -HpaA组保护率为 80 % ,单独rHpaA为 2 0 % )。; 刘正祥邹全明洪愉郭桐生郭鹰曾韦锟; 关键词：幽门螺杆菌粘附素大肠杆菌口服免疫免疫应答

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究被引量：2: 2004年; 通过不同培养基、不同葡萄糖浓度、不同溶氧条件、补料与非补料对幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)基因工程菌的菌体生长与外源蛋白表达量的影响的比较 ,建立了稳定、适宜的幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因工程菌发酵工艺。多批实验结果证明 ,菌体单产可达 86 g/L ,目的蛋白的表达率为 38.2 %。; 曾浩邹全明张卫军鲁东水; 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位大肠杆菌发酵

有氧胁迫幽门螺杆菌球形变异的实验研究被引量：4: 2006年; 目的对有氧胁迫下幽门螺杆菌(Hp)的球形变异特征进行研究。方法采用细菌学、酶学、遗传学、动物实验等方法对有氧胁迫作用下形成的Hp球形体进行实验研究。结果随着有氧胁迫时间的延长,Hp螺旋体逐渐转化为球形体,代谢及酶活性逐渐下降并趋于稳定,与Hp定居相关的毒力基因表达有所减弱,但SodB和Kat在基因表达和酶活检测中均保持较高水平;部分Hp球形体可在小鼠体内回复定植。结论有氧胁迫下形成的Hp球形体代谢活性及毒力均有所减弱,但部分球形体仍具有活性。SodB和Kat可能在Hp活性氧代谢中发挥着重要作用。; 曾浩邹全明郭刚毛旭虎童文德; 关键词：球形体活性氧代谢

幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB融合蛋白的表达及生物活性研究被引量：3: 2003年; 目的通过基因工程方法构建并表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)以基因形式的融合蛋白,并对其生物活性进行初步研究,为幽门螺杆菌疫苗的研究奠定基础。方法用PCR方法从本室构建的融合基因克隆载体扩增出融合基因2 040bp的片段,将融合基因插入原核表达载体pET-11-c中。结果经全自动测序仪测序,SDS-PAGE和免疫印迹以及N端氨基酸测序分析,证实融合蛋白已在BL21中表达,初步纯化后通过动物实验和酶联免疫吸附试验证实其相应的免疫原性和免疫反应性,以及其中LTB成分和GM1结合的特性。结论融合蛋白表达方式为幽门螺杆菌分子内佐剂疫苗的研究奠定了基础。; 袁小澎邹全明吴超鲁东水郭红王宁; 关键词：幽门螺杆菌生物活性尿素酶不耐热肠毒素基因融合

有氧胁迫下幽门螺杆菌球形体形成的比较蛋白质组学研究被引量：8: 2006年; 目的研究有氧胁迫下幽门螺杆菌(H.pylori)由螺旋体转变成球形体的适应性调节蛋白。方法运用双向电泳技术比较H.pylori螺旋体与球形体的全菌蛋白表达谱,差异蛋白进行胶内酶切,肽混合物使用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,将肽质量指纹谱数据输入互联网上的蛋白质数据库进行检索。结果获得6个与H.pylori球形体形成相关的适应性调节蛋白,即翻译延长因子Tu、丙酮酸-黄素蛋白氧化还原酶、黄素氧化还原蛋白、尿素酶G、烷基化氢化氧化酶、超氧化物歧化酶。结论上述蛋白的鉴定对深入研究有氧胁迫下H.pylori球形体的形成机制,筛选具有潜在价值的抗H.pylori药物靶位和疫苗候选表位具有参考价值。; 曾浩邹全明郭刚毛旭虎童文德; 关键词：幽门螺杆菌球形体比较蛋白质组学活性氧代谢

幽门螺杆菌球形体回复原形的实验研究被引量：3: 2008年; 目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)球形体进行体内、外回复原形的比较研究,揭示其潜在的传播途径。方法在布氏肉汤的基础上设计了4种Hp再生培养基,对Hp螺旋体、原生质体及球形体进行体外培养;同时采用30只蒙古沙土鼠(Mongolian gerbil)进行体内感染定植实验,对感染小鼠胃粘膜进行Hp定量培养和组织学检测。结果Hp球形体在4种再生培养基中均未能回复生长;而在感染小鼠的体内却观察到了Hp球形体的回复定植。Hp螺旋体感染组在小鼠胃内的定植密度较高,且胃粘膜下可见大量炎症细胞浸润;而球形体感染组并未见到小鼠胃粘膜组织的明显炎症损伤,且仅有少量回复的螺旋体定植。结论Hp球形体作为一种低水平代谢休眠体,代谢活性及毒力均有所减弱,但仍具有潜在的致病性。本研究支持部分Hp球形体具有活力但体外不能培养成活这一假说,提示"粪-口"传播应引起更多的关注。; 曾浩郭刚毛旭虎童文德邹全明; 关键词：幽门螺杆菌球形体螺旋体蒙古沙土鼠

重组幽门螺杆菌粘附素的纯化工艺被引量：1: 2004年; 目的纯化大肠杆菌表达的重组幽门螺杆菌粘附素。方法将表达HpaA蛋白的工程菌经高压均质机破菌获得包涵体,经洗涤、变性、复性,Q Sepharose High Performance阴离子交换层析和亲和层析分离纯化。采用SDS-PAGE和HPLC检测纯度,用Western blot检测其抗原性。结果纯化后HpaA蛋白纯度高达95％以上,具有良好的抗原性。结论建立了从包涵体中获得高纯度HpaA纯化工艺,为进一步的研究打下了基础。; 刘正祥邹全明洪愉朱永红; 关键词：包涵体层析纯化工艺 SDS-PAGE HPLC

微粒包裹型幽门螺杆菌疫苗口服诱导小鼠粘膜免疫应答的研究被引量：101: 2001年; 幽门螺杆菌 (Helocobacterpylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌 ,为分析Hp超声上清经微粒包裹后对小鼠的口服免疫效果 ,采用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况 ,ELISPOT法分析派伊尔氏结 (PP结 )抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)的数量增减。发现微粒包裹型Hp疫苗免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应 ,PP结抗原特异性抗体形成细胞 (ASC); 王缚鲲任建敏邹全明于长青张卫军曾浩; 关键词：幽门螺杆菌口服免疫抗体分泌细胞免疫应答

“九五”国家科技攻关计划(96-901-01-54)

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