国家自然科学基金(30571064)
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
- 相关作者：张家明孙雪飘李定琴伍祚斌谭德冠更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 植物RNA干涉载体的构建并用于拟南芥芥子酶基因的表达被引量：1
- 2008年
- 为了研究RNA干涉在抑制芥子酶基因TGG4和TGG5表达中的作用,本文在TGG4、TGG5编码序列中设计IT45 siRNA的特异靶序列,以拟南芥7SL-4基因为模板扩增启动子和终止子,连接并克隆到植物表达载体pBP5中,构建成了si RNA真核表达载体。同时利用花序浸泡法转化拟南芥。最后酶活测定的结果显示,TGG4、TGG5基因的表达受到了大部分抑制。这说明本研究构建的RNAi载体对基因表达沉默是有效的。
- 吴宇佳张家明
- 关键词：RNA干涉芥子酶基因表达
- 拟南芥芥子酶基因TGG6是花特异表达的假基因被引量：9
- 2007年
- 芥子酶是一类催化硫代葡萄糖苷水解的同工酶.TGG6是在拟南芥中新发现的芥子酶基因.从拟南芥几个不同生态型中克隆了TGG6基因的全长核基因和cDNA片段.序列分析结果表明,所有供试的生态型的TGG6基因都与拟南芥第3个芥子酶基因TGG3类似,在编码区存在1个以上移码突变,不能编码完整多肽.生态型Col-0第10个内含子的剪切边界还发生了缺失,导致内含子不能被切除.初步确定TGG6是一个假基因.然而,RT-PCR结果却表明TGG6在花器中特异性表达,说明TGG6在进化的某个阶段可能是有功能的基因,由于某种原因,该基因在进化过程中被失活.
- 汪萌伍祚斌李定琴孙雪飘张家明
- 关键词：拟南芥芥子酶组织特异表达假基因
- 拟南芥TGG5基因的克隆、表达和酶学特性被引量：3
- 2010年
- 芥子酶是广泛存在于十字花科植物中的一类降解硫代葡萄糖苷的酶。当植物受到病虫侵袭时,芥子酶与其底物硫代葡萄糖苷结合,释放有毒的水解产物形成植物重要的化学防御系统。TGG5是新发现的一类芥子酶基因,对其研究将有利于揭示芥子酶防御系统的功能。试验克隆了拟南芥TGG5基因cDNA,构建酵母表达载体,转化毕氏酵母GS115。经甲醇诱导表达和Ni亲和层析,获得纯化的TGG5重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量集中在58kD左右,并有较明显拖尾,呈现典型的糖基化蛋白的特征。进一步探讨了TGG5重组蛋白的酶学特性,结果表明:该芥子酶的Km为1.96mmol/L,Vmax为0.084mmol/(min·mg);酶反应的最适pH为5.5;该芥子酶在37～80℃范围内有较广泛的温度适应性,并具有较好的80℃热稳定性;NaCl对该酶有明显的抑制作用;低浓度抗坏血酸具有激活芥子酶的作用,抗坏血酸终浓度为1.5mmol/L时,酶活力最大。RT-RCR分析,证实了TGG5只在拟南芥根中特异表达,这表明TGG5可能代表了一个芥子酶基因新亚家族。
- 辛曙丽张家明
- 关键词：拟南芥芥子酶RT-PCR酶活性
- 拟南芥芥子酶基因TGG4的克隆、表达和酶活性鉴定被引量：6
- 2008年
- 芥子酶是一类水解硫代葡萄糖苷的酶,广泛存在于十字花科植物中。人们在拟南芥中已经发现了3个芥子酶基因,分别是TGG1、TGG2和TGG3。通过对拟南芥基因组数据库的搜索,发现3个新的芥子酶基因TGG4、TGG5和TGG6。本研究克隆了TGG4基因全长cDNA序列,构建酵母表达载体,转化毕氏酵母GS115,进行甲醇诱导表达,重组蛋白用离子交换层析柱纯化。纯化的重组蛋白经测定具有芥子酶活性,而且其活性被低浓度的维生素C激活,具有芥子酶的典型特征。芥子酶系统发生树分析进一步表明,TGG4代表一个芥子酶基因新亚家族。
- 伍祚斌孙雪飘汪萌谭德冠张家明
- 关键词：拟南芥芥子酶酶活性
- 拟南芥Rab1家族基因的克隆和功能研究
- 2008年
- Ypt1蛋白是酵母唯一的Rab1 GTP酶,调控囊泡从内质网到高尔基体的运输.酵母温敏突变株ASY01是一个Ypt1基因功能部分缺失菌株,在26℃可以正常生长,但在37℃不能生长.拟南芥有4个Rab1基因,分别是AtRab1A1、AtRab1B1、AtRab1B2、AtRab1C1.克隆了所有4个AtRab1基因,构建酵母表达载体,转化温敏突变型酵母ASY01.温度敏感性实验结果表明,所有转基因菌株在37℃都恢复正常生长.说明拟南芥4个Rab1基因都与酵母Ypt1基因功能互补,都具有调节囊泡从内质网到高尔基体运输的功能.
- 伍祚斌孙雪飘张家明
- 关键词：小G蛋白GTP酶
- 番木瓜、萝卜和油菜可溶性和结合型芥子酶活性的比较
- 2009年
- 芥子酶在植物细胞中有可溶性的自由二聚体和不溶的结合形式两种存在形态.本研究发现物种间芥子酶的形态有较大差异.番木瓜芥子酶在种子、子叶和真叶等3种组织中,主要以可溶形式存在,不溶态芥子酶微量.而在油菜种子中,芥子酶主要以结合形式存在,在子叶和真叶中,芥子酶则主要以可溶形式存在.萝卜的芥子酶介于二者之间.供试3个物种的可溶性和不溶性芥子酶都存在相互抑制的现象.
- 李定琴张家明
- 关键词：番木瓜芥子酶
- 植物芥子酶研究进展被引量：17
- 2007年
- 芥子酶防御系统为白花菜目植物特有,由芥子酶及其底物硫代葡萄糖苷组成.芥子酶和硫代葡糖苷分别储藏在不同的细胞中,在受到病虫侵袭时,底物和酶相遇,硫代葡糖苷被降为有毒化合物,起防御作用.对植物芥子酶防御系统研究进展进行了综述,包括基因家族的结构、基因的表达调控、芥子酶的细胞定位、植物以外其它生物的芥子酶、硫代葡糖苷/芥子酶系统起源进化以及其可能功能等.
- 庞道标吴宇佳谭德冠李定琴孙雪飘张家明
- 关键词：芥子酶防御起源进化细胞定位
- 拟南芥硫代葡糖苷酶基因TGG1的克隆、表达和酶学特性被引量：3
- 2010年
- 采用RT-PCR方法克隆拟南芥硫代葡糖苷酶基因TGG1,利用毕氏酵母表达。重组蛋白用镍亲和柱纯化,获得高纯度芥子酶。重组蛋白分子量78kD,与天然TGG1分子量接近,为糖基化蛋白。TGG1信号肽在酵母中具有分泌功能,约25%芥子酶分泌到培养基中。TGG1重组蛋白具有广泛的pH适应性,最适反应温度40℃左右。其活性被低浓度Vc激活,被高浓度Vc抑制。用Hanes plot方法计算TGG1重组蛋白,以Sinigrin为底物时,Km为65μmol/L,最大反应速率Vmax为3.28μmol/(min·mg)。
- 张盛敏孙雪飘张家明
- 关键词：拟南芥芥子酶重组蛋白
