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猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备被引量：4: 2015年; 【目的】克隆猪Jiv蛋白核心区的2 112bp的基因片段,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达和纯化,制备抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。【方法】利用RT-PCR方法,从猪脾脏组织RNA中扩增得到猪Jiv基因,将其克隆到pMD19-T载体并测序,以此为基础构建原核表达载体pET32a-Jiv,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导表达,获得大量包涵体形式的猪Jiv融合蛋白。通过镍离子螯合层析柱对表达的目的蛋白进行纯化,对纯化后的包涵体蛋白进行透析复性,以每只新西兰白兔400μg蛋白的初次免疫剂量和500μg蛋白的加强免疫剂量进行免疫,共免疫5次,采集血清,采用间接ELISA法检测抗体效价达到一定水平后,收集抗体,利用Western blot检测抗体特异性。【结果】克隆得到长度为2 112bp的猪Jiv基因片段;构建的pET32a-Jiv在E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中经诱导后高效表达,SDS-PAGE结果显示,纯化得到分子质量约为95ku的猪Jiv融合蛋白;测得的猪Jiv蛋白多克隆抗体效价达1∶6 400;Western blot检测结果证实,所获得抗体能够有效地应用于猪Jiv蛋白抗原的检测。【结论】成功地克隆了猪Jiv基因,制备了抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。; 刘伟郭抗抗林鸷盛洁赵娣赵紫印张彦明; 关键词：原核表达多克隆抗体猪瘟病毒

检测猪分子伴侣Jiv基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：1: 2013年; Jiv蛋白是一种与猪瘟病毒（CSFV）复制密切相关的细胞分子伴侣，为检测CSFV感染细胞内分子伴侣Jiv基因表达变化，本研究以猪Jiv基因（DNAJCl4）为参考序列，建立了检测猪分子伴侣JiV基因的SYBRGreenI荧光定量RT．PCR方法。结果显示，所建方法的标准曲线相关系数为0．999，扩增效率为103．4％，在10‘～10’拷贝数范围内具有较好的线性关系；对Jiv基N最低可检测到10拷贝，该方法的批内变异系数和批间变异系数均在O．5％以下，具有较高的敏感性和重复性。应用建立的方法对猪多种组织及猪源传代细胞中Jiv基N的表达进行检测，结果显示Jiv基因在所检测的组织和细胞中均有表达，表明所建方法可以用于Jiv基因的检测；同时对CSFV感染猪和阴性猪脾脏中的Jiv基因表达水平进行检测，统计发现CSFV感染猪脾脏中的Jiv基因表达水平显著上调，提示Jiv基因的表达在CSFV复制中发挥着一定的作用。本研究建立的检测猪Jiv基因的荧光定量RT．PCR方法为进一步明确Jiv蛋白在CSFV致病中的作用提供方法支持。; 谭学超郭抗抗宁蓬勃刘伟曹伟伟徐磊武宁林青; 关键词：猪瘟病毒荧光定量RT-PCR SYBR

分子伴侣Jiv蛋白在瘟病毒感染中的作用: 2013年; Jiv蛋白是近年来发现的一种与瘟病毒感染密切相关的细胞内分子伴侣。研究发现,分子伴侣Jiv蛋白上的一段编码90个氨基酸的序列(Jiv90)在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的NS2-3聚合蛋白切割中起着关键的作用,能促使NS2-3聚合蛋白切割成NS2和NS3单体蛋白。将Jiv90基因片段插入猪瘟病毒(CSFV)强毒株Alfort-p447中构建的嵌合病毒Alfort-Jiv感染细胞后,检测发现CSFV NS3蛋白的表达量明显升高。这些都提示,Jiv蛋白在瘟病毒感染细胞过程中发挥着重要的调节作用,但对其确切的作用机制还有待深入研究。本文就Jiv蛋白的发现、对BVDV和CSFV感染的调节作用及Jiv蛋白功能的深入研究进行了展望,以期为Jiv蛋白的功能研究及其在瘟病毒感染过程中的作用机制的研究提供基础资料。; 谭学超郭抗抗林青刘伟刘潇王斌杨杰孙东; 关键词：瘟病毒猪瘟病毒牛病毒性腹泻病毒分子伴侣

动物性产品中三聚氰胺的危害及检测方法研究进展被引量：1: 2012年; 近年来发生的一系列由于三聚氰胺在动物产品中的添加而造成了人和动物死亡的安全事件,引起人们对其的高度重视。三聚氰胺的毒性作用主要表现为一种剂量依赖性的在肾小管中形成结晶最终导致急性肾功能衰竭,对人和动物危害较大。目前,对于三聚氰胺在动物和人体内的毒物代谢动力学方面的研究主要集中于体内分布、持留时间、浓度等方面。同时,研究敏感、准确、快速的检测方法是预防三聚氰胺危害的一个重要方面。论文主要从三聚氰胺的毒理学作用以及检测技术两方面的研究进展进行概述,以期为研究三聚氰胺的作用机理及检测提供参考。; 陈敏艳刘伟郭抗抗宁蓬勃; 关键词：动物产品三聚氰胺

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中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(QN2011109)