广东省自然科学基金(9451008901002230)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 相关作者：赖文玉李伟强项鹏张秀明王涛更多>>
- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胚胎干细胞神经分化的方法探讨
- 2011年
- 【目的】利用新建系的人胚胎干细胞株SYSU-7,运用胚体形成的方法,探讨不同的分化条件对胚胎干细胞神经分化的影响。【方法】首先检测人胚胎干细胞株SYSU-7的Oct4、SSEA4(stage-specific embryonic antigen-4)、TRA-1-60和AKP(Alkaline phosphatase)等胚胎干细胞特异性标志物的表达及体内外三胚层分化的能力;之后,应用含20%KnockoutSerum Replacement(KSR)的培养液和神经干细胞培养液(neural progenitor medium,NPM)分别诱导细胞形成悬浮的拟胚体(悬浮时间为4 d或7 d),然后将拟胚体贴壁于多聚鸟氨酸(Polyornithine,PO)和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)包被的培养皿中继续培养4～10 d。在分化的不同时间点利用免疫荧光染色的方法检测胚胎干细胞和神经细胞相关的标志性抗原。【结果】SYSU-7胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct4、SSEA4,TRA-1-60,AKP染色呈强阳性,在体内外具有向三胚层分化的潜能;在体外诱导其向神经分化,结果发现KSR培养液比神经干细胞培养液更有利于胚胎干细胞的神经分化,悬浮生长7 d的拟胚体贴壁后出现特征性的玫瑰花环样结构(rosette structure)的时间更早、数量更多。【结论】SYSU-7细胞系具有自我更新及多向分化潜能等胚胎干细胞特性。本实验为研究人胚胎干细胞的神经分化提供了新的细胞模型和研究思路。
- 赖文玉曾巧慧吴燕云成福义李攀龙李伟强
- 关键词：人胚胎干细胞神经分化
- 新型慢病毒载体的构建及其在人骨髓间充质干细胞基因转导中的应用被引量：1
- 2011年
- 背景:构建一个组成性表达某特定基因同时携带荧光报告基因和抗生素筛选基因的慢病毒载体目前未见报道。目的:观察新型慢病毒载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP在人骨髓间充质干细胞基因转导中的表达。方法:通过PCR在PEDF基因的两端加上attB位点,构建表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP,将表达载体与包装质粒(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共转染293FT细胞。通过多次感染的方法将慢病毒载体导入人骨髓间充质干细胞,转导后第7天开始使用1～5mg/L嘌呤霉素筛选5d,得到表达PEDF和EGFP的人骨髓间充质干细胞,并进行Western、Elisa的鉴定分析。结果与结论:经PCR和测序证实,慢病毒表达载体pLVpuro/EF1α-PEDF-IRES-EGFP构建成功;将其成功导入人骨髓间充质干细胞,经过筛选获得纯化的过表达PEDF基因的绿色荧光细胞群。
- 卢晓芳杜晶春李磊赖文玉张秀明李伟强杨霞项鹏
- 关键词：慢病毒人骨髓间充质干细胞PEDFEGFP
- Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系的建立及鉴定被引量：2
- 2011年
- 【目的】建立Cdyl基因敲除的小鼠诱导多能干细胞系(iPSC)。【方法】通过组织块贴壁法培养Cdyl-/-的胚胎成纤维细胞(MEF)。将pMx-Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4和hrGFP五种质粒分别转染Plat-E细胞,收集病毒上清,感染Cdyl-/-MEF获得Cdyl-/-iPSC,并对Cdyl-/-iPS细胞的分子标记及体内外分化能力进行检测。【结果】取Cdyl-/-胎鼠皮肤,培养得到增殖旺盛的Cdyl-/-MEF。成功包装逆转录病毒并感染Cdyl-/-MEF,得到胚胎干细胞样的Cdyl-/-iPS细胞。该细胞表达AKP、Oct3/4、SSEA-1,在体内外可以分化为三胚层的细胞类型。【结论】Cdyl-/-iPS细胞具有自我更新和多向分化能力的特性。Cdyl-/-iPS细胞系的建立为研究Cdyl在小鼠早期胚胎发育中的功能提供一个良好的细胞模型。
- 胡晓俊赖文玉万利王涛张秀明李伟强项鹏
- 关键词：基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞
- Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞的建系及体外神经分化被引量：1
- 2011年
- 【目的】建立Nestin-GFP转基因小鼠的胚胎干细胞(mESC)系,并观察其示踪ES细胞系的神经分化过程。【方法】将E3.5的Nestin-GFP小鼠囊胚接种于小鼠胚胎成纤维细胞上(MEF经γ射线照射失去增殖活性)。4～6d后将自囊胚长出的内细胞团(ICM)继续培养并传代扩增,检测所得细胞Oct-4、SSEA-1和AKP等胚胎干细胞特异性标志物的表达及在体内外向三胚层分化的能力;之后,诱导细胞向神经元样细胞及神经胶质样细胞分化,利用免疫荧光检测其标志性抗原。【结果】免疫组化可见Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞表达未分化细胞特异性标志Oct-4、SSEA-1,AKP染色呈强阳性,并具有向体内外三胚层分化潜能;在体外诱导其向神经分化,第6d可见到明显的绿色荧光,并与免疫组化Nestin表达部位基本吻合。第12d及第16d分别可见神经元及神经胶质细胞特异性标志物表达,而此时Nestin的表达较前明显下降。【结论】成功建立了Nestin-GFP小鼠胚胎干细胞系,该细胞具有自我更新的特性及多向分化潜能,并可用于在体外更直观的监测神经分化的阶段性变化并由此进行调控。
- 王紫菲赖文玉柯琼李付贵王涛张秀明李伟强项鹏
- 关键词：NESTIN胚胎干细胞绿色荧光蛋白神经分化
