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国家高技术研究发展计划(2001AA215151)

作品数:6 被引量:38H指数:4
相关作者:林矫矫蔡幼民宋光承刘述先曹建平更多>>
相关机构:中国疾病预防控制中心中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所中国科学院上海生命科学研究院更多>>
发文基金:国家高技术研究发展计划上海市重大科技攻关项目更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 5篇血吸虫
  • 5篇日本血吸虫
  • 5篇吸虫
  • 4篇疫苗
  • 3篇免疫
  • 2篇功能分析
  • 2篇核酸疫苗
  • 1篇蛋白
  • 1篇电泳
  • 1篇血吸虫虫卵
  • 1篇英文
  • 1篇制备及特性
  • 1篇日本血吸虫虫...
  • 1篇双向电泳
  • 1篇童虫
  • 1篇微球
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞反应
  • 1篇小鼠
  • 1篇小鼠体内

机构

  • 3篇中国疾病预防...
  • 2篇中国科学院上...
  • 2篇中国农业科学...
  • 1篇江苏大学
  • 1篇西北农林科技...
  • 1篇中国农业科学...

作者

  • 3篇蔡幼民
  • 3篇林矫矫
  • 2篇程国锋
  • 2篇冯新港
  • 2篇刘述先
  • 2篇宋光承
  • 2篇周元聪
  • 2篇曹建平
  • 1篇陆柯
  • 1篇闫玉涛
  • 1篇沈玉萍
  • 1篇孙军
  • 1篇于三科
  • 1篇徐希明
  • 1篇徐馀信
  • 1篇李浩
  • 1篇杨柳
  • 1篇石耀军
  • 1篇徐裕信
  • 1篇朱传刚

传媒

  • 1篇中国药学杂志
  • 1篇Curren...
  • 1篇中国寄生虫学...
  • 1篇西北农林科技...
  • 1篇Zoolog...
  • 1篇中国血吸虫病...

年份

  • 1篇2008
  • 1篇2007
  • 4篇2005
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
日本血吸虫虫卵、童虫和雌雄成虫膜蛋白的双向电泳被引量:11
2005年
Membrane proteins were extracted from eggs, schistosomulum, adult male and female worms of Schistosoma japonicum in order to analyze the differently expressed profile by two dimensional electrophoresis. Schistosomulum and adult worms were obtained from rabbits infected with 1 500 cercariaes on 14 and 42 days after challenge, respectively. Adult male and female worms on 42 days were manually detached and stored into liquid nitrogen until use. Eggs were collected by Percoll TM from the liver of rabbits. ProteoPrep Membrane Extraction Kit TM was employed to extracted membrane proteins by reducing and alkylating with TBP and iodoacetamide from 200 mg of eggs, schistosomulums, adult male worm and female worms, respectively. Immobilized pH gradient strips with a linear pH range of 3-10 (130 mm) were rehydrated together with membrane proteins (30 μg) in 250 μl solution containing 7 mol urea, 2 mol thiourea, 2% SB3-10, 4% CHAPS, 40 mmol Tris, 30 mmol DTT, then separated on 12.5% SDS polyacrylamide gel for the second dimensional electrophoresis. Gels were stained with silver, scanned by Labscan, and analyzed using ImageMaster TM Analysis software. The 2D maps of egg, schistosomulum, adult female worm and male worm were showed 78±3、67±3、108±4 and 122±4 spots respectively. There were 35±1 spots which showed specific expression in female worm as compared with male worm, but 45±2 spots were in male worms. Most differently expressed spots between male and female worms were located in the area of 40-70 kD and pI 4-7. The large number of unique spots from schistosomulum was located in the area of alkalescence. The 2D map of for adult male worms uniquely showed 5 spots as compared with that of schistosomulum and female worm. The female worm showed 4 unique spots as compared with that of schistosomulum, egg and male worm. The unique spots between male and female worms were identified by the database of SWISS 2D-PAGE according to the molecular weight and isoelectronic point. Calreticulin 1, methyltransferase, outer memb
程国锋冯新港林矫矫石耀军陆柯周元聪蔡幼民
关键词:童虫日本血吸虫膜蛋白虫卵双向电泳SDSPAGE
日本血吸虫新基因Sj314C10的表达及功能分析
2008年
【目的】筛选新的高效抗日本血吸虫病疫苗。【方法】运用"电子cDNA文库"筛选法和快速cDNA末端扩增技术,对日本血吸虫新基因Sj314C10进行了克隆,构建了原核表达载体pET-28a(+)-Sj314C10,并探索了各种条件对表达蛋白的影响;用生物学软件初步预测了该基因的编码蛋白,用亲和层析法对表达产物进行纯化并完成了表达产物的抗原性检测及其对动物的保护性研究。【结果】表达产物约50 ku,为包涵体蛋白,温度I、PTG浓度和表达时相的改变对该包涵体蛋白的可溶性表达无显著影响;生物信息学分析表明,Sj314C10编码蛋白与杆状病毒凋亡抑制蛋白的重复结构域有78%的同源性,纯化蛋白抗原性良好;小鼠抗血吸虫尾蚴攻击试验显示,与佐剂对照组相比,蛋白免疫组获得了部分保护作用,这为血吸虫候选分子疫苗的研究增添了新内容。【结论】日本血吸虫Sj314C10基因得到了成功表达,所表达蛋白具有良好的抗原性,对小鼠具有一定的免疫保护作用。
杨柳于三科冯新港苑纯秀沈阳刘金明林矫矫蔡幼民
关键词:日本血吸虫表达纯化功能分析
日本血吸虫Sjc97 DNA疫苗免疫小鼠攻击感染后的组织细胞反应被引量:7
2007年
目的观察日本血吸虫副肌球蛋白核酸疫苗(Sjc97DNA)免疫宿主攻击感染后的皮肤及肺组织反应。方法105只C57BL/6小鼠,随机分成Sjc97DNA疫苗组、空质粒对照组和感染对照组。前两组分别以Sjc97DNA核酸疫苗、空质粒经后腿胫前肌免疫C57BL/6小鼠共2次,每次间隔3周。末次免疫后3周攻击感染,3组小鼠经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴(800+50)条。于攻击感染后6、18、24、48、72、96、120h,每组分别剖系5只小鼠,取腹部皮肤及/或肺组织作病理观察。结果Sjc97DNA疫苗免疫小鼠攻击感染血吸虫尾蚴后,皮肤炎症反应出现早,炎症细胞杀童虫现象明显,炎症反应强烈,且持续时间长,嗜酸性粒细胞浸润百分比高;而空质粒对照组和感染对照组皮肤炎症轻,持续时间短,杀虫现象不明显。Sjc97DNA疫苗免疫鼠攻击感染后肺部出血斑点出现时间(72h)迟于空质粒对照组和感染对照组(48h)。72~120h,Sjc97DNA疫苗组小鼠肺部局灶性炎症明显,肉芽肿样结节形成,但肺泡壁多正常;而空质粒组和感染对照组小鼠肺组织炎症轻,但肺泡壁水肿有较多红细胞渗入。结论Sjc97DNA疫苗免疫增强了小鼠皮肤及肺组织的细胞反应及其杀童虫作用。
陈家旭刘述先曹建平宋光承徐馀信
关键词:日本血吸虫核酸疫苗
聚乳酸-聚乙二醇共聚物为载体的缓释疫苗微球的制备及特性研究被引量:9
2005年
目的制备缓释疫苗微球。方法以聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)为载体,醋酸乙酯为有机溶剂,采用W/O/W溶剂扩散法制备PELA疫苗微球。扫描电子显微镜观察微球的形态,激光散射技术测定其粒径分布;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)研究微球包裹前后疫苗蛋白的稳定性;BCA法测定疫苗微球的载药量和包封率,同时考察疫苗微球的体外释药性能。结果所得微球呈类球形,平均粒径为5.38μm,疫苗微球载药量为5.12%,包封率达75.25%;包裹前后疫苗蛋白的结构稳定; 体外释药结果显示,疫苗微球前3 d以Higuchi方程(r=0.997 7)释放,3 d后则以零级恒速释放(r=0.992 2),28 d累积释药量为69.10%。结论以PELA为载体的疫苗微球具有较高的包封率、载药量和明显的缓释效果。
徐希明沈玉萍余江南皋古云曹建平
关键词:微球疫苗缓释
日本血吸虫真核翻译起始因子5基因的cDNA克隆和免疫保护功能分析(英文)
2005年
利用抑制削减杂交法筛选日本血吸虫雌雄虫差异基因,从中获得真核翻译起始因子5基因(eIF5)的 表达序列标。对该序列进行生物信息学分析:对其5’端进行电子延伸,获得含完整开放阅读框的cDNA序列 (AY686501)。将其亚克隆到表达载体pET-28c,进行重组表达。免疫保护效果实验表明,重组表达蛋白具有显著 抑制血吸虫卵在寄主肝脏中的沉积效果。
程国锋林矫矫孙军李浩朱传刚周元聪蔡幼民
关键词:日本血吸虫疫苗
日本血吸虫三磷酸甘油醛脱氢酶核酸疫苗小鼠体内的免疫应答特征被引量:11
2005年
目的研究日本血吸虫大陆株三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠诱生的免疫应答特征和保护性。方法将用免疫筛库得到的日本血吸虫大陆株GAPDH编码基因以PCR扩增,扩增产物T-A克隆至载体pT-Adv而后与真核表达载体pcDNA3连接,构建成核酸疫苗(pcDNA3-SjGAPDH)。将纯化的pcDNA3-SjGAPDH经后腿胫前肌免疫C57BL/6小鼠。免疫荧光染色法研究pcDNA3-SjGAPDH在注射的局部肌肉表达特性;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)、蛋白质印迹法(Westernblotting)、ELISA等方法分析pcDNA3-SjGAPDH所诱导的特异性免疫应答特征。结果pcDNA3-SjGAPDH免疫后24和48h即可在荧光显微镜下看到C57BL/6小鼠小腿胫前肌的局部肌肉的冰冻切片发出淡绿色荧光,表明有GAPDH蛋白的表达。pcDNA3-SjGAPDH免疫小鼠主要诱生IgG2a、IgG2b和IgG3亚类;免疫小鼠脾淋巴细胞体外经特异性抗原刺激主要诱生γ-干扰素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)细胞因子,未检出IL-4。另外,免疫鼠血清能够识别日本血吸虫SWAP中的天然GAPDH成分。结论pcDNA3-SjGAPDH核酸疫苗免疫C57BL/6小鼠主要诱导Th1类型细胞免疫应答。
闫玉涛李小红刘述先宋光承徐裕信
关键词:日本血吸虫核酸疫苗
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