福建省自然科学基金(2009J05061)
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
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- 人凋亡相关因子配体及人转化生长因子-β1基因共修饰树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的研究被引量：5
- 2011年
- 目的联合人凋亡相关因子配体（hFasL）及人转化生长因子-β1（hTGF-β1）基因共修饰大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞（imDC），提高imDC诱导大鼠同种异体原位肝移植免疫耐受的能力，以延长受鼠生存期。方法行以DA大鼠为供体、近交系Lewis大鼠为受体的同种异体原位肝移植140例，随机均分为7组：未给移植受鼠注射DC组（对照组）、mDC组、imDC组、空载体组、FasL组、TGF组及共转染组；分别于移植前5d每天给Lewis大鼠腹腔注射mDC、imDC、空载体转染的imDC、hFasL修饰的imDC、hTGF-β1修饰的imDC、hFasL和hTGF-β1共修饰的imDC各2×10^6个，于肝移植术后3、7、10d各处死4只，观察外周血肝功能变化[丙氨酸转氨酶（ALT）和总胆红素（TBIL）]，肝脏病理改变，肝脏凋亡，外周血清细胞因子，并进行生存分析。结果肝脏病理示术后7d，7组差异有统计学意义（P〈0．01），共转染组排斥反应均轻于TGF组和FasL组；10d时，7组差异有统计学意义（P〈0．01），共转染组排斥反应轻于TGF组和FasL组，TGF组轻于FasL组。肝功能示共转染组于7d时就已基本恢复正常，FasL组于7d时有所降低，但10d时反而升高，ALT及TBIL的浓度均高于共转染组（P〈0．01，P〈0．05）；TGF组到10d时，肝功能已恢复正常，ALT及TBIL的浓度均低于FasL组（P〈0．01，P〈0．05），但与共转染组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测示，术后7d共转染组和TGF组的血清白细胞介素（IL）-1、IL-10及IL-12与FasL组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；但共转染组和TGF组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。TUNEL显示FasL组的肝、脾及腹腔淋巴结中淋巴细胞凋亡指数与共转染组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05），但多于TGF组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。FasL组中位生存期20d与imDC组（23d）�
- 曾金华邱明链陈丽红吴燕斌方航荣刘景丰
- 关键词：树突状细胞免疫耐受FASL转化生长因子-Β1肝移植
- 人凋亡相关因子配体及人转化生长因子-β1基因共转染大鼠未成熟树突状细胞对其生物学活性的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察人凋亡相关因子配体（hFasL）及人转化生长因子-β1（hTGF-β1）基因共转染的大鼠未成熟树突状细胞（imDC）对其生物学活性影响。方法实验分6组：mDC组、imDC组、空载体组、hFasL基因转染组、hTGF-β1基斟转染组及hFasL—hTGF-β1基因共同转染组（即共转染组）。用hFasL或（和）hTGF-β1真核表达载体（pIRES2-EGFP—hFasL、pIRES2-EGFP-hTGF-β1）转染培养6d后大鼠骨髓来源的imDC，转染24～48h后应用荧光显微镜、酶联免疫吸附试验（ELISA）、Westernblot、流式细胞术及混合淋巴细胞反应（MLR）检测不同基因修饰的imDC的生物学活性。结果荧光显微镜观察显示pIRES2-EGFP—hFasL及pIRES2-EGFP-hTGF-β1质粒转染imDC后可见绿色荧光；ELISA检测共转染组和转化生长因子（TGF）组TGF-β1基因表达均高于mDC组、imDC组、空载体组及FasL组（P值均〈0．01），imDC组、空载体组及FasL组的TGF-β1基因表达均高于mDC组（P〈0．05）。hFasL基凶表达各组间的差异均无统计学意义（P值均〉0．05）；经Westenblot检测hFasL及hTGF-β1基因转染组有均有相应蛋白表达（相对分子质量分别为31×10^3和43×10^3）；流式细胞术显示表面分子CD86、CD80在mDC表达高于imDC及各基因转染组和空载体组；转染后混合淋巴细胞反应（MLR）显示，共染组T细胞的增殖反应均明显弱于TGF组和FasL组（P〈0．05）。结论联合FasL和TGF-β1基因转染的imDC存体外诱导同种异体免疫耐受的能力强于FasL或TGF-β1单基因转染。
- 邱明链吴燕斌陈丽红方航荣曾金华刘景丰
- 关键词：树突状细胞FASL转化生长因子-Β1基因修饰
- 真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL的构建及鉴定被引量：1
- 2011年
- 背景:FasL通过与靶细胞上Fas结合诱导程序性细胞死亡,可维持机体内稳态,诱导同种异基因移植免疫耐受,促进肿瘤细胞凋亡。目的:构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因hFasL的真核表达载体pIRES2-EGFP-hFasL。方法:通过实时聚合酶链反应RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞中扩增出hFasL基因,与真核空载体plRES2-EGFP一起,经XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切,T4DNA连接酶连接,从而构建pIRES2-EGFP-hFasL。用紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度,经酶切、PCR技术、基因测序等方法进行鉴定。结果与结论:扩增出的hFasL条带大小约846bp,构建的plRES2-EGFP-hFasL经酶切后在846bp和2000bp处有特异性条带,DNA测序证实hFasL与Genebank上的序列完全一致。提示成功构建了含有hFasL及EGFP的真核表达载体plRES2-EGFP-hFasL。
- 邱明链方航荣陈丽红刘景丰
- 关键词：基因FASL增强型绿色荧光蛋白基因重组
- 单人行大鼠原位肝移植手术难点及技巧的探讨
- 2010年
- 目的探讨单人建立稳定大鼠原位肝移植模型的手术难点及技巧。方法对200只成年雄性SD大鼠,采用改良的Kamada二袖套法,单人及双人裸眼下行大鼠原位肝移植各50对。结果单人与双人操作组供体手术时间、受体手术时间、无肝期分别为(27.22±1.03)min和(26.47±1.16)min、(50.58±3.10)min和(48.18±3.70)min、(11.60±0.11)min和(11.28±0.08)min。单人与双人操作组手术成功率、1周存活率、1个月存活率分别为90%和94%、88%和88%、84%和86%。结论改良的二袖套法,单人操作简便,成功率高,无需助手协助,可为大鼠原位肝移植实验提供稳定可靠的动物模型。
- 黄启明吴燕斌刘景丰邱明链
- 关键词：肝移植动物模型
- IL-10基因修饰的树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨hIL-10基因修饰的未成熟树突状细胞(imDC)诱导大鼠肝移植免疫耐受的能力。方法:行以DA大鼠为供体、Lewis大鼠为受体的同种异体原位肝移植100例,随机分为5组(每组4只):未注射DC组(对照组)、mDC组、imDC组、空载体组及hIL-10基因转染组;分别于移植前5d每天给Lewis大鼠腹腔注射mDC、imDC、空载体转染的imDC和hIL-10修饰的imDC各2×106个,于肝移植术后3、7、10d各处死4只,观察外周血肝功能及IL-12变化,并对移植后大鼠做生存分析。结果:IL-10组术后移植肝为非确定型急性排斥反应到轻度急性排斥反应。肝功能示IL-10组在7d、10d时,肝功能有所恢复,但与imDC组及空载体组相比差异无统计学意义。ELISA检测示,术后7d,IL-10组的血清IL-12浓度均低于mDC组及imDC组。IL-10组中位生存期(40d)长于其他组。结论:hIL-10基因修饰的imDC诱导同种异体大鼠肝移植免疫耐受能力显著增强,显著延长同种异体肝移植大鼠的生存期。
- 方航荣邱明链刘景丰陈丽红黄爱民
- 关键词：肝移植免疫耐受HIL-10基因修饰树突状细胞
- 大鼠骨髓来源树突状细胞的体外培养与鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的建立体外培养、诱导和扩增大鼠骨髓来源的树突状细胞的方法。方法实验通过运用大鼠淋巴细胞分离液和培养过程的手法筛选相结合,培养、诱导和扩增大鼠骨髓来源的树突状细胞,通过形态学和免疫表型进行鉴定。结果成功建立了体外大量培养、诱导及扩增大鼠骨髓来源树突状细胞的方法;经倒置相差显微镜、透射电镜及流式细胞仪鉴定,证实所培养细胞为树突状细胞。结论通过运用大鼠淋巴细胞分离液和培养过程的手法筛选相结合能培养、诱导、扩增大量的树突状细胞。
- 方航荣陈丽红邱明链刘景丰黄爱民
- 关键词：树突状细胞免疫耐受
- 两种大鼠原位肝移植急性排斥模型的对比观察被引量：1
- 2013年
- 目的对比观察两种大鼠原位肝移植急性排斥模型。方法进行改良二袖套法大鼠原位肝移植;分为Sprague Dawley(SD)→SD组(24例),SD→Wistar组(24例)及Dark Agouti(DA)→Lewis组(24例)。术后3,5,7,10d分别随机处死4只受鼠,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)变化,并观察肝脏病理组织学改变;每组剩余受鼠进行生存分析。结果手术成功率为94.4%;DA→Lewis组中位生存时间(8d)短于SD→Wistar组(16d)(P=0.000)。SD→Wistar组71.4%受鼠移植肝急性排斥反应逐渐加重(RAI:3～7分),28.6%逐渐好转;DA→Lewis组受鼠移植肝发生重度急性排斥反应(RAI:7～9分)。在7,10d,DA→Lewis组受鼠血清ALT、TBIL浓度均高于SD→Wistar组(7d:P=0.000、0.007;10d:P均=0.000)。结论 SD→Wistar组合的大鼠肝移植术后大部分可发生急性排斥反应,但会出现自发耐受现像,从而导致急性排斥反应基础研究偏移;而DA→Lewis组合的大鼠肝移植术后均出现重度的急性排斥反应,是一种理想的急性排斥反应模型。
- 邱明链陈丽红吴燕斌曾金华刘景丰
- 关键词：肝移植免疫耐受移植物排斥
