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国家自然科学基金(30972097): 作品数：20 被引量：33H指数：3; 相关作者：华进联朱海鲸胡玥于萌刘超更多>>; 相关机构：西北农林科技大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养被引量：4: 2011年; 以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其表达精原干细胞和多能性干细胞的相关特异性标记:碱性磷酸酶(AP)、CD49f、CD133、C-Myc、Oct4和Klf4阳性,证明睾丸组织冷冻可以提供一种有效的奶山羊精原干细胞的保存方法。试验中所使用的低温保存方法简便易行,效果良好,表明这些方法可为癌症治疗等造成的无精症及少精症等不育症患者的医治以及一些珍稀濒危物种和优良畜禽的生殖细胞保存提供一种简捷有效的途径。; 朱海鲸华进联宋文聪黄建升田泽华; 关键词：睾丸组织精原干细胞奶山羊

小鼠Dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染被引量：1: 2013年; 根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证正确。将pEGFP-C1-Dazl质粒转染293和NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞。Dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,Dazl基因和GFP共同定位于胞质部分。pEGFP-C1-Dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因Dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础。; 王龙周莹胡玥于萌白耀富华进联; 关键词：小鼠生殖细胞绿色荧光蛋白

维生素A类化合物与生殖细胞发育被引量：1: 2011年; 维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活性代谢所产生的一种脂溶性的小分子物质，主要由环乙烯、侧链和极性基团组成。根据其双键构型的不同，可分为反式视黄酸和顺式视黄酸。; 曹晖华进联; 关键词：维生素A 类化合物肿瘤细胞生长组织分化小分子物质视黄酸

成年昆明小鼠雄性生殖干细胞的分离培养及其多能性研究被引量：4: 2010年; 【目的】从成年昆明小鼠睾丸组织中分离具有多能性的雄性生殖干细胞(Male germline stem cells,mGSCs)。【方法】采用机械法和2步酶消化法分离出成年昆明小鼠的精原细胞,经差速贴壁后,培养在小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,2周后得到类胚胎干细胞(ESCs)样mGSCs。对得到的mGSCs进行碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、RT-PCR、体内分化等检测。【结果】mGSCs具有类似ESCs的形态和多能性,AP染色呈阳性,免疫荧光Oct4、Vasa染色呈阳性,RT-PCR检测其表达Oct4、Nanog、Sox2等多能性基因和Vasa、C-kit等生殖细胞的标记基因,在免疫缺陷鼠体内能形成畸胎瘤,组织学检测其可形成包括3个胚层在内的多种类型细胞。【结论】从成年昆明小鼠睾丸分离的精原细胞,在体外培养去分化形成了具有类ESCs生物学特性的mGSCs,mGSCs既具有多能性,也具有生殖细胞的基本生物学特性。; 潘少辉胡玥张姗姗王静李飞飞高志敏杨春荣华进联; 关键词：精原细胞多能性

Mmu-miR-34c慢病毒表达载体构建及在奶山羊雄性生殖干细胞的表达: 2012年; 【目的】用两种方法构建miR-34c的慢病毒表达载体,并包装成慢病毒颗粒,为经济、高效的进行miR-34c超表达提供方案,为进一步研究miR-34c的作用奠定基础。【方法】从小鼠基因组中扩增miR-34c前体,分别插入pLL3.7的CMV启动子起始的GFP之后或U6启动子后,构建成载体pLL3.7-CMV-34c及pLL3.7-U6-34c。将重组慢病毒载体和包装质粒混合物转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,测定病毒滴度。感染293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞,用293T细胞与奶山羊雄性生殖干细胞的GFP表达程度测定转染效率,用定量PCR方法测定miR-34c的表达效率。【结果】重组质粒酶切及PCR分析及转化菌液测序,证明插入序列正确,qPCR检测显示:miR-34c的表达在慢病毒载体感染的293T细胞与关中奶山羊雄性生殖干细胞均显著上调。【结论】用pLL3.7慢病毒载体中的CMV和U6两种启动子均可经济高效地进行miR-34c超表达,且由U6启动子启动的miR-34c慢病毒表达载体可以成功高效感染关中奶山羊雄性生殖干细胞。; 刘超于萌朱海鲸李明昭华进联; 关键词：慢病毒载体奶山羊

Retinol促进小鼠雄性生殖干细胞的增殖: 2013年; Retinol(RE)作为维生素A的一种,对生命有机体内多种生理生化和代谢反应均有重要的影响。本试验以雄性生殖干细胞(mGSCs)为对象,用RE培养mGSCs,探讨RE对mGSCs增殖的影响。试验分别设置对照组,RE组,RE+LY(LY294002,PI3K抑制剂)组,RE+PD(PD98059,MAPKK抑制剂)组。选取培养不同时间的mGSCs进行半定量与定量PCR分析,检测基因的表达情况。对培养48h的mGSCs进行Brdu荧光染色。结果显示,RE培养能够显著促进mGSCs的增殖,培养后C-myc等增殖标记基因表达上调,加入LY、PD抑制剂后,增殖效果显著降低;表明RE可能通过PI3K或MAPKK促进mGSCs的增殖。本研究证明了RE具有促进mGSCs增殖的作用,对于探明RE对mGSCs增殖调控的机理具有重要意义。; 褚志礼孙军伟刘超王龙胡玥华进联; 关键词：RETINOL 增殖小鼠

哺乳动物精原干细胞的分子标记及调控: 2012年; 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是一群生活在睾丸特殊微环境中并能自我更新和具有多向分化潜能的细胞,是精子发生的基础。近年来,通过对SSCs表面的α6-和β1-整合素、CD9、GFRA1等主要标记分子,以及对GDNF、Plzf、泛素、LIF等决定SSCs自我更新和分化的多种细胞因子和基因的研究发现,目前在SSCs的分离、鉴定和生物学特性方面已获得新的成果。本文简述了目前哺乳动物SSCs主要的标记分子及自我更新与分化的调控机理,以期为该领域及其他干细胞研究提供一定的借鉴。; 于萍华进联; 关键词：精原干细胞自我更新分化

猪肌肉卫星细胞的分离培养及生物学特性鉴定被引量：2: 2011年; 以猪胎儿为材料,采用胶原酶消化法或组织块法培养胎儿背部最长肌获得了肌肉卫星细胞,该细胞体外可以传到9代以上。培养的细胞多呈纺锤体型和梭型,具有明显的方向性,呈典型的长轴平行排列。流式细胞仪分析结果显示,该细胞呈CD29、CD166、CD45、CD44阳性,CD71、CD34阴性。RT-PCR检测发现其表达Desmin、C-Myc、Nanog、Pcna、Oct4、Klf4,弱表达Myog,不表达Sox2、MyoD。免疫组化染色发现其表达Desmin等肌肉细胞的特异性标记,同时表达Nanog、Pcna等多能性细胞标记。本试验建立了一种简便高效的猪肌肉卫星细胞体外分离和培养方法,得到的细胞具有肌肉卫星细胞的典型生物学特性,同时表达间质干细胞和多能性干细胞的部分标记。; 吕晓朱海鲸曹晖孙军伟华进联; 关键词：胚胎干细胞间质干细胞诱导多能干细胞

诱导人脐带间充质干细胞向心肌细胞分化及对小鼠心肌梗死的治疗作用被引量：2: 2012年; 目的研究脐带间充质干细胞(UC-MSC)体外分化为心肌细胞的可行性以及观察UC-MSC体内移植对心肌梗死模型小鼠的治疗效果。方法 10μmol/L 5-氮胞苷(5-aza)体外诱导UC-MSC 14 d,通过RT-PCR、免疫荧光染色鉴定其分化效果;采用腹腔注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)每只3.0 mg/(kg/d),制作心肌梗死模型鼠;在注射ISO 48 h后,实验组将DAPI标记的UC-MSC经两次尾静脉移植给心肌梗死模型鼠,移植后第4周和第8周,分别采集实验小鼠的心脏、脾脏,以未移植细胞组的小鼠心肌损伤模型作为对照,通过心脏指数和脾脏指数测量,免疫荧光和碱性复红-苦味酸(HBFP)染色鉴定其体内分化和修复作用。结果 RT-PCR分析表明诱导的UC-MSC表达心肌特异性基因:心肌α-actin、TBX5、GATA4和NKx2.5,免疫荧光染色显示诱导细胞呈心肌α-actin和NKx2.5阳性,且呈双核现象。尾静脉移植后第4周和第8周,模型受体鼠心脏均发现有DAPI阳性细胞迁移至心肌组织且呈现心肌α-actin阳性,HBFP染色及心脏和脾脏指数结果显示移植UC-MSC对心肌损伤的模型鼠有明显的修复和治疗效果。结论 UC-MSC在体外经5-aza诱导可定向分化为心肌细胞,尾静脉体内移植UC-MSC对心肌损伤小鼠有明显的治疗效果。; 仇普斌刘超李伟潘少辉刘文帅华进联; 关键词：脐带间充质干细胞心肌梗死模型小鼠

Conophylline Promotes the Proliferation of Immortalized Mesenchymal Stem Cells Derived from Fetal Porcine Pancreas (iPMSCs)被引量：3: 2013年; Conophylline, is a bis (indole) alkaloid consisting of two pentacyclic aspidosperma skeletons, isolated from Tabernaemontana divaricata, which has been found to induce β-cell differentiation in rat pancreatic acinar carcinoma cells and in cultured rat pancreatic tissue. However, the precise role of conophylline in the growth and survival of immortalized pancreatic mesenchymal stem cells (iPMSCs) derived from fetal porcine pancreas were not understood at present. To determine whether this molecule is involved in controlling the proliferation of iPMSCs, we examined the effects of conophylline on iPMSCs. We found that conophylline can robustly stimulate iPMSCs proliferation, even promote their potential differentiation into islet-like clusters analyzed by cell counting, morphology, RT-PCR and real-time PCR, Western blotting, glucose-stimulated insulin release and insulin content analysis. The effects of conophylline were inhibited by LY294002, which is the inhibitor of the PI3K pathway. These results suggest that conophylline plays a key role in the regulation of cell mass proliferation, maintenance of the undifferentiated state of iPMSCs and also promotes iPMSCs differentiated into insulin-producing cells.; ZHANG Hui-ruLI DanCAO HuiLü XiaoCHU Yuan-kuiBAI Yao-fuJIN Ya-pingPENG ShaDOU Zhong-yingHUA Jin-lian; 关键词：永生化胰腺腺泡细胞 WESTERN印迹

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